汪 波，辛躍珍

（完達(dá)山乳品有限公司，哈爾濱 150078）

引言

硒是人體必需的微量元素，它具有很強(qiáng)的生物活性，是一種很好的抗氧化劑，能消除體內(nèi)有機(jī)自由基，有抗腫瘤，防衰老，防輻射，和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多種功能。然而，硒又是一個(gè)有毒元素，當(dāng)體內(nèi)吸收了3mg就顯示其毒性[1]?；谒膫z重性，建立一個(gè)準(zhǔn)確、靈敏的測(cè)定方法是很重要的。微量硒的測(cè)定方法有：比色法、熒光法、電化學(xué)法、和原子吸收法[2]等。由于這些方法操作繁瑣，靈敏度低，在使用上受到一定限制，而斷續(xù)流動(dòng)氫化物發(fā)生—原子熒光法已經(jīng)廣泛應(yīng)用各種試樣的測(cè)定。

本文采用斷續(xù)流動(dòng)氫化物發(fā)生—原子熒光法測(cè)定 中微量硒，它具有自動(dòng)采樣、進(jìn)樣量少；線性范圍寬及選擇的掩蔽劑無(wú)毒，操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、準(zhǔn)確、快速等特點(diǎn)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 主要儀器與試劑

1.1.1 儀器

北京海光儀器公司產(chǎn)品AFS—3100

高性能硒空心陰極燈

電熱烘箱

高壓消解罐：濱?？h正紅塑料廠

1.1.2 試劑

硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：1000μg/mL（國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心）；硒標(biāo)準(zhǔn)使用液：1ng/mL；硝酸、鹽酸、30%過(guò)氧化氫、氫氧化鉀、硼氫化鉀、硫脲、抗壞血酸：優(yōu)級(jí)純—北京化工廠

實(shí)驗(yàn)中所有器皿均經(jīng)20%硝酸溶液浸泡24小時(shí)以上，再用超純水沖洗干凈晾干備用。實(shí)驗(yàn)中所用水為超純水（電阻值大于18.2MΩ）。

1.2 儀器工作條件

光電倍增管負(fù)高壓280mv；燈電流60mA；原子化器高度8mm；載氣流量400ml/min；屏蔽氣流量1000 ml/min；用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)量。

1.3 樣品預(yù)處理

高壓消解：稱取試樣牛初乳0.3-0.5g于消解罐中，加入1ml超純水、6ml硝酸，搖晃混合后放置過(guò)夜，次日加入2ml過(guò)氧化氫，100℃保持1小時(shí)，再升溫至130-140℃2-3小時(shí)，在箱內(nèi)自然冷卻室溫,用滴管將消化液洗25ml容量瓶中，用水少量多次洗滌罐，洗液合并于容量瓶中[2]，加入硫脲與抗壞血酸混合溶液5ml，并加入2ml濃鹽酸，用超純水定容至刻度，混勻備用；同時(shí)做兩個(gè)試劑空白。加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)前處理與檢測(cè)樣品相同，只是多加入適量標(biāo)樣于樣品中，然后再消化。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制

分別準(zhǔn)確吸取1.0，0.5，0.2，0.15，0.1，0.0ml硒標(biāo)準(zhǔn)使用液（質(zhì)量濃度為1000μg/mL）于25ml容量瓶中，加入2.0ml鹽酸，5.0ml質(zhì)量濃度50g/l的硫脲-抗壞血酸混合溶液，用超純水定容，混勻，備用。

1.5 還原劑及載流液的配制

還原劑（質(zhì)量濃度為14g/l）：稱取7.0g硼氫化鈉，2.0g氫氧化鈉，用超純水溶解于500ml容量瓶中，定容，混勻，用時(shí)現(xiàn)配。

載流液（體積分?jǐn)?shù)為5%）：取50ml鹽酸于200ml超純水的燒杯中，再轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中，用超純水定容，混勻，備用。

1.6 測(cè)定

設(shè)定好儀器的最佳測(cè)定條件，儀器先自動(dòng)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后轉(zhuǎn)入樣品空白及樣品溶液的測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 壓力消解試劑配比的確定

首先用單因素法考察消解試劑配比對(duì)加標(biāo)后樣品中硒含量的影響，在加標(biāo)量相同的情況下，有下表可見(jiàn)，選擇6ml硝酸與2ml過(guò)氧化氫時(shí)樣品檢測(cè)出硒的質(zhì)量分?jǐn)?shù)都大于硝酸與過(guò)氧化氫體積配比為3：2時(shí)，因此，壓力消解試劑的體積配比定為6:2。

表1 壓力消解試劑配比對(duì)結(jié)果的影響 (單位mg/kg)

2.2 原子熒光條件的選擇

2.2.1 載流液酸度的選擇

由重金屬離子生成金屬氫化物需要一定的酸度，載流液鹽酸體積分?jǐn)?shù)過(guò)低就會(huì)與緩沖液氫氧化鈉發(fā)生中和反應(yīng)，不能將硼氫化鈉的活性氫全部置換出來(lái)；鹽酸體積分?jǐn)?shù)過(guò)高則會(huì)腐蝕原子熒光儀的塑料膠管，造成管路泄露，進(jìn)而影響使用數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，分別嘗試測(cè)試3%-20%的鹽酸于標(biāo)準(zhǔn)液熒光強(qiáng)度的關(guān)系，隨鹽酸體積分?jǐn)?shù)的增大，硒的熒光強(qiáng)度會(huì)先增大再逐漸趨于穩(wěn)定，經(jīng)過(guò)對(duì)比及實(shí)驗(yàn)論證，本文中鹽酸體積分?jǐn)?shù)為5%時(shí)為最佳。

2.2.2 還原劑的質(zhì)量濃度

由于硼氫化鈉的反應(yīng)活性很高，常溫下與水即能發(fā)生反應(yīng)，作為體系中的氣態(tài)物發(fā)生的還原劑，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的靈敏度、準(zhǔn)確度、都有非常大的影響，濃度低時(shí)氣態(tài)物難形成，濃度高時(shí)產(chǎn)生過(guò)多的氫，會(huì)引起氣液相干擾，降低靈敏度，測(cè)定質(zhì)量濃度范圍10g/l-20g/l的硼氫化鈉對(duì)標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度的影響，得出硼氫化鈉質(zhì)量濃度為14g/l時(shí)為最佳條件。

2.2.3 線形范圍

硒在質(zhì)量濃度為0-200ng/ml范圍內(nèi)呈線形，回歸方程為y=79.2685x-10.3444，相關(guān)系數(shù)為0.9992，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3 方法檢出限

用空白標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行20次硒熒光強(qiáng)度的連續(xù)測(cè)定，根據(jù)對(duì)應(yīng)的硒工作曲線斜率，儀器自動(dòng)求出該方法硒的檢出限為0.1ng/ml。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

分別配制低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度硒標(biāo)液，每個(gè)質(zhì)量濃度測(cè)定6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果如表2所示。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn)

應(yīng)用本方法對(duì) 進(jìn)行低、中、高不同濃度加標(biāo)回收檢測(cè)，結(jié)果如表3所示。

表2 精密度實(shí)驗(yàn)

表3 回收率實(shí)驗(yàn)

由表3可以看出，此原子熒光光度法測(cè)得的硒加標(biāo)回收率約在88%-102%之間。

3 討論

（1）本文應(yīng)用AFS—3100型雙道原子熒光光度計(jì)測(cè)定牛初乳中硒，測(cè)試了各種最佳分析條件，在嚴(yán)格的質(zhì)量控制下，可達(dá)到滿意的測(cè)定結(jié)果。

（2）用硝酸：過(guò)氧化氫：超純水（體積比6：2：1）的比例消解樣品，在最佳儀器條件下，能達(dá)到理想的效果。

（3）選擇硫脲-抗壞血酸混合溶液做掩蔽劑，替代鐵氰化鉀掩蔽劑，在酸性條件下，鐵氰化鉀易產(chǎn)生劇毒物質(zhì)氫氰酸，危害人體健康，存在安全隱患。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)分析和測(cè)定條件優(yōu)化，建立的原子熒光光譜法分析牛初乳中硒的方法，具有安全、靈敏可靠、簡(jiǎn)單快捷、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)。便于在乳制品行業(yè)中推廣。

[1] 氫化物發(fā)生熒光法測(cè)定天然礦系水中的微量硒【J】分析實(shí)驗(yàn)室，2000.19（3）：87-88

[2] 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中硒的測(cè)定GB 5009.93—2010

[3] 原子光譜樣品處理技術(shù).化學(xué)工業(yè)出版社，化學(xué)與應(yīng)用化學(xué)出版中心。2006.7