崔克,江甜

（海南省動物疫病預(yù)防控制中心，海南海口 570203）

豬流感疫苗研究進(jìn)展

崔克,江甜

（海南省動物疫病預(yù)防控制中心，海南?？?570203）

豬流行性感冒(SI）簡稱豬流感，是由正黏病毒科A型流感病毒屬的豬流感病毒(SIV）引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性呼吸道傳染病，臨床以突發(fā)、高熱、咳嗽、呼吸困難、反復(fù)發(fā)作、發(fā)病率高、死亡率低為特征。目前導(dǎo)致豬發(fā)病的主要有人源H3N2、經(jīng)典豬H1N1和類禽源H1N13種亞型，在我國主要為H1N1、H3N2兩種亞型。豬流感病毒是豬呼吸道的常見病原，而且不斷通過抗原漂移和轉(zhuǎn)變實現(xiàn)進(jìn)化，導(dǎo)致亞型眾多，難以根除。同時豬流感是一種免疫抑制性疾病，經(jīng)常并發(fā)或繼發(fā)其他病毒或細(xì)菌的感染。豬流感病毒既可以感染人，也可也感染禽，因此，SIV不僅對養(yǎng)殖業(yè)危害嚴(yán)重，還有著重要的公共衛(wèi)生意義。

對豬流感的防控重點(diǎn)是預(yù)防為主，同時應(yīng)加強(qiáng)綜合管理措施。疫苗免疫是防控豬流感發(fā)生和流行的最佳措施。目前已經(jīng)商品化和正在研發(fā)的豬流感疫苗包括豬流感減毒活疫苗、滅活疫苗、亞單位基因工程疫苗、基因重組活載體疫苗和核酸疫苗等?，F(xiàn)就分別介紹，做一綜述。

一、減毒活疫苗

毒力減弱主要通過使流感病毒冷適應(yīng)的手段，但處于其安全性的考量，各個國家至今仍沒有批準(zhǔn)其臨床使用。此外，采用基因工程技術(shù)獲得NS-1流感病毒突變?nèi)毕葜暌部捎行p弱流感病毒毒力。Solorzano等以NS-1基因部分缺失的H3N2 SIV免疫豬后，具有對同源病毒的完全保護(hù)和非同源病毒的部分保護(hù)。目前，已有商品化人流感和馬流感減毒疫苗銷售，但至今并沒有商品化的豬流感減毒活疫苗銷售。

二、滅活疫苗

豬流感全病毒滅活疫苗的制備一般是用甲醛滅活禽流感病毒雞胚增殖的尿囊液， 并輔以佐劑制成的油乳劑疫苗， 制備工藝簡單，具有有安全性好、免疫原性強(qiáng)、免疫效果確實、免疫持續(xù)時間長等優(yōu)點(diǎn)，能有效降低病毒感染后的復(fù)制和散播。目前， 該類疫苗在國外已實現(xiàn)商品化供應(yīng)， 如Intervet公司的HINl亞型豬流感—豬肺炎支原體滅活疫苗和H1N1亞型一H3N2亞型豬流感滅活疫苗等。國內(nèi)哈爾濱獸醫(yī)研究所、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)等單位也在豬流感油乳劑滅活疫苗研制方面做了大量工作，但同時也存在一些問題：SIV的變異速度較快，傳統(tǒng)疫苗的研制卻明顯滯后，交叉保護(hù)能力有限，對免疫耐受性動物及幼年或老年動物免疫效果不佳；經(jīng)免豬只不僅產(chǎn)生針對于表面蛋白HA 和NA 的抗體， 而且還產(chǎn)生針對流感病毒內(nèi)部蛋白M1和NP 的抗體，常規(guī)的血清學(xué)方法難以鑒別診斷自然感染和疫苗接種豬，不利于流感病毒的流行病學(xué)監(jiān)測；會受到母源抗體的影響導(dǎo)致免疫失??；處于生物安全方面的考慮，利用雞胚增殖病毒，在增加成本的同時，亦會對環(huán)境造成污染。

三、亞單位基因工程疫苗

亞單位基因工程疫苗是將HA基因連接到表達(dá)載體上，利用酵母表達(dá)系統(tǒng)或哺乳類動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)相應(yīng)的蛋白，表達(dá)產(chǎn)物在純化后作為疫苗用于免疫?；蚬こ瘫磉_(dá)系統(tǒng)顯著提高了外源蛋白的表達(dá)水平，從而可以獲得大量的抗原蛋白。由于疫苗中只包含有流感病毒的表面蛋白，產(chǎn)生的抗體不針對病毒的內(nèi)部蛋白，從而利于流感病毒的血清學(xué)調(diào)查和鑒別診斷。亞單位疫苗可以有效避免利用全病原體生產(chǎn)疫苗而導(dǎo)致的生物安全風(fēng)險，安全性良好，但難以維持或恢復(fù)天然蛋白的空間結(jié)構(gòu)，同時蛋白純化過程復(fù)雜、成本相對較高，而且只包含有病毒的部分蛋白，與傳統(tǒng)疫苗相比存在存在免疫原性低，使用劑量大，免疫水平差等缺點(diǎn)，因此這類疫苗的生產(chǎn)工藝還需進(jìn)一步改進(jìn)。

四、核酸疫苗

核酸疫苗亦稱DNA疫苗，可同時誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫產(chǎn)生長期保護(hù)效果， 且對不同血清型的毒株具有交叉保護(hù)性， 因而受到研究者青睞。它是利用重組DNA技術(shù)將SIV的HA基因克隆到真核表達(dá)載體中，并將其直接導(dǎo)人體內(nèi)，使HA蛋白經(jīng)過內(nèi)源性表達(dá)遞呈給免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。

DNA 疫苗具有容易操作、易于構(gòu)建、穩(wěn)定、安全的優(yōu)點(diǎn)，且沒有毒力返祖和不同毒株間重組等風(fēng)險。利用同一種載體，可以構(gòu)建表達(dá)不同蛋白的核酸疫苗，具有用量少、免疫反應(yīng)全面的優(yōu)點(diǎn)，但是目前，核酸疫苗的研制和開發(fā)才剛剛起步，載體在動物體內(nèi)表達(dá)效率不高，免疫效力低，降低了核酸疫苗的免疫效果。

豬對哺乳類動物流感病毒和禽流感病毒均易感，不同動物來源的流感病毒對豬群的感染，不僅直接增加了SIV亞型的種類，同時促使各種亞型SIV呈現(xiàn)出越來越復(fù)雜的遺傳多樣性。隨著時間的推移，由不同來源的基因組成的重排病毒在歷經(jīng)自然選擇之后，必然會向著最有利于病毒生存和傳播的基因組合發(fā)展，而各種“新”流感病毒的出現(xiàn)和流行，常伴隨著病毒傳播性和致病性的改變。因此，可誘導(dǎo)豬體產(chǎn)生對不同抗原變異毒株或者不同亞型病毒有交叉保護(hù)的疫苗，無疑是豬流感疫苗研制的主流方向。對流感病毒感染后免疫學(xué)的研究表明，機(jī)體感染后，并不是體液中的抗體水平，而是黏膜免疫和細(xì)胞免疫水平與攻毒保護(hù)有著直接的關(guān)聯(lián)。有研究表明，病毒攻毒后，只在黏膜表面產(chǎn)生免疫記憶反應(yīng)，而不是體液免疫。因此，能夠同時誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生黏膜免疫、細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)的可復(fù)制性疫苗，如弱毒疫苗、活載體疫苗成為近年來豬流感疫苗的研究熱點(diǎn)。據(jù)美國新聞媒體報道，一個由美、英、法等多國科學(xué)家組成的國際研究團(tuán)隊宣布，已經(jīng)繪出了首個豬的基因組草圖，這項成就將提升豬繁殖、豬肉營養(yǎng)等方面的研究，也有助于豬流感疫苗等涉及人類健康技術(shù)的研發(fā)。

五、基因重組活載體疫苗

活載體疫苗克服了滅活疫苗和亞單位疫苗的不足，同時具有弱毒疫苗的一切優(yōu)點(diǎn)。其是將病毒的保護(hù)性抗原基因重組到載體病毒中，接種機(jī)體后，隨著載體病毒的復(fù)制增殖，外源抗原基因?qū)⒉粩啾磉_(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)。目前常用來制備流感病毒活載體疫苗的病毒有：痘病毒、皰疹病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒等。

近年來，國內(nèi)也有大量SIV活載體疫苗的研究報告，相比而言，國外相關(guān)研究開展的較為成熟，Wesley R D等用人腺病毒5型作為載體表達(dá)豬流感病毒H3N2亞型的HA和NP研制的載體疫苗，可有效避免母源抗體的影響， 對仔豬有很好的保護(hù)作用。Epstein SL等用人腺病毒5型作為載體表達(dá)A型流感病毒的保守NP蛋白， 對小鼠進(jìn)行疫苗接種， 表明疫苗可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高滴度抗體和大量細(xì)胞因子抵抗病毒攻擊，同時對H5N1 亞型流感病毒也有保護(hù)效力，為預(yù)防變異毒株提供了可行途徑。

活載體疫苗克服了滅活疫苗和亞單位疫苗的不足，利用的是體內(nèi)表達(dá)系統(tǒng)合成免疫原，所表達(dá)的蛋白更加真實，同時因為病毒自身有復(fù)制能力，所以只需極少劑量的接種就可以產(chǎn)生足夠的外源蛋白。具有免疫用量小，接種方法簡便，生產(chǎn)工藝簡單，生產(chǎn)條件易于控制等特點(diǎn)。此外，它還具有無需添加佐劑，生產(chǎn)成本低，抗體產(chǎn)生迅速，免疫持續(xù)時間長以及免疫效果好等優(yōu)點(diǎn)。重組活載體疫苗可以同時啟動體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，不會出現(xiàn)毒力返強(qiáng)，而且產(chǎn)生的保護(hù)性反應(yīng)同時針對載體病毒和外源蛋白的來源病毒，所以可以達(dá)到一針預(yù)防多種疾病的目的。

略）