叢娟 李連貴 宮莉

摘要：采用植物細(xì)胞核畸變技術(shù)，研究了苯胺和硝基苯胺的濃度、染毒時(shí)間對(duì)大蒜根尖細(xì)胞的遺傳毒性效應(yīng)。結(jié)果表明，苯胺和硝基苯胺均能抑制大蒜根尖細(xì)胞的有絲分裂，誘發(fā)較高頻率的核畸變。在相同濃度或染毒時(shí)間條件下，硝基苯胺的遺傳毒性要顯著地強(qiáng)于母體化合物苯胺。當(dāng)溶液濃度為３．０ ｍｇ／Ｌ時(shí)，鄰硝基苯胺和對(duì)硝基苯胺染毒處理４ ｈ、間硝基苯胺染毒處理５ ｈ，可使大蒜根尖細(xì)胞微核率和總畸變率均達(dá)到最大值，分別為４９．１８‰、４５．６７‰、４３．１３‰和７．９０％、７．３２％、６．９８％，之后隨著溶液濃度的增大與染毒時(shí)間的延長，微核率和總畸變率呈下降趨勢(shì)，但均高于對(duì)照和苯胺處理。該研究可為苯胺、硝基苯胺環(huán)境污染的質(zhì)量評(píng)估提供技術(shù)參考。

關(guān)鍵詞：苯胺；硝基苯胺；大蒜；根尖細(xì)胞；遺傳毒性

中圖分類號(hào)：Ｏ６２３．７３１；Ｓ６３３．４；Ｑ３５５ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）06－1142-04

Genetic Toxicity of Aniline and Nitroaniline on the Root Tip Cells of Allium sativum

ＣＯＮＧ Ｊｕａｎ，ＬＩ Ｌｉａｎ－ｇｕｉ，ＧＯＮＧ Ｌｉ

（College ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００１２， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｏｘｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｉｌｉｎｅ ａｎｄ ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ ｏｎ ｒｏｏｔ ｔｉｐ ｃｅｌｌｓ ｏｆ Ａｌｌｉｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅｕｓ ａｂｅｒｒａｎｃｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｂｏｔｈ ａｎｉｌｉｎｅ ａｎｄ ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ ｃｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｍｉｔｏｓｉｓ ｏｆ ｒｏｏｔ ｔｉｐ ｃｅｌｌ ｏｆ Ａ． ｓａｔｉｖｕｍ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ ａ ｈｉｇｈｅｒ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ａｂｅｒｒａｎｃｅ． Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ ｗａｓ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ａｎｉｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｉｍｅ． Ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｔｉｐ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｆｏｒ ４ ｈ ｗｉｔｈ ｏｒｔｈｏ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ ａｎｄ ｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ ａｎｄ ５ ｈ ｗｉｔｈ ｍ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ ａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ３．０ ｍｇ／Ｌ， ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓ ｒａｔｅ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ａｂｅｒｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ of ４９．１８‰， ４５．６７‰， ４３．１３‰， ａｎｄ ７．９０％， ７．３２％， ６．９８％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ａｆｔｅｒ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓ ｒａｔｅ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ａｂｅｒｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｒｅｎｄ ａｓ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｉｍｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ， ｂｕｔ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ａｎｉｌｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ａ ｔｅｃｈｎｉｃａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｉｌｉｎｅ ａｎｄ ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ａｎｉｌｉｎｅ； ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ； Ａｌｌｉｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．； ｒｏｏｔ ｔｉｐ ｃｅｌｌｓ； ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ

苯胺類化合物是合成染料、制藥和橡膠硫化等化學(xué)工業(yè)產(chǎn)生的重要污染排放物，對(duì)環(huán)境造成了很大的影響。人體長期接觸此類化合物，會(huì)引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及其他臟器的損害，并有溶血作用，可發(fā)生溶血性貧血，大量接觸還可引起肝損害［１－４］。目前，有關(guān)苯胺、硝基苯胺對(duì)生物體毒性作用的研究多見于微生物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面的報(bào)道［２－８］，而對(duì)植物細(xì)胞的毒害作用研究較少［９，１０］，尤其是遺傳致畸方面的研究尚未見報(bào)道。試驗(yàn)以百合科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）蔥屬（Ａｌｌｉｕｍ Ｌ．）植物大蒜（Ａ. ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．）為材料，研究了苯胺、硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂及細(xì)胞核畸變的影響，闡明了苯胺、硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞的遺傳毒性效應(yīng)。以期為利用植物檢測(cè)技術(shù)來評(píng)價(jià)苯胺、硝基苯胺的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)提供技術(shù)參考。

１材料與方法

１．１材料

供試材料大蒜購于長春市歐亞超市，產(chǎn)地為山東省壽光市。供試藥劑苯胺、鄰硝基苯胺、間硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺均為分析純，配成濃度為１０ ｍｇ／Ｌ的母液，使用時(shí)進(jìn)行梯度稀釋；還有Ｃａｒｎｏｙ固定液、ＨＣｌ（１ ｍｏｌ／Ｌ）、醋酸－堿性品紅染色液。儀器主要有ＡＬ１０１電子分析天平、ＨＨ－２恒溫水浴鍋、ＭｏｔｉｃＢＡ３００顯微攝錄系統(tǒng)等。

１．２方法

將濃度為１０ ｍｇ／Ｌ的苯胺、鄰硝基苯胺、間硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺母液進(jìn)行梯度稀釋，分別配成０．３、０．５、１.0、２.0、３.0、４.0、５.0 ｍｇ／Ｌ的處理溶液，以去離子水為對(duì)照。選取大小均勻、無病害的大蒜鱗莖，在２５ ℃、避光環(huán)境里水培生根。待根長至１．０～１．５ ｃｍ時(shí)，于細(xì)胞分裂高峰期部分移入不同濃度的各處理溶液中，進(jìn)行6 h的染毒處理；另一部分移入各化合物3 ｍｇ／Ｌ的處理液中，染毒時(shí)間分別為１、２、３、４、５、６、７、８ ｈ；然后轉(zhuǎn)入去離子水中恢復(fù)培養(yǎng)２４ ｈ，Ｃａｒｎｏｙ液中固定２４ ｈ，經(jīng)ＨＣｌ（１ ｍｏｌ／Ｌ）解離、醋酸－堿性品紅染色液染色后，壓片鏡檢。參照文獻(xiàn)［１１］、［１２］的標(biāo)準(zhǔn)判定大蒜根尖細(xì)胞的微核及畸變細(xì)胞。每一處理選?。怠秱€(gè)根尖，約有５ ０００～６ ０００個(gè)細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)大蒜根尖的細(xì)胞分裂、微核及總畸變細(xì)胞數(shù)，按下列公式計(jì)算大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)、微核率及總畸變率（包括微核、雙核、染色體單橋及斷片等所有核畸變現(xiàn)象）。

分裂指數(shù)＝分裂期細(xì)胞數(shù)／觀察細(xì)胞總數(shù)×１００％；

微核率＝具有微核細(xì)胞數(shù)／觀察細(xì)胞總數(shù)×１ ０００‰；

總畸變率＝畸變細(xì)胞總數(shù)／觀察細(xì)胞總數(shù)×１００％。

所得數(shù)據(jù)均用ＳＰＳＳ １７．０統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行ｔ檢驗(yàn)分析。

２結(jié)果與分析

２．１苯胺、硝基苯胺溶液濃度對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂及畸變的影響

將生長較一致的大蒜根尖組織分別在不同濃度的苯胺和鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺溶液中染毒處理６ ｈ，恢復(fù)培養(yǎng)２４ ｈ，結(jié)果苯胺和鄰硝基苯胺、間硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺溶液對(duì)大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)、微核率、總畸變率的影響情況見圖１。由圖１Ａ可以看出，當(dāng)染毒時(shí)間一定時(shí)，在所選擇的試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，苯胺和硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂的影響表現(xiàn)較為一致，即溶液濃度越高，對(duì)細(xì)胞有絲分裂的抑制作用越強(qiáng)，細(xì)胞分裂指數(shù)也越低。統(tǒng)計(jì)分析顯示，當(dāng)苯胺溶液濃度為１．０ ｍｇ／Ｌ時(shí)，大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)降為對(duì)照的８４．０％，反映出抑制作用顯著（Ｐ＜０．０５）；當(dāng)苯胺溶液濃度達(dá)３．０ ｍｇ／Ｌ以上時(shí)，則抑制作用極顯著（Ｐ＜０．０１）。而硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂的抑制作用要強(qiáng)于苯胺，當(dāng)鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺溶液的濃度為０．３ ｍｇ／Ｌ時(shí)，其大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂的抑制作用就已經(jīng)達(dá)到了苯胺溶液濃度為１．０ ｍｇ／Ｌ時(shí)的水平，此時(shí)的鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺處理的大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)分別為對(duì)照的８３．０％、８４．８％和８７．２％，表現(xiàn)出顯著的下降趨勢(shì)（Ｐ＜０．０５）；當(dāng)鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺溶液濃度達(dá)０．５ ｍｇ／Ｌ時(shí)，大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)則分別降為對(duì)照的６９．１％、７１．４％和７５．９％，差異達(dá)到了極顯著水平（Ｐ＜０．０１）；并且隨著硝基苯胺溶液濃度的進(jìn)一步增大，細(xì)胞分裂指數(shù)大幅度下降，當(dāng)鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺溶液濃度達(dá)５．０ ｍｇ／Ｌ時(shí)，大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)分別為３．３８％、３．７２％、４．４０％，只有對(duì)照的２５．５％、２６．７％和３３．１％。由圖１Ｂ和圖１Ｃ可以看出，苯胺和硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞均有較強(qiáng)的遺傳致畸作用。經(jīng)ｔ檢驗(yàn)分析顯示，當(dāng)苯胺溶液濃度在１．０ ｍｇ／Ｌ時(shí)，大蒜根尖細(xì)胞微核率為８．６０‰，增加顯著（Ｐ＜０．０5）；大蒜根尖細(xì)胞總畸變率為１．８５％，增加極顯著（Ｐ＜０．０１）；且隨著濃度的升高，微核率、總畸變率呈升高的變化趨勢(shì)。而硝基苯胺溶液濃度在０．１～３．０ ｍｇ／Ｌ范圍內(nèi)，微核率和總畸變率隨著濃度的升高而增大；當(dāng)鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺溶液濃度在０．３ ｍｇ／Ｌ時(shí)，與對(duì)照相比微核率增加顯著（Ｐ＜０．０5），分別為９．１０‰、８．８１‰、７．５２‰；總畸變率增加極顯著（Ｐ＜０．０１），分別為１．８６％、１．６７％、１．３９％；當(dāng)鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺溶液濃度為３．０ ｍｇ／Ｌ時(shí)，微核率分別為３８．８０‰、３７．６０‰、３４．０７‰，總畸變率分別為６．８２％、６．３７％、５．６７％，均達(dá)到了試驗(yàn)范圍內(nèi)的最高值；但當(dāng)鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺溶液濃度達(dá)3．０ ｍｇ／Ｌ以上后，微核率和總畸變率則表現(xiàn)為下降趨勢(shì)，其中尤以鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺下降的幅度大，這可能是由于鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺較間硝基苯胺對(duì)根尖細(xì)胞具有更強(qiáng)的毒性效應(yīng)、導(dǎo)致死亡細(xì)胞增多所致。并且試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在５．０ ｍｇ／Ｌ濃度處理下，鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺溶液處理均有個(gè)別根尖變黑、出現(xiàn)細(xì)胞死亡的現(xiàn)象。

２．２苯胺、硝基苯胺染毒時(shí)間對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂及畸變的影響

以３．０ ｍｇ／Ｌ的苯胺和鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺溶液對(duì)大蒜根尖進(jìn)行染毒處理，改變?nèi)径緯r(shí)間，恢復(fù)培養(yǎng)２４ ｈ，結(jié)果苯胺和鄰硝基苯胺、間硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺溶液對(duì)大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)、微核率、總畸變率的影響情況見圖２。從圖２Ａ可以看出，當(dāng)溶液濃度一定時(shí)，在試驗(yàn)設(shè)定的染毒時(shí)間范圍內(nèi)，苯胺和硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂的影響表現(xiàn)較為一致，均表現(xiàn)為隨染毒時(shí)間的延長其抑制作用增強(qiáng)，使大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)降低，尤以鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺的影響顯著。當(dāng)染毒處理２ ｈ時(shí)，鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺處理的大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)分別降為對(duì)照的８２．６％、８６．７％、８８．１％，抑制作用顯著（Ｐ＜０．０5），并且隨著染毒時(shí)間的繼續(xù)延長，細(xì)胞分裂指數(shù)下降幅度增大；當(dāng)染毒時(shí)間達(dá)８ ｈ時(shí)，其大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)分別降為對(duì)照的２４．３％、２６．８％、３１．５％。從圖２Ｂ和圖２Ｃ可以看出，在試驗(yàn)設(shè)定的染毒時(shí)間內(nèi)，苯胺處理隨著染毒時(shí)間的延長，大蒜根尖細(xì)胞的微核率和總畸變率均呈升高的變化趨勢(shì)；而鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺處理則呈現(xiàn)出先升高后下降的變化趨勢(shì)，均表現(xiàn)出對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有較強(qiáng)的遺傳致畸作用。經(jīng)ｔ檢驗(yàn)分析顯示，當(dāng)染毒處理為２ ｈ時(shí)，鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺處理的大蒜根尖細(xì)胞微核率分別為１６．１２‰、１４．０５‰、１１．００‰，總畸變率分別為２．８４％、２．６７％、２．４６％，與對(duì)照相比差異均為極顯著（Ｐ＜０．０1），且隨著染毒時(shí)間的延長微核率和總畸變率大幅度升高，當(dāng)鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺染毒處理４ ｈ和間硝基苯胺染毒處理５ ｈ時(shí)，其微核率和總畸變率均達(dá)到最大值，分別為４９．１８‰、４５．６７‰、４３．１３‰和７．９０％、７．３２％、６．９８％，之后隨著時(shí)間的延長微核率和總畸變率下降。當(dāng)染毒處理達(dá)８ ｈ時(shí)，鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺、間硝基苯胺處理的微核率和總畸變率分別降為２３．４７‰、２５．２６‰、２９．２８‰和４．４４％、４．６５％、５．０２％，但仍高于苯胺處理。并且部分根尖變色甚至出現(xiàn)死亡。這表明隨著染毒時(shí)間的延長，有害物質(zhì)在大蒜根尖細(xì)胞中大量積累，毒害作用增強(qiáng)，導(dǎo)致根尖分生組織細(xì)胞死亡，使大蒜根尖細(xì)胞分裂指數(shù)、微核率和總畸變率明顯下降。

２．３苯胺和硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞遺傳毒性的綜合分析

對(duì)圖１、圖２進(jìn)行綜合分析，可以看出，在相同濃度或染毒時(shí)間條件下，硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂的抑制作用和遺傳致畸作用都要明顯地強(qiáng)于母體化合物苯胺。這可能是由于－ＮＯ２的引入，大大增加了母體結(jié)構(gòu)的親核反應(yīng)活性，改變了苯胺類化合物與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、ＤＮＡ及ＤＮＡ合成、ＤＮＡ修復(fù)、細(xì)胞分裂有關(guān)的酶類等大分子物質(zhì)的結(jié)合能力，使其毒性增大，干擾細(xì)胞內(nèi)正常的物質(zhì)代謝過程［５，６］，其結(jié)果是一方面延緩或抑制了細(xì)胞有絲分裂的進(jìn)程，使細(xì)胞分裂指數(shù)降低明顯；另一方面，引起了細(xì)胞中ＤＮＡ和染色體損傷、紡錘體出現(xiàn)紊亂以及影響細(xì)胞分裂后期細(xì)胞板的形成等，從而導(dǎo)致細(xì)胞分裂及染色體出現(xiàn)異常，產(chǎn)生雙核、微核、染色體單橋、斷片等畸變現(xiàn)象（圖３），致畸效應(yīng)明顯。

苯胺和硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞的遺傳毒性效應(yīng)與溶液濃度和染毒時(shí)間有著直接的關(guān)系。在試驗(yàn)設(shè)定的條件內(nèi)，苯胺和硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂的抑制作用均隨著溶液濃度的升高和染毒時(shí)間的延長而增強(qiáng)。在遺傳致畸方面，苯胺處理的大蒜根尖細(xì)胞微核率和總畸變率均隨著溶液濃度的升高和染毒時(shí)間的延長而增大；而硝基苯胺處理在一定濃度和一定的處理時(shí)間范圍內(nèi)，大蒜根尖細(xì)胞微核率和總畸變率隨著溶液濃度的增大和處理時(shí)間的延長而升高，但超過一定范圍后，卻呈下降變化；這是由于隨著溶液濃度的升高和染毒時(shí)間的延長，進(jìn)入細(xì)胞中的有害物質(zhì)增多，對(duì)細(xì)胞的毒害作用增強(qiáng)，導(dǎo)致死亡的根尖細(xì)胞增多所致。尤以鄰硝基苯胺、對(duì)硝基苯胺的影響最為顯著，當(dāng)溶液濃度為３．０ ｍｇ／Ｌ、染毒處理４ ｈ時(shí)，大蒜根尖細(xì)胞微核率和總畸變率均達(dá)到最大值，分別為４９．１８‰、４５．６７‰和７．９０％、７．３２％，間硝基苯胺的影響稍弱。這一結(jié)果與于瑞蓮等［６］研究的硝基苯胺對(duì)發(fā)光菌、蘇麗敏等［７］研究的硝基苯胺對(duì)大型蚤以及王月等［８］研究的硝基苯胺對(duì)牛血清白蛋白的毒性作用結(jié)果較為一致。

此外，觀察還發(fā)現(xiàn)，隨著溶液濃度的增加和染毒時(shí)間的延長，大蒜根尖細(xì)胞的畸變細(xì)胞種類也明顯增多，在畸變的細(xì)胞中尤以微核細(xì)胞居多，這可能是由于諸如染色體單橋、斷片、滯后等多種畸變現(xiàn)象在間期時(shí)均表現(xiàn)為微核所致［１１，１２］。

３小結(jié)

試驗(yàn)證明，苯胺和硝基苯胺均能抑制大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂，具有直接和間接的ＤＮＡ損傷作用，能引發(fā)較高頻率的細(xì)胞核畸變，表現(xiàn)出一定的遺傳毒性。硝基苯胺的毒性作用明顯強(qiáng)于其母體化合物苯胺，并且毒性大小與取代基位置密切相關(guān)，其排序?yàn)猷徫唬緦?duì)位＞間位。

苯胺和硝基苯胺對(duì)大蒜根尖細(xì)胞的遺傳毒性效應(yīng)與溶液濃度和染毒時(shí)間都有著直接關(guān)系，在試驗(yàn)設(shè)定的濃度和時(shí)間范圍內(nèi)，它們對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂的抑制作用均隨著溶液濃度的升高和染毒時(shí)間的延長而增強(qiáng)；在遺傳致畸方面，苯胺作用的大蒜根尖細(xì)胞微核率和總畸變率均隨其濃度升高和染毒時(shí)間延長而增大，而硝基苯胺作用的大蒜根尖細(xì)胞微核率和總畸變率是隨其濃度的增大和處理時(shí)間的延長先升高，達(dá)最大值后下降，但仍高于對(duì)照與苯胺處理。

研究結(jié)果表明，大蒜根尖細(xì)胞在其分裂高峰時(shí)期，對(duì)環(huán)境中苯胺類污染物的種類及溶液濃度和染毒時(shí)間變化極為敏感，核畸變現(xiàn)象易于觀察，在一定的污染濃度和染毒時(shí)間范圍內(nèi)，大蒜根尖細(xì)胞微核率和總畸變率與污染程度呈良好的正相關(guān)關(guān)系。且本方法材料易得、操作簡便、同步性好，結(jié)果易于統(tǒng)計(jì)和分析，不失為一種利用植物檢測(cè)技術(shù)來評(píng)價(jià)苯胺和硝基苯胺環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)的好方法。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 徐國軍． 急性苯胺中毒２２例診治體會(huì)［Ｊ］．河北醫(yī)學(xué)，２００７，１３（１２）：１２６９－１２７０．

［２］ ＲＡＳＨＭＩ Ｓ Ｎ， ＦＲＥＤＥＲＩＣＫ Ｒ Ｊ， ＧＥＯＲＧＥ Ｊ Ｌ， ｅｔ ａｌ． Ｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ ａｎｄ ｐ－ｎｉｔｒｏｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］． Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９８６，

６（４）：６１８－６２７．

［３］ ＮＡＩＲ Ｒ Ｓ，ＡＵＬＥＴＴＡ Ｃ Ｓ， ＳＣＨＲＯＥＤＥＲ Ｒ Ｅ， ｅｔ ａｌ． Ｃｈｒｏｎｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ， ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ， ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｎｅ ｉｎ ｒａｔｓ ［Ｊ］． Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ， １９９０，１５（３）：６０７－６２１．

［４］ 黃偉英，陳鴻漢，劉菲． 低濃度下４個(gè)取代苯污染物與硝酸鉛的混合對(duì)發(fā)光菌的聯(lián)合毒性［Ｊ］． 生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào)，２０１０，１９（１）：５７－６２．

［５］ 趙曉紅，牛靜萍，李興玉，等． 苯胺類化合物的遺傳毒性及其定量構(gòu)效關(guān)系［Ｊ］． 衛(wèi)生毒理學(xué)雜志，２０００，１４（４）：２１８－２２０．

［６］ 于瑞蓮，胡恭任． 苯胺類化合物對(duì)發(fā)光菌的毒性及定量構(gòu)效［Ｊ］． 華僑大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），２００５，２６（２）：１９５－１９８．

［７］ 蘇麗敏，孟慶俊，袁星． 苯胺和硝基苯胺對(duì)大型蚤（Ｄａｐｈｎｉａ ｍａｇｎａ）的聯(lián)合毒性［Ｊ］． 環(huán)境科學(xué)研究，２００２，１５（６）：４２－４４．

［８］ 王月，肖尚友，陳華，等． 硝基苯胺同牛血清白蛋白的相互作用及其毒性［Ｊ］． 環(huán)境化學(xué)，２００４，２３（５）：５２９－５３３．

［９］ 孫茜，唐紅楓，陶征宇，等． 苯胺對(duì)四種淡水藻類的毒性［Ｊ］． 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，２００９，４８（９）：２１１８－２１２０．

［１０］ 邱海源，王憲． 苯胺對(duì)海洋藻類生長的影響研究［Ｊ］． 海洋環(huán)境科學(xué)，２００４，２３（３）：３０－３２．

［１１］ 趙嬌紅，郭東林，馬軍，等． 植物微核技術(shù)在環(huán)境污染監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用［Ｊ］． 自然災(zāi)害學(xué)報(bào)，２００７，１６（５）：１２６－１２９．

［１２］ ＨＯＳＨＩＮＡ Ｍ Ｍ， ＭＡＲＩＮ－ＭＯＲＡＬＥＳ Ｍ Ａ． Ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ａｂｅｒｒａｔｉｏｎｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎ ｏｎｉｏｎ （Ａｌｌｉｕｍ ｃｅｐａ Ｌ．） ｂｙ ａ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｒｅｆｉｎｅｒｙ ｅｆｆｌｕｅｎｔ ａｎｄ ｂｙ ｒｉｖｅｒ ｗａｔｅｒ ｔｈａｔ ｒｅｃｅｉｖｅｓ ｔｈｉｓ ｅｆｆｌｕｅｎｔ［Ｊ］． Ｅｃｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓａｆｅｔｙ，２００９，７２（８）：２０９０－２０９５．