侯佳宜 (山西省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，太原030012)

B細(xì)胞激活因子與過敏性紫癜相關(guān)性研究①

侯佳宜 (山西省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，太原030012)

目的:通過分析B細(xì)胞激活因子(BAFF)與患者免疫球蛋白在不同類型過敏性紫癜(HSP)中的表達(dá)，初步探討B(tài)AFF在過敏性紫癜免疫發(fā)病機(jī)制中的作用。方法:收集HSP活動(dòng)期患者，包括皮膚型30例、關(guān)節(jié)型30例、腹型32例、腎型31例、混合型41例，將健康人40例作為對照組。速率散射比濁法測定免疫球蛋白水平;ELISA方法檢測BAFF蛋白含量。結(jié)果:IgA僅在混合型HSP中增高，IgG和IgM在各組中并無增高;不同類型HSP活動(dòng)期患者血清中BAFF表達(dá)水平均明顯高于對照組;混合型HSP患者血清中BAFF表達(dá)水平與同型患者IgA表達(dá)水平呈中等程度的相關(guān)性。結(jié)論:BAFF與HSP發(fā)病時(shí)的體液免疫增強(qiáng)有關(guān)。

過敏性紫癜;B細(xì)胞激活因子;免疫球蛋白

過敏性紫癜(Henoch-schonlein purpura，HSP)是一種以侵犯毛細(xì)血管為主要病變的變態(tài)反應(yīng)性疾病[1]。發(fā)病機(jī)制至今仍不明確，近年研究認(rèn)為免疫機(jī)制紊亂是HSP發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵，是導(dǎo)致患者系統(tǒng)性血管炎病理改變的始發(fā)因素。TNF家族的B細(xì)胞激活因子(B cell-activating factor belong to the TNF family，BAFF)是1999年發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子(TNF)超家族新成員，又稱為B淋巴細(xì)胞刺激因子(B lymphocyte stimulator，Blys)，在體內(nèi) BAFF 有膜結(jié)合型和可溶性兩種活性形式?？扇苄缘腂AFF大量存在于外周血及淋巴組織細(xì)胞的培養(yǎng)上清中，主要由嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌。BAFF是B淋巴細(xì)胞生長、發(fā)育和分化中重要的免疫調(diào)控因子，主要通過誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖、分化和分泌免疫球蛋白，增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答[2]。目前研究表明，BAFF過度表達(dá)刺激B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生大量抗體是自身免疫性疾病的主要發(fā)病機(jī)制[3]，但關(guān)于BAFF在HSP發(fā)病機(jī)制中的意義報(bào)道甚少。為了研究BAFF在HSP患者體液免疫功能紊亂的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)采用速率散射比濁法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定過敏性紫癜患者外周血清中免疫球蛋白和BAFF的表達(dá)水平，初步探究HSP的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 研究對象 根據(jù)美國風(fēng)濕協(xié)會(huì)的診斷分類標(biāo)準(zhǔn)，收集我院2010年4月至2010年12月住院或門診HSP患者，包括皮膚型30例、關(guān)節(jié)型30例、腹型32例、腎型31例、混合型41例，均為初診活動(dòng)期，并將正常健康人40例作為對照組。

1.2 主要試劑與儀器 人B淋巴細(xì)胞刺激因子ELISA檢測試劑盒(武漢博士德公司)、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM 檢測試劑盒(美國 Beckman公司)、

M

ultiskanⅢ自動(dòng)酶標(biāo)檢測儀(Labsystems公司)、Well wash MK2自動(dòng)洗板機(jī)(Labsystems公司)、全自動(dòng)特定蛋白儀(美國Beckman公司)。

1.3 速率散射比濁法測定HSP免疫球蛋白 將標(biāo)本3 000 r/min離心10分鐘，分離血清。免疫球蛋白IgG、IgA、IgM檢測試劑盒內(nèi)含有稀釋液、緩沖液、抗血清等，按說明書配制，根據(jù)全自動(dòng)特定蛋白儀程序要求進(jìn)行樣品測定。

1.4 ELISA方法檢測 BAFF蛋白含量 將標(biāo)本3 000 r/min離心10分鐘，分離血清。酶標(biāo)孔加樣品和標(biāo)準(zhǔn)品100 μl，37℃溫育90分鐘，不洗;加生物素標(biāo)記的 BAFF抗體 100 μl，37℃溫育 60分鐘，0.01 mol/L TBS洗滌3次;加親和素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)100 μl 37℃ 溫育 30 分鐘，0.01 mol/L TBS洗滌5次;每孔加入TMB顯色液90 μl，37℃避光反應(yīng)20分鐘，加終止液，在450 nm波長處測定各孔的OD值;在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣品濃度值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用±s表示結(jié)果，兩組間比較以t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，相關(guān)分析采用Spearman直線回歸分析法，求相關(guān)系數(shù)(r)，并作顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 HSP患者血清中免疫球蛋白表達(dá)水平 不同類型HSP活動(dòng)期患者血清中免疫球蛋白的比較見表1。IgA僅在混合型HSP中增高，與對照組相比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而IgG和IgM在各組中與對照組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 HSP患者血清中BAFF表達(dá)水平以及與免疫球蛋白表達(dá)水平相關(guān)性分析 不同類型HSP活動(dòng)期患者血清中BAFF表達(dá)水平均明顯高于對照組(374.65 ±16.23)pg/ml，且各型之間未見顯著性差異(圖1)?；旌闲虷SP患者血清中BAFF表達(dá)水平(8 130±574.99)pg/ml與同型患者IgA表達(dá)水平呈中等程度的相關(guān)性(r=0.681，P ＜0.05，圖2)。

表1 不同類型HSP活動(dòng)期患者免疫球蛋白的比較(x ± s，g/L)Tab.1 The level of immunoglobulin in the different subtypes of HSP and control(±s，g/L)

表1 不同類型HSP活動(dòng)期患者免疫球蛋白的比較(x ± s，g/L)Tab.1 The level of immunoglobulin in the different subtypes of HSP and control(±s，g/L)

Note:Compared with control group，1)P ＜0.05.

Groups n IgA IgG IgM Skin group 30 1.53 ±0.34 10.42 ±1.66 1.68 ±0.43 Joint group 30 2.13 ±0.43 11.79 ±2.41 1.38 ±0.62 Abdomen group 32 2.28 ±0.48 12.47 ±3.39 1.65 ±0.84 Kidney group 31 1.88 ±0.54 12.19 ±3.45 1.69 ±0.68 Mixed group 41 3.71 ±0.881) 11.51 ±4.33 1.67 ±0.65 Control group 40 1.45 ±0.61 12.90 ±1.71 1.43 ±0.32

3 討論

HSP的發(fā)病機(jī)制至今仍不明確，涉及體液免疫和細(xì)胞免疫功能的紊亂，同時(shí)有凝血機(jī)制的參與，遺傳因素的作用也日漸引起人們的重視[4，5]。國內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)，HSP患兒體內(nèi)有大量的IgA免疫復(fù)合物，沉積于全身組織、器官的小血管壁，通過激活補(bǔ)體和激發(fā)炎癥細(xì)胞活性導(dǎo)致相應(yīng)組織、器官的炎性損傷[6]。本研究結(jié)果表明，混合型HSP中IgA增高，與國外研究結(jié)果一致。其他類型IgA不增高的現(xiàn)象，推測是因?yàn)榇罅康腎gA形成免疫復(fù)合物沉積于血管壁，而導(dǎo)致外周循環(huán)中的IgA不見增高。此外，對HSP病人血清中IgG、IgM的研究并無一致結(jié)論，有人認(rèn)為HSP發(fā)病時(shí)IgG水平升高，與腎臟系膜細(xì)胞抗原結(jié)合會(huì)導(dǎo)致紫癜性腎炎的病理性改變[7]，然而本研究并未發(fā)現(xiàn)各組HSP患者IgG和IgM水平的增高。

圖1 不同類型HSP活動(dòng)期患者血清BAFF的比較Fig.1 The level of serum BAFF in the different subtypes of HSP and control

圖2 混合型HSP患者血清中BAFF與同型免疫球蛋白表達(dá)水平相關(guān)性分析Fig.2 The correlation between serum BAFF and IgA in mixed group

BAFF信號(hào)的正常表達(dá)與體液免疫應(yīng)答的平衡密切相關(guān)。BAFF具有明顯的B細(xì)胞趨向性，通過與后者的特異性結(jié)合，不僅調(diào)節(jié)B細(xì)胞的數(shù)量，而且在其分化、發(fā)育及存活方面發(fā)揮重要的調(diào)控作用[8]。對于休眠 B細(xì)胞，BAFF通過誘導(dǎo) NF-κB 的活性，促使其分化，進(jìn)而上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，延長B細(xì)胞的壽命[9]。而有報(bào)道證實(shí)，BAFF與其相應(yīng)受體BCMA結(jié)合后，活化長壽命漿細(xì)胞并增加免疫球蛋白的分泌[10]。BAFF誘發(fā)疾病的原因可能是BAFF含量高低影響到B細(xì)胞的存活信號(hào)以及產(chǎn)生自身抗體的B細(xì)胞選擇性凋亡。國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)證實(shí)，BAFF在體內(nèi)的病理性表達(dá)與多種自身免疫性疾病有關(guān)，自身免疫性疾病的特征是B細(xì)胞耐受喪失，體內(nèi)產(chǎn)生大量針對自身組織成分的抗體。如SLE患者血清BAFF水平較正常人明顯升高，高濃度的BAFF誘導(dǎo)抗DNA抗體高表達(dá)，并能促進(jìn)抗雙鏈DNA的B細(xì)胞成熟[11-13]。研究也發(fā)現(xiàn)RA患者血清中BAFF表達(dá)量增加，并且病情嚴(yán)重的RA患者，滑液中檢測到高濃度BAFF及其受體BAFFR[14]。

BAFF已經(jīng)成為自身免疫性疾病發(fā)病和治療的關(guān)鍵因素之一，但關(guān)于BAFF在HSP發(fā)病機(jī)制中的意義報(bào)道甚少。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，混合型HSP中IgA增高，因此，我們推測產(chǎn)生免疫球蛋白的B細(xì)胞功能異常在其發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用。而是何種原因引起了B細(xì)胞異常生成免疫球蛋白IgA，我們進(jìn)一步檢測了所有患者及對照組中BAFF的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)不同類型HSP活動(dòng)期患者血清中BAFF表達(dá)水平均明顯高于對照組，且混合型HSP患者血清中BAFF表達(dá)水平與同型患者IgA表達(dá)水平呈中等程度的相關(guān)，這些結(jié)果均進(jìn)一步提示，B細(xì)胞是BAFF重要的作用靶細(xì)胞，HSP發(fā)病時(shí)，BAFF與其受體相互作用可導(dǎo)致體液免疫功能上調(diào)，B細(xì)胞異?；罨?，產(chǎn)生多種自身抗體、多克隆的免疫球蛋白，以IgA尤其是IgA1亞類為主，從而形成大量的IgA免疫復(fù)合物，導(dǎo)致了HSP的病理性改變。

綜上所述，HSP的免疫發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，本研究發(fā)現(xiàn)混合型HSP患者的IgA分泌異常僅是體液免疫功能的部分表現(xiàn)，而BAFF的水平升高與IgA變化相關(guān)，提示在HSP這種免疫球蛋白表達(dá)異常增加的疾病中，BAFF至少部分參與了HSP的發(fā)病，很可能是體液免疫應(yīng)答亢進(jìn)的觸發(fā)因素。而BAFF通過何種途徑調(diào)節(jié)體液免疫以及BAFF在HSP發(fā)病時(shí)對細(xì)胞免疫是否有影響，有待進(jìn)一步的研究。

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[收稿2012-02-14 修回2012-05-28]
(編輯 張曉舟)

Study on association of BAFF and Henoch-schonlein purpura

HOU Jia-Yi.Clinical Laboratory，Hospital of Traditional Chinese Medicine of Shanxi Province，Taiyuan 030012，China

Objective:To observe the level of BAFF and immunoglobulin in different subtypes of Henoch-schonlein purpura (HSP)，and to explore the role of BAFF in the pathogenesis of HSP.MethodsActive HSP patients were collected，including skin group(n=30)，joint group(n=30)，abdominal group(n=32)，kidney group(n=31)，mixed group(n=41)，40 healthy people were chose as control group.The level of immunoglobulin was examined with Rate Nephelometry and ELISA method was used to detect BAFF.ResultsThe level of IgA was higher in mixed group than in control group，IgG and IgM did not increase in HSP;different subtypes of HSP patients expressed significantly higher level of BAFF in serum than the control group;the expression of serum BAFF moderately associated with the level of IgA in mixed group.ConclusionBAFF was related to enhancement of humoral immunity when HSP was in onset.

Henoch-schonlein purpura;BAFF;Immunoglobulin

R392.8

A

1000-484X(2012)08-0752-03

10.3969/j.issn.1000-484X.2012.08.018

①本文為山西省中醫(yī)藥研究院院級課題基金項(xiàng)目(No.201105)

侯佳宜(1983年-)，女，免疫學(xué)碩士，檢驗(yàn)技師，主要從事自身免疫疾病發(fā)病機(jī)制方面的研究，E-mail:youhoujiayi0103@126.com。

·分子與細(xì)胞免疫學(xué)·