劉艷玲 許 波 陳 峻 王 英

陜西博森生物制藥股份集團有限公司，陜西 西安 710118

雙葛膠囊由葛根、葛花等組成，具有提高免疫力、抗氧化的功效。近年來的研究表明，異黃酮類化合物是葛根的主要有效活性成分，包括苷和苷元。葛花中主要含有葛花甙 (kakkalide)，葛花異黃酮等。該方法采用紫外分光光度法測定葛根總黃酮的含量，簡單，方便，重現(xiàn)性好，可有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津UV－2550紫外可見分光光度計;精度等級±2nm。

1.2 試藥 葛根素對照品 (中國生物制品檢定所，110752－200912);雙葛膠囊樣品 (自制，批號:20090921，20090923，20090925);乙醇為色譜純，實驗試劑均為分析純、實驗用水為注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測波長的確定

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取80℃干燥至恒重的葛根素對照品5mg，置25ml量瓶加30%乙醇溶解，并定容至刻度，搖勻;備用。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入30%乙醇100ml，密塞，稱定重量;加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過;精密量取續(xù)濾液1.0ml，置100ml量瓶中加30%乙醇稀釋至刻度，搖勻;備用。

2.1.3 輔料空白溶液的制備 取未加葛根提取物和葛花提取物的輔料溶液0.2g，精密稱定，操作同2.1.2。

2.1.4 波長的確定 在200～800nm間紫外掃描上述對照品溶液、供試品溶液、輔料空白溶液，圖譜附后。對照品溶液和供試品溶液均在250nm處有最大吸收，且光譜圖基本相同;輔料空白溶液在250nm的波長處無干擾，所以確定以250nm為測定波長。

2.2 精密度試驗

重復性試驗

取本品0.2g，精密稱定，操作同2.1.2。照分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄Ⅴ A)在250nm的波長處，如此重復測定6次，試驗結(jié)果見表1。

表1 重復性試驗

2.2.2 中間精密度試驗

取本品，分別由不同試驗人員，在不同日期，取樣品操作同2.1.2，制得供試品溶液。取對照品操作同2.1.1作為對照品溶液。取上述兩種溶液照分光光度法 (中國藥典2010年版一部附錄Ⅴ A)，以30%乙醇為空白，在250nm的波長處測定吸收度，計算，即得。試驗結(jié)果見表2。

表2 中間精密度試驗

由上可知，本法精密度良好。

2.3 供試品溶液穩(wěn)定性試驗

精密稱取本品0.2g，操作同2.1.2制得供試品溶液;照分光光度法 (中國藥典2010年版一部附錄Ⅴ A)在250nm的波長處分別于0、1、2、3、4、5小時分別測定吸收度。試驗結(jié)果顯示供試品溶液在5小時內(nèi)穩(wěn)定性較好，見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗

圖1 葛根總黃酮溶液濃度 (μg/ml)

2.4 線性關(guān)系

精密稱取經(jīng)80℃干燥至恒重的葛根素對照品5mg，置25ml量瓶加30%乙醇溶解，并定容至刻度，搖勻。精密量取0.2、0.4、0.5、0.6、0.8ml，置10ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，搖勻，照分光光度法 (中國藥典2010年版一部附錄ⅤA)在250nm的波長處測定吸收度，見表4及圖1。

表4 線性關(guān)系

以葛根素濃度C對吸收度A進行線性回歸，得回歸方程:A=0.0777C﹢0.0243(相關(guān)系數(shù)r=0.9995)即為本品含量測定標準工作曲線。

試驗表明葛根素溶液在4.096～16.384μg/ml濃度范圍內(nèi)其濃度與吸收度具有良好的線性關(guān)系。

表5 加樣回收試驗

2.5 加樣回收試驗

精密稱取已知總黃酮含量的本品5份，加入葛根素對照品，按樣品溶液制備方法處理，制成加樣回收供試品液，按標準曲線測定方法測定，在250nm的波長處測定吸收度，計算。結(jié)果見表5。

測定結(jié)果說明，本方法回收率為97.5%，RSD為0.82%，符合相關(guān)規(guī)定。

3 討論

3.1 黃酮是一大類以苯色酮環(huán)為基礎(chǔ)的酚類化合物。采用薄層掃描法、高效液相色譜法分離效果不理想，背景噪音大，操作繁瑣，且測定結(jié)果誤差較大。黃酮類紫外吸收比較強，所以選用紫外分光光度法測定本品的含量。

3.2 由于處方中成分復雜，經(jīng)方法學考察可行，且操作性強。本方法可為其它含有葛根、葛花的中成藥的含量測定提供參考。

［1］中華人民共和國藥典 (一部) ［S］.北京:化學工業(yè)出版社，2010:312.

［2］王言才，段金廒，華永慶，宿樹蘭.不同品種葛根中葛根素及總黃酮的含量測定［J］.時珍國醫(yī)國藥，2008，19(1):132－133.

［3］劉逢芹，李宏建，周揚星，李貴海.不同采集時間野葛不同部位總黃酮和葛根素含量比較［J］.植物資源與環(huán)境學報，2006，15(2):79－80.