袁明生，易旺云

地中海貧血 (Thal，地貧)是由于珠蛋白基因缺失或突變，導(dǎo)致珠蛋白鏈合成障礙的遺傳性疾病，是一種“可防難治”的遺傳性疾病，重型地貧的患者終生需要輸血和去鐵治療，根治的方法只有進行骨髓移植，手術(shù)難度大且風(fēng)險系數(shù)高;如果能在產(chǎn)前做好地貧篩查和診斷，就可以將下一代患重型地貧的機會減至最低。廣東地區(qū)既是地貧的高發(fā)地之一，同時又是葡萄糖－6－磷酸脫氫酶 (G6PD)缺乏癥的高發(fā)地區(qū)之一，中山地區(qū)已將地貧的篩查和G6PD活性檢測作為產(chǎn)前免費檢驗項目。國內(nèi)已有許多報道顯示:地貧患者的G6PD活性增高，G6PD活性測定可以應(yīng)用于地貧的初篩［1－2］。本文回顧性分析了229例樣本，綜合評價紅細胞參數(shù)中紅細胞平均體積(MCV)和6PD酶活性檢測在地貧初篩中的聯(lián)合應(yīng)用價值［3－4］，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年我院進行地貧基因檢測患者229例的血清標(biāo)本，年齡20～50歲。通過基因檢測，將α－地貧患者作為α－地貧組，共94例;將β－地貧患者作為β－地貧組，共53例;兩者均有的患者作為α+β－地貧組，共16例，以上統(tǒng)稱地貧組，共163例。選取無地貧基因而紅細胞參數(shù)正常的人群為對照組，共66例。所有患者排除G6PD缺乏、缺鐵和其他原因引起的增生性貧血。

1.2 儀器和試劑 G6PD活性定量檢測儀器為日立7170A生化分析儀，試劑由廣州科方生物技術(shù)有限公司提供，測定方法:液體雙試劑、速率法，選用廣州科方生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的室內(nèi)質(zhì)控;紅細胞參數(shù)MCV檢測儀器為日本Sysmex三分類血液分析儀KX－21，試劑由中山市創(chuàng)藝生化工程有限公司提供，測定方法為鞘流電阻抗法，選用Sysmex室內(nèi)質(zhì)控;地貧基因檢測送廣東省中山市人民醫(yī)院檢驗中心進行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR)分子遺傳學(xué)測定。

1.3 方法及參考范圍 肘正中靜脈采血3～4 ml于肝素抗凝劑真空管檢測G6PD活性，將肝素抗凝全血樣本4 000 r/min(相對離心力為3 130×g)離心5 min后吸取20μl壓積紅細胞到1 ml裂解液中，紅細胞溶解后用日立7170A全自動生化分析儀25 min內(nèi)測定完畢G6PD活性，按G6PD試劑說明書進行參數(shù)設(shè)定，G6PD參考范圍:6.7～14.0 U/gHb;2 ml于EDTA－K2真空管內(nèi)進行MCV檢測，參考范圍:80～100 fl;3～4 ml于無抗凝劑真空管送中山市人民醫(yī)院檢驗中心進行PCR地貧基因檢測。

檢測方法包括單項檢測:MCV、G6PD檢測;兩項并聯(lián)(前兩項任一陽性為并聯(lián)陽性);兩項串聯(lián) (前兩項均為陽性為串聯(lián)陽性)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理。均數(shù)比較采用t檢驗;率的比較采用χ2檢驗;將α－地貧組、β－地貧組、α+β－地貧組及對照組資料錄入SPSS 13.0統(tǒng)計軟件 (MCV和G6PD.sav)，采用兩獨立樣本非參數(shù)檢驗。采用Binary Logistic進行逐步Logistic回歸分析產(chǎn)生各個體預(yù)測概率的新變量PRE。以新變量PRE為檢驗變量，診斷結(jié)果為狀態(tài)變量，作ROC曲線分析，計算曲線下面積 (AUC)。以p＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 地貧組與對照組G6PD活性和MCV結(jié)果比較 α－地貧組、β－地貧組及α+β－地貧組G6PD活性均高于對照組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (t值分別為3.89、7.46、3.71，均 P=0.000);α－地貧組、β－地貧組以及α+β－地貧組MCV均顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (t值分別為10.90、11.21、5.18，P=0.000，見表1)。

2.2 應(yīng)用非參數(shù)檢驗ROC曲線評價G6PD、MCV和兩項聯(lián)檢對地貧的診斷效能 以MCV、G6PD和兩項聯(lián)檢為檢驗變量，以診斷結(jié)果為狀態(tài)變量，利用SPSS 13.0中的非參數(shù)檢驗ROC曲線功能繪制ROC曲線圖，ROC曲線計算各指標(biāo)曲線下面積(AUC):MCV、G6PD和兩項聯(lián)檢分別分0.905、0.757和0.907(95%可信區(qū)間均不包括參考線面積0.5，見圖1)。

2.3 以 MCV ＜80 fl［6］、G6PD ＞14.0 U/gHb作為診斷地貧的最佳臨界值，MCV、G6PD、兩項并聯(lián)和串聯(lián)診斷地貧的靈敏度分別為99.4%、37.4%、99.4%和37.4%，特異度分別為47.0%、93.9%、43.9%和97.0%，MCV與兩項并聯(lián)的靈敏度和特異度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (χ2=0.075，P＞0.05)，G6PD與兩項串聯(lián)的靈敏度和特異度比較，差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義 (χ2=0.043，P＞0.05)，MCV診斷地貧的靈敏度顯著高于兩項串聯(lián)的靈敏度 (χ2=159.7，p＜0.01)，兩項串聯(lián)診斷地貧的特異度顯著高于MCV的特異度 (χ2=159.7，p＜0.01，見表2)。

2.4 地貧基因突變類型及其構(gòu)成比 在163例地貧陽性樣品中，其中α－地貧患者占57.7%，β－地貧患者占42.3%，在α－地貧基因型者又以 －SEA/aa基因型為主，占44.6%，－SEA(東南亞型缺失)攜帶者;在β－地貧基因型者又以41－42M/N基因型為主，占13.5%;α－地貧合并β－地貧占9.8%(見表3)。

圖1 MCV、G6PD和兩項聯(lián)合診斷地貧的ROC曲線Figure 1 The ROC curves of MCV，G6PD and two joint diagnosis to the thalassanemia

表1 各組G6PD活性和MCV檢測結(jié)果分析Table 1 The analysis of G6PD activity and MCV test results

表1 各組G6PD活性和MCV檢測結(jié)果分析Table 1 The analysis of G6PD activity and MCV test results

組別 例數(shù) G6PD(U/gHb) MCV(fl)α－地貧組94 12.54±3.53 69.41±4.95 β－地貧組 53 14.15±2.97 65.97±4.11 α+β－地貧組 16 12.80±1.75 69.24±3.29地貧組 163 13.09±3.29 68.28±4.80對照組66 10.63±2.18 82.58±10.13

表2 MCV、G6PD和兩項聯(lián)檢診斷地貧結(jié)果比較〔n(%)〕Table 2 Thecomparative statement of MCV，G6PD and two joint diagnosis to the thalassanemia

表3 地貧基因突變類型及構(gòu)成比Table 3 The thalassemia mutations type and constitute ratio

3 討論

地貧是自體隱性遺傳疾病，由于α珠蛋白基因或β珠蛋白基因缺失，使血紅蛋白中的一種或一種以上的珠蛋白鏈缺如或不足所致。廣東省是地貧的高發(fā)區(qū)之一，但用于確診地貧的基因檢測由于操作繁瑣、費用高、實驗條件要求苛刻，使其難以廣泛應(yīng)用于臨床，不能作為地貧診斷的首選，因此地貧的篩查就顯得尤為重要，篩查的方法有MCV和血紅蛋白電泳等［5－7］。近年來有許多報道，紅細胞G6PD活性的增高可以作為各類地貧的輔助診斷［8－9］。

本研究顯示，各地貧組G6PD活性均較對照組增高，G6PD活性可用于地中海貧的診斷，ROC曲線分析本次研究顯示:G6PD活性診斷地中海地血ROC曲線下面積為0.757，也支持G6PD活性可用于地中海貧的診斷，與國內(nèi)的研究結(jié)論相同。

眾所周知，MCV作為地貧初篩方法已使用多年，本研究數(shù)據(jù)與許多國內(nèi)研究一致［10－12］，其中MCV診斷地貧的ROC曲線下面積為0.905，對小細胞性貧血如:地貧、缺鐵性貧血等有診斷意義，但需通過血紅蛋白電泳、游離鐵測定、轉(zhuǎn)鐵蛋白測定等實驗進行鑒別診斷。

作為篩選指標(biāo)，應(yīng)有較高的靈敏度，以減少漏診［13－14］，本項研究表明:MCV、G6PD、兩項并聯(lián)和兩項串聯(lián)診斷地貧的靈敏度分別為99.4%、37.4%、99.4%和37.4%，MCV、MCV與G6PD活性兩項并聯(lián)可作為篩選地貧指標(biāo)，靈敏度高，均為99.4%，其漏診率最低，均為0.6%，因兩者靈敏度相同或相近，在地貧的初篩實驗中，MCV與G6PD兩項并聯(lián)應(yīng)用的價值跟單一MCV指標(biāo)無差異，無需并聯(lián)篩選。而兩項串聯(lián)的靈敏度低，容易漏診，漏診率62.6%，不符合作為篩查指標(biāo)的要求。因此，在地貧的初篩實驗中MCV與G6PD聯(lián)合應(yīng)用的篩選價值不大，但如果MCV＜80 fl的同時，G6PD同時升高 (串聯(lián))，在排除缺鐵性貧血等增生性貧血的情況下，診斷地貧的特異度為97.0%，遠高于MCV單獨指標(biāo)的特異度(47.0%)，地貧的可能性愈大。本組資料顯示:地貧主要是以α－地貧為主，而血紅蛋白電泳對α－地貧篩選價值有限，如果MCV＜80 fl的同時，G6PD同時升高 (串聯(lián))，而血紅蛋白電泳正常，則要考慮可能是α－地貧。因此，G6PD活性可作為α－地貧輔助篩選指標(biāo)。

綜上所述，在地貧的初篩試驗中，MCV與G6PD活性并聯(lián)的價值與MCV單項相近。但兩項串聯(lián)應(yīng)用，可提高診斷地貧的特異度。

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