李雪梅，邵 燕，周建平

（北京市藥品檢驗(yàn)所藥物安全評(píng)價(jià)中心，北京 100035）

痔瘡在臨床上是一種常見病、多發(fā)病，治療此病癥的藥物多為洗、坐浴及外用等。通便化痔顆粒是口服制劑，臨床用于治療內(nèi)外混合痔瘡，風(fēng)熱瘀阻證等。文獻(xiàn)中用酸灼傷大鼠肛門周圍皮膚多以用肉眼觀察，對(duì)潰瘍和愈合情況進(jìn)行評(píng)分，未見其他方法。我們認(rèn)為這種觀察方法單一，對(duì)潰瘍的程度及愈合的過程不能全面客觀地進(jìn)行評(píng)價(jià)，不能合理地反映出藥物對(duì)治療痔瘡的藥理作用。本文根據(jù)其功能主治主要對(duì)大鼠皮膚灼傷動(dòng)物模擬臨床痔瘡模型，進(jìn)行方法學(xué)的研究和主要藥理作用的驗(yàn)證。

1 材料和方法

1.1 藥物和試劑

通便化痔顆粒浸提濃縮液，由北京華洋奎龍藥物研究中心提供，批號(hào)：20101010；

龍血竭膠囊，批號(hào)：100108，做為陽性藥用0.5％羧甲基纖維素鈉溶液配制成濃度為0.63 g/kg。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠180～200 g，50只，雌雄各半。由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2006-0009；使用許可證號(hào)：SYXK （京）2010-0023。

1.3 儀器

Nikon光學(xué)顯微鏡，日本Nikon生產(chǎn)

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

對(duì)鹽酸致大鼠肛門周圍皮膚灼傷（潰瘍）的影響

造模：選健康SD品系大鼠50只，雌雄各半，將其肛門周圍毛發(fā)剪去并用刀劃傷，用10 mol/L鹽酸1m L涂抹于去毛皮膚表面，24 h后出現(xiàn)紅腫、灼傷后按體重隨機(jī)分為5組，即模型對(duì)照組、通便化痔顆粒高（14 g生藥/kg）、中（7 g生藥/kg）、小（3.5 g生藥/kg）劑量組和陽性對(duì)照組（龍血竭膠囊0.63 g/ kg）。各組給藥體積為1.0 m L/100 g體重，模型對(duì)照組灌胃同體積去離子水。每日1次，連續(xù)給藥10 d。每組每日觀察灼傷面愈合情況。末次給藥后1 h，將大鼠麻醉處死，肉眼觀察評(píng)分后，取肛門組織進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。與模型對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉ±s）表示，組間比較采用 t 檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明：通便化痔顆粒在14 g生藥/kg、7 g生藥/kg、3.5 g生藥/kg的劑量下，對(duì)用10 mol/ L鹽酸灼傷肛門周圍皮膚的大鼠，連續(xù)給藥10 d，肉眼觀察大、中劑量組大鼠灼傷面明顯恢復(fù)，與模型對(duì)照組比較，差異有顯著性意義。

評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：“-”表示灼傷面全部結(jié)痂，計(jì)為10分

“+”表示灼傷面結(jié)痂占灼傷面積的

80％，計(jì)為8分

“++”表示灼傷面結(jié)痂占灼傷面積的

50％，計(jì)為6分

“+++”表示灼傷面外周有結(jié)痂現(xiàn)象，

仍有出血，計(jì)為4分

“++++”灼傷面紅腫、出血，未見結(jié)

痂，計(jì)為2分結(jié)果見表1。

取上述大鼠肛門組織置于10％福爾馬林溶液中固定，HE染色，光鏡下觀察其病理組織學(xué)改變。病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)潰瘍大小、壞死程度，肉芽組織增生程度半定量分為4級(jí)（+—++++），進(jìn)行打分。分級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表2。

試驗(yàn)結(jié)果表明：通便化痔顆粒大、中劑量組肛門組織發(fā)生潰瘍、壞死的只數(shù)明顯少于模型對(duì)照組，平均積分與模型對(duì)照組比較，差異有顯著性意義（P＜0.01）結(jié)果見表3及彩插1圖1，圖2，圖3。

對(duì)鹽酸致大鼠肛門周圍皮膚灼傷（潰瘍）的影響

表1 對(duì)鹽酸致大鼠皮膚灼傷面肉眼觀察積分情況（n=10）Tab.1 The naked eye observe the point of Hydrochloric acid induced rat skin burn area（n=10）

表2 分級(jí)評(píng)分表Tab.2 Ratings Scale

通便化痔顆粒大、中、小3個(gè)劑量組肉芽組織增生平均積分明顯優(yōu)于模型對(duì)照組，組織修復(fù)能力強(qiáng)，與模型對(duì)照組比較差異有顯著性意義（P＜0.01）。結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 痔瘡動(dòng)物模型的建立與評(píng)價(jià)

通過將SD大鼠肛門周圍皮膚用刀劃傷，然后用鹽酸灼傷，10 d后取下灼傷組織，10％福爾馬林溶液中固定，HE染色，病理顯示肛門周圍組織均出現(xiàn)不同程度的炎癥改變，出現(xiàn)潰瘍及壞死組織，表明造模合理、成功。建立這種痔瘡動(dòng)物模型和新的觀察方法，是為今后進(jìn)一步驗(yàn)證口服藥物對(duì)痔瘡的藥理作用奠定了基礎(chǔ)。本試驗(yàn)方法客觀、可靠、方法簡便、可行。

表3 各試驗(yàn)組肛門組織病理（潰瘍、壞死）積分情況（n=10）Tab.3 Experimental group anal tissue pathology（ulcers，necrosis）points situation.（n=10）

表4 各試驗(yàn)組肛門組織肉芽組織增生積分情況（n=10）Tab.4 Experimental groups anal granulation tissue hyperplasia points situation（n=10）

3.2 通便化痔顆粒對(duì)痔瘡模型大鼠的療效評(píng)價(jià)

祖國醫(yī)學(xué)對(duì)痔的病因機(jī)理認(rèn)識(shí)具有悠久的歷史。痔的發(fā)病通常為陰陽失調(diào)，臟腑氣血虛損，在加濕、熱、風(fēng)、燥等邪之作用等等。治療時(shí)應(yīng)以內(nèi)服為首要，通便化痔顆粒主要由當(dāng)歸、白芷、連翹、敗醬草、赤芍等提取制成，具有活血清熱，散風(fēng)解毒等功效。根據(jù)中醫(yī)的辨證理論，調(diào)節(jié)整個(gè)機(jī)體，組方中的當(dāng)歸對(duì)麻醉犬、兔的在體腸管及膀胱等平滑肌有興奮作用，對(duì)離體兔腸則為抑制作用，具有鎮(zhèn)痛、消炎作用。白芷、連翹具有抗菌作用。敗醬草入肝、胃、大腸經(jīng)，起清熱解毒，排膿破瘀作用。赤芍對(duì)兔離體或在體的腸管呈興奮作用，高濃度為抑制作用，同時(shí)還具有抗炎、抗?jié)冏饔?。以上諸藥通過活血清熱，散風(fēng)解毒，佐以通腑等功效起到通便化痔的作用。動(dòng)物試驗(yàn)也表明它具有修復(fù)被鹽酸灼傷的皮膚，肉芽組織增生平均積分明顯優(yōu)于模型對(duì)照組，大、中劑量組肛門組織發(fā)生潰瘍、壞死的只數(shù)明顯少于模型對(duì)照組，平均積分與模型對(duì)照組比較，差異有顯著性意義（見病理照片）；通過其它試驗(yàn)進(jìn)一步表明它的藥理作用：通便化痔顆粒能縮短小鼠出血、凝血時(shí)間。促進(jìn)小鼠腸蠕動(dòng)，增加便秘小鼠糞便排出的總粒數(shù)。有效地抑制小鼠因物理及化學(xué)因素引起的疼痛，提高痛閾值。這表明通便化痔顆粒的藥效學(xué)研究與臨床的藥理作用相吻合，為臨床使用提供了依據(jù)。

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