王文化，張 杰，施務務

壯骨膠囊主要由當歸、川芎、肉桂、地龍、丹參、冰片等15味中藥組成，具有活血化瘀、行氣止痛、補益肝腎、強筋壯骨。用于股骨頸骨折手術后股骨頭缺血性壞死，骨壞死中晚期等癥。為了控制制劑的質量，對冰片、當歸、川芎進行薄層鑒別，建立了高效液相色譜法測定本品中肉桂酸的含量。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀:Agilent 1100;日本島津SPD-10A VP、LC-10AT VP;超聲清洗機(JCX-300 W，山東濟寧超聲電子儀器廠)。

1.2 試劑 當歸對照藥材、川芎對照藥材、冰片、肉桂酸對照品(均購自中國藥品生物制品檢定所，批號分別為:120927-200310、120918-200507、110743-200303、110786-200403)，硅膠G(青島海洋化工廠)，甲醇為色譜純，水為自制超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 冰片的鑒別［1］取本品內容物以及按處方制法制的缺冰片的陰性對照各1 g，加乙醚5 ml，超聲處理5 min，濾過，濾液作為供試品溶液;另取冰片對照品適量，加乙醚制成每毫升含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液4 μl，對照品溶液2 μl，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯(19:1)為展開劑，用展開劑飽和15 min，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，105℃烘干至斑點清晰。供試品色譜中，檢出冰片。陰性無干擾。見圖1。

圖1 冰片薄層色譜

2.1.2 當歸、川芎的鑒別［2］取本品內容物以及按處方制法制的缺當歸以及川芎的陰性對照品各2 g，加乙醚30 ml，超聲處理20 min，濾過，濾液低溫揮干，殘渣加乙醇2 ml 使溶解，作為供試品溶液;另取當歸、川芎對照藥材適量，加乙醚15 ml，超聲處理20 min，濾過，濾液揮干，殘渣加乙醇溶液1 ml 使溶解，作為對照藥材溶液。吸取上述4 種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以醋酸乙酯－石油醚(60℃～90℃)(15:85)為展開劑，用展開劑飽和15min，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，檢出當歸及川芎。陰性對照無干擾。見圖2。

2.2 含量測定［3-5］

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱:依利特 Hypersil(ODS 25 μm，4.6 mm×250 mm);以甲醇－0.1%磷酸溶液(55:45)為流動相;檢測波長為278 nm;柱溫為室溫;流速為1 ml/min;進樣量為20 μl。

圖2 當歸薄層色譜

2.2.2 對照品液的制備 精密稱取肉桂酸對照品適量，加甲醇制成每1 ml 含6 μg 的溶液，即得。

2.2.3 供試品液的制備 取裝量差異項下本品內容物，研細，取適量，精確稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25 ml 甲醇，密塞，稱量定重，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，濾過(0.45 μm 濾膜)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方制備不含肉掛酸的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得。

2.2.5 方法學考察 專屬性試驗:照上述色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液進行進樣測定，色譜圖見圖3。肉桂酸的保留時間在17.5 min，陰性樣品溶液對測定無干擾。

圖3 A:肉桂酸對照品 B:壯骨膠囊樣品 C:陰性樣品

2.2.5.1 線性關系考察 精密吸取不同質量濃度的對照品溶液，分別進行測定，以峰面積對進樣量進行線性回歸處理，得回歸方程為:Y =1383113.3 X－71972.90，R =0.9999(n =5)。結果表明肉桂酸進樣量在24.56～172.8 ng 范圍內與峰面積積分值具有良好線性關系。

2.2.5.2 精密度試驗 精密吸取對照品溶液，連續(xù)進樣6 次測定。依法測定肉桂酸峰面積，結果其RSD 值為1.67%(n =6)，表明精密度良好。

2.2.5.3 穩(wěn)定性試驗 吸取同一批供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h 進樣，依法測定肉桂酸峰面積，結果RSD 值為1.14%。表明供試品溶液穩(wěn)定。

2.2.5.4 重復性試驗 取同一批號樣品，平行測定6 次。結果RSD=2.02%(n=6)。表明方法重復性良好。

2.2.5.5 回收率試驗 取已測知含量的樣品6 份，精密稱定，精密加入一定量肉桂酸對照品。照上述供試品制備方法制備供試品溶液，按含量測定方法測定肉桂酸含量，并計算回收率，結果平均回收率為99.80%，RSD 為1.15%。

2.2.6 樣品含量測定 按上述色譜條件依法測定3 批樣品中肉桂酸的含量，結果3 批樣品中肉桂酸的含量分別為:0.2196，0.2525，0.2722 mg/g。

3 討論

本方為中藥復方制劑，本文所建立的冰片、當歸、川芎的薄層鑒別方法，專屬性強、操作簡便、方法重現(xiàn)性良好等優(yōu)點。由于當歸和川芎含有主要共性成分，因此薄層色譜鑒別陰性對照采用雙缺味，可為含當歸和川芎的制劑的色譜鑒別提供方法和依據(jù)。

冰片在制劑過程中容易揮發(fā)而影響含量，對進行了薄層鑒別，有利控制制劑的質量和監(jiān)控生產工藝。

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