曾令軍 王保龍 馬筱玲 王 斌 賀學嬌 丁邦勝

安徽省立醫(yī)院檢驗科，安徽 合肥 230001

隨著血細胞分析儀在各級醫(yī)院的廣泛應用，血小板的準確計數是臨床醫(yī)生和檢驗人員共同關注的問題，尤其是巨大血小板（Giant platelet）的準確計數，由于受目前大多數血小板分析儀的計數原理和功能的限制，多無法準確計數。而過去認為罕見或者少見的巨大血小板，隨著檢測手段的多樣化和血細胞分析儀的普及，在孕婦、心血管疾病、血液病等患者中常被檢出。因此，迫切需要對血細胞分析儀計數巨大血小板進行評價。本文利用檢驗界廣泛應用的，性能優(yōu)良的日本Sysmex 公司的XE-2100血細胞分析儀，對經涂片、染色、鏡檢證實，巨大血小板占血小板總數30%以上的標本進行檢測，探討XE-2100血細胞分析儀計數巨大血小板的準確性，為臨床選擇巨大血小板檢測方法提供客觀依據。

1 材料與方法

1.1 儀器 日本Sysmex 公司的XE-2100血細胞分析儀；Olympus BX51顯微鏡; 重慶天海醫(yī)療設備有限公司CMIS-2011骨髓細胞分析系統(tǒng)；牛鮑氏血細胞計數板等。

1.2 試劑 XE-2100配套原裝試劑、質控物，由日本東亞公司提供。瑞氏-吉姆薩染液由BASO公司提供。靜脈采血用乙二胺四乙酸二鉀(EDTAK2)真空抗凝管，由上海科華公司提供。血小板草酸銨稀釋液按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版的要求配制[1]。

1.3 標本來源 6例樣本均為本院病人，均經涂片、染色、鏡檢證實（見圖1-7），其血小板以巨大血小板為主，高達30%以上，遠遠超出薛飛平[2]報告的正常人巨大血小板占0.7-2.0%的參考范圍。受檢者早晨空腹，采血由技術熟練護士在患者左上臂扎止血帶，禁止拍打采血部位，在1分鐘內從肘正中靜脈一次順利抽血2ml置EDTAK2真空抗凝管，立即上下顛倒混勻8次，室溫放置，所有計數檢測均在采集標本后2h內完成。

1.4 方法 Sysmex XE-2100使用前已校準，每日測定三個水平配套質控物，結果均在靶值允許范圍內再進行日常標本的檢測。分別用Sysmex XE-2100的電阻抗法(PLT-I)和光學法(PLT-O)及手工顯微鏡計數法，三種方法分別對上述6例血液中有大量巨大血小板（>30%）患者的標本進行血小板計數。電阻抗法(PLT-I)檢測采用儀器第3檢測模式(CBC+DIFF)進行檢測；光學法(PLT-O)檢測用儀器第4檢測模式(CBC+DIFF+RET)進行檢測；以手工顯微鏡計數法為標準，判斷Sysmex XE-2100計數血小板結果的準確性。手工顯微鏡計數由兩位高年資主管檢驗師，采用雙盲法計數，取兩人均值。每一例標本均制作血涂片，行瑞-吉染色后油鏡觀察巨大血小板形態(tài)，經Olympus BX51顯微鏡攝影。經統(tǒng)計學分析，評價XE-2100血細胞分析儀計數巨大血小板的準確性。

1.5 統(tǒng)計學處理 三種血小板計數方法，每兩種方法之間，采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行配對T檢驗。

2 結 果

2.1 數據結果 6例標本統(tǒng)一編號，同時采用三種方法即Sysmex XE-2100的電阻抗法(PLT-I)、光學法(PLT-O)和手工顯微鏡計數法進行血小板計數，其結果及血涂片中巨大血小板比例見表1。MPV(平均血小板體積)、PCT(血小板壓積)、PDW(血小板分布寬度)、P-LCR(大血小板百分比)等血小板參數儀器均無法測出。為減少誤差采用同一標本配對T檢驗[電阻抗法(PLT-I)和光學法(PLT-O)，電阻抗法(PLT-I)和手工顯微鏡計數法，光學法(PLT-O)和手工顯微鏡計數法],分析三種方法計數巨大血小板的一致性。結果，PLT-O法計數巨大血小板與手工顯微鏡計數法比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),PLT-I法計數巨大血小板與PLT-O法比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；PLTI法計數巨大血小板與手工顯微鏡計數法比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 圖形結果 圖1-6顯示6例血小板直方圖均明顯異常，直方圖尾部陡然向上抬高。其中，例1和例2血小板直方圖相似，表現為血小板直方圖無擬合曲線，在2～35fl區(qū)域十分平坦，而在35fl右側急劇陡然升高，這與兩例患者均為巨大血小板綜合癥(BSS)，巨大血小板在血涂片中高達60%以上有關；例3、4、6血小板血小板直方圖相似，在2～35fl區(qū)域大致呈現正常的左偏態(tài)擬合曲線，但在35fl右側也表現為急劇陡然升高，這與三位患者巨大血小板在血涂片中占30-60%有關；例5的血小板直方圖有別于其它5例，是在2～20fl區(qū)域呈現正常的血小板直方圖左偏態(tài)擬合曲線，在20～35fl區(qū)域陡然升高。在> 35fl右側呈高位水平直線，這可能是該患者體積是紅細胞2倍以上的特大血小板占10%造成的。此外，6例標本紅細胞直方圖均表現正常，巨大血小板未對紅細胞直方圖造成干擾，所有6例標本的血涂片中均易見到巨大血小板。

2.3 報警結果 血小板報警提示：血小板聚集(PLT Clumps)，血小板直方圖異常(PLT abn Dst)

3 討 論

巨大血小板是指MPV≥30fl或者直徑≥1/2紅細胞的血小板[3]，具體是指血小板直徑＞7.5μm[4]，在實際血涂片觀察中通常以直徑≥1/2紅細胞來判定。巨大血小板已成為研究出血性疾病、血栓性疾病及血液病的重要內容。

血小板體積越大其活性越強，血小板間的聚集和粘附能力越強，易于發(fā)生血小板凝集，形成血栓，出現急性心肌梗塞、腦梗塞或腦出血的可能性較大[5]。巨大血小板綜合癥(BSS)、血小板無力癥、灰色血小板綜合癥、骨髓異常綜合征、特發(fā)性血小板減少性紫癜、血友病、骨髓纖維化、慢性粒細胞白血病、惡性腫瘤、孕婦及血小板的活化[6]等都會出現數量不等的巨大血小板。既然巨大血小板在多種疾病中廣泛存在，那么在血小板計數時，能否將巨大血小板計數在內直接關系到血小板的準確計數。

準確計數血小板實非易事[7]。采用傳統(tǒng)的電阻抗法檢測技術，單純依靠細胞體積一個檢測參數，無法有效區(qū)分其它干擾物質，特別是無法區(qū)分病理標本中的巨大、大血小板。Sysmex XE-2100血液分析儀可采用電阻抗法(PLT-I)以細胞體積的大小計數血小板，儀器將在2～35fl范圍內的細胞定義為血小板，因此，當血小板顆粒大于35f時，儀器就無法將其計數為血小板。這可以從表1和統(tǒng)計學分析結果[PLT-I法與PLT-O法 (P<0.01)；PLT-I與手工顯微鏡計數法(P<0.05)]得到證明。

圖1 例1 紅細胞、血小板直方圖及血涂片1000×；圖2 例2紅細胞、血小板直方圖及血涂片1000×；圖3 例3 紅細胞、血小板直方圖及血涂片1000×；圖4 例4紅細胞、血小板直方圖及血涂片1000×； 圖5 例5紅細胞、血小板直方圖及血涂片1000×；圖6 例6紅細胞、血小板直方圖及血涂片1000×。

表1 6例患者三種血小板測定方法結果（×109/L)及血涂片中巨大血小板比例（%）

圖7 例1計數板內以巨大血小板為主 200×。

Sysmex XE-2100血液分析儀也可采用采用半導體單通單光散射法和流式細胞技術[8]，(光學法，PLT-0)測定PLT。光學法則利用兩種熒光染料：聚次甲基和噁嗪，可以透過細胞膜對細胞內RNA、DNA進行染色。在光法計數通道內，663nm波長的激光照射在細胞上，產生前向散射光(FSC)信號可反應細胞體積大??；側向散射光(SSC)信號可反應細胞的顆粒和細胞核等內含物的信息；側向熒光(SFL)強度信號則用于分析細胞內脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的含量[9，10]。血小板體積較紅細胞小，散點圖上分布在紅細胞下方，血小板內含極少量的核酸，側向熒光的強度較成熟紅細胞稍大，因此能有效區(qū)分紅細胞和血小板[11]。這可以從圖1～6中紅細胞直方圖上得到證明：Sysmex XE-2100血液分析儀可以有效排除巨大血小板對紅細胞計數的干擾。

但從表1和統(tǒng)計學結果來看，光學法（PLT-0)計數巨大血小板與手工顯微鏡計數法比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，證明光學法（PLT-0)測定巨大血小板的準確性僅比電阻抗法(PLT-I)好，確不如手工顯微鏡計數法準確，尤其是對于例1、例2這樣的巨大血小板綜合癥(BSS)患者，在巨大血小板在血涂片中高達60%以上時，光學法（PLT-0)結果與手工顯微鏡計數法結果相差懸殊。這是由于日常臨床工作中應用的血細胞自動分析儀多為單光散射法計數細胞數目，這種計數在血細胞數目或體積極大時是不準確的。BSS患者血小板中至重度減少，且血小板體積偏大，導致血小板計數偏差。這種情況可選用人工血小板計數[12]，如果能對這類標本制作血涂片進行形態(tài)學復查則更佳。

在運用血細胞分析儀檢測標本過程中，如何能夠及時發(fā)現標本中巨大血小板對儀器的干擾呢? 儀器的血小板報警提示：血小板聚集(PLT Clumps)，血小板直方圖異常(PLT abn Dst)；直方圖的特征性改變；MPV、PCT、PDW、P-LCR等血小板參數儀器無法測出，均能提示我們標本中存在巨大血小板對儀器的干擾。這時可采用手工顯微鏡計數法并制作血涂片進行形態(tài)學復查，可以準確確認并計數血小板，為臨床診斷提供客觀、有價值的結果，避免誤診誤治。

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