鄧燕玲 覃小梅 黃軍垣 (梧州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 梧州 543002)

人血小板抗原基因多態(tài)性在廣西壯族、瑤族、苗族、侗族及仫姥族老年人中的表達(dá)差異

鄧燕玲 覃小梅1黃軍垣1(梧州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 梧州 543002)

目的研究人血小板抗原基因(HPA)多態(tài)性在廣西壯族、瑤族、苗族、侗族及仫姥族中的分布，計(jì)算HPA各系統(tǒng)的錯配率，尋找對同種免疫發(fā)生有意義的HPA系統(tǒng)。方法納入祖上三代均為相應(yīng)民族的上述5個民族各100例，男女各半，采用酚-氯仿法抽提基因組DNA，采用PCR-SCP方法進(jìn)行基因分型。結(jié)果等位基因a在各民族中均為高頻基因(＞50%)，等位基因b僅在HPA-3、HPA-5、HPA-6、HPA-15這4個HPA系統(tǒng)中檢出。HPA系統(tǒng)對偶抗原錯配率分析中，以HPA-3及HPA-15錯配率最高，均為30%左右;HPA-5在苗族及瑤族中錯配率可達(dá)10%及以上。結(jié)論HPA-3及HPA-15在各民族發(fā)生同種免疫反應(yīng)均有顯著意義，而HPA-5在苗族及瑤族中可能亦具有較大意義。

人血小板抗原;少數(shù)民族;基因型;同種免疫

人類血小板抗原(HPA)是存在于血小板糖蛋白上的一類特異性抗原，是血小板最重要的抗原之一〔1〕。HPA可介導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體并引起同種免疫反應(yīng)，是導(dǎo)致多種與免疫相關(guān)的血小板異常疾病(如新生兒同種免疫性血小板減少癥、輸血后血小板減少性紫癜、血小板輸注無效等)的重要原因〔2〕。HPA目前正式命名的至少有17個，其中12個對偶抗原被歸為6個HPA系統(tǒng)，而另外11個HPA尚未發(fā)現(xiàn)其對偶抗原存在〔3〕。這些基因多態(tài)性改變HPA抗原簇已被證實(shí)與血小板免疫異常相關(guān)疾病有密切關(guān)系〔1〕，但在廣西各主要少數(shù)民族中的報(bào)導(dǎo)仍較少。本研究通過研究廣西地區(qū)幾個主要少數(shù)民族(壯族、瑤族、苗族、侗族及仫姥族)老年人HPA 1～17基因分布情況，計(jì)算HPA對偶抗原錯配率(FPR)，預(yù)測其發(fā)生血小板同種免疫的可能性，旨在尋找對輸注血小板有效性和安全性有意義的HPA系統(tǒng)。

1 對象與方法

1.1 對象 于2010～2011年隨機(jī)選取60歲以上壯族、瑤族、苗族、侗族及仫姥族各100名，男女各半，要求被檢者祖上三代均為相應(yīng)民族。年齡分別為:壯族(67.17±9.31)歲;瑤族(69.31±8.66)歲;苗族(68.55±7.31)歲;侗族(70.11±9.11)歲;仫佬族(68.33±9.60)歲。

1.2 全基因組DNA抽提 使用EDTA抗凝管留取靜脈血3 m l，采用酚-氯仿法抽取全基因組 DNA;使 OD260/280值為1.7 ～1.8，濃度為30 ～40 ng/μl。

1.3 HPA基因分型 使用商業(yè)化HPA基因檢測試劑盒(G＆T Biotech，Rockville，USA)進(jìn)行 HPA基因分型，該試劑盒基于PCR-SSP 法建立〔3，4〕，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用Pearsonχ2檢驗(yàn)判斷人群基因型是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。各基因型頻率使用直接計(jì)算法統(tǒng)計(jì);使用Pearsonχ2檢驗(yàn)比較不同少數(shù)民族人群中基因型分布與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)漢族人群數(shù)據(jù)〔5〕是否存在差異;使用以下公式計(jì)算HPA基因FPR:PFR=2ab(1－ab)〔6〕。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用STATA version 11.0完成。

2 結(jié)果

納入人群大部分HPA基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律，表明選取人群具有代表性。等位基因a在所有人群全部HPA基因多態(tài)性中均呈高頻分布(等位基因a頻率＞50%)，且等位基因 b僅在 HPA-3、HPA-5、HPA-6、HPA-15 這 4個HPA系統(tǒng)中檢出。在上述幾個能被檢出等位基因b的HPA系統(tǒng)中，其中HPA-3及HPA-15分布頻率較高。HPA系統(tǒng)對偶抗原錯配率分析中，以HPA-3及HPA-15錯配率最高，均約為30%左右;HPA-5及HPA-6次之，在5%以下。值得注意的是，HPA-5在苗族及瑤族中錯配率可達(dá)10%及以上。

本研究納入人群HPA基因分型見表1，表2。與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)漢族人群數(shù)據(jù)相比，HPA-2、HPA-3、HPA-5、HPA-6及 HPA-15均有與漢族人基因型分布不同的少數(shù)民族被檢出。

表1 廣西壯族、瑤族、苗族HPA 1～17基因型和等位基因頻率分布(%，n=100)

表2 廣西侗族及仫佬族HPA 1～17基因型和等位基因頻率分布(%)

3 討論

HPA基因多態(tài)性具有特殊重要意義，主要表現(xiàn)為血小板抗原改變引起同種免疫異常，并最終導(dǎo)致外源性血小板輸入時發(fā)生免疫反應(yīng)，導(dǎo)致血小板破壞增多，數(shù)量減少，或輸注血小板無效〔7〕。因這一抗原系統(tǒng)的特殊意義，國內(nèi)外研究報(bào)導(dǎo)較多，但對于廣西幾個主要少數(shù)民族人群中，上述抗原資料仍較少。本研究通過對廣西壯族、瑤族、苗族、侗族及仫姥族等5個主要民族HPA抗原基因型分布分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HPA-3、HPA-5、HPA-6及HPA-15這4個HPA系統(tǒng)的等位基因b可被檢出;而HPA-3及HPA-15在各民族中對于外源性血小板輸注時發(fā)生同種免疫意義均較大，錯配率可達(dá)30%左右。

國內(nèi)外眾多研究均顯示HPA-3及HPA-15系統(tǒng)中等位基因b頻率較高，因而被認(rèn)為是外源性血小板輸注有效性及安全性的最重要的 HPA 系統(tǒng)〔5，6，8〕，這些結(jié)果均支持本研究結(jié)論。確實(shí)，盡管本研究納入了5個不同民族人群，但來自這些不同人群的HPA基因型分布結(jié)果均一致顯示HPA-3及HPA-15是對于血小板同種免疫反應(yīng)發(fā)生最有意義的HPA系統(tǒng)，其錯配率可達(dá)30%以上。這說明HPA-3及HPA-15在不同民族人群中存在普遍意義。另一方面，不同民族之間HPA系統(tǒng)存在一定程度的差異。例如，HPA-5系統(tǒng)在瑤族及苗族人群發(fā)生錯配的概率均在10%以上，而這一HPA系統(tǒng)在包括漢族在內(nèi)的其他民族的錯配率均小于5%。此外，不同少數(shù)民族與漢族HPA基因型分布結(jié)果相比較，出現(xiàn)不完全相同的結(jié)果，亦支持HPA系統(tǒng)在各民族中存在自己特色這一結(jié)論。因此，HPA基因多態(tài)性在不同民族間既存在普遍意義(HPA-3及HPA-15)，亦存在明顯的不同(如HPA-5)。在考慮同種免疫反應(yīng)發(fā)生時應(yīng)該充分利用現(xiàn)有的數(shù)據(jù)，對不同民族實(shí)行個體化評估，以便作出全面、準(zhǔn)確的判斷。

廣西人群中，壯族、瑤族、苗族、侗族及仫佬族與其他民族通婚較多。因此在年輕人中，能保持較為完全的單一民族遺傳信息(祖上三代均為單一民族)并不多見。而老年人群較多地深居在少數(shù)民族聚集地，因此，在這些人群身上保存著較為完整的單一民族的遺傳信息，使得HPA基因多態(tài)性結(jié)果能夠較為純粹地反應(yīng)該民族的特征，這也是本研究僅納入60歲以上老年人群的重要原因所在。

綜合上述，雖然存在一定局限性，本研究結(jié)果展示了HPA 1～17系統(tǒng)在壯族、瑤族、苗族、侗族及仫佬族這5個廣西主要少數(shù)民族中的分布，揭示了HPA-3及HPA-15在各民族發(fā)生同種免疫反應(yīng)均有顯示意義，而HPA-5在苗族及瑤族中可能亦具有較大意義。

1 王 琳，侯 明.人類血小板同種特異性抗原系統(tǒng)〔J〕.血栓與止血學(xué)，2003;9(2):79-81.

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4 Prager M.Molecular genetic blood group typing by the use of PCR-SSP technique〔J〕.Transfusion，2007;47(1 Suppl):54S-59S.

5 陳揚(yáng)凱，葉 欣，夏文杰，等.血小板特異性基因(HPA-1～17)在廣州地區(qū)人群中分布的多態(tài)性研究〔J〕.中國免疫學(xué)雜志，2010;26(8):699-702.

6 夏 蘭，蔡興權(quán)，陳鑫萍，等.海南島黎族人血小板1～17抗原系統(tǒng)基因多態(tài)性研究〔J〕.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2010;27(2):229-30.

7 Shehata N，Denomme GA，Hannach B，et al.Mass-scale high-throughput multiplex polymerase chain reaction for human platelet antigen single-nucleotide polymorphisms screening of apheresis platelet donors〔J〕.Transfusion，2011;51(9):2028-33.

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R34

A

1005-9202(2012)12-2499-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.025

1 玉林市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

鄧燕玲(1967-)，女，主管技師，主要從事檢驗(yàn)研究。

〔2012-01-15收稿 2012-03-20修回〕

(編輯 徐 杰)