傅全勝 蘇澤軒 梁蔚波 卓育敏 徐誼朝 李 紅 康舉齡

(暨南大學第一附屬醫(yī)院泌尿外科，廣東 廣州 510632)

腎細胞癌中RECK和MMP-9蛋白表達的相關(guān)性

傅全勝 蘇澤軒 梁蔚波 卓育敏 徐誼朝 李 紅 康舉齡

(暨南大學第一附屬醫(yī)院泌尿外科，廣東 廣州 510632)

目的觀察RECK和MMP-9蛋白在腎細胞癌組織中的表達，探討兩者在腎細胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的關(guān)系。方法采用免疫組化SP法檢測57例腎細胞癌手術(shù)切除標本中RECK、MMP-9蛋白表達情況。結(jié)果RECK在腎細胞癌組織中的陽性表達率為47.4%，明顯低于癌旁正常組織(P＜0.01);而MMP-9在腎細胞癌組織中的陽性表達率為80.7%，明顯高于癌旁正常組織(P＜0.01)。RECK和MMP-9蛋白表達與腫瘤的組織學分級、臨床病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。兩者表達水平呈負相關(guān)(r=－0.614，P＜0.05)。結(jié)論RECK和MMP-9蛋白表達與腎細胞癌的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為評價腎細胞癌預后的生物學指標。

腎細胞癌;RECK;MMP-9;侵襲;轉(zhuǎn)移

近年研究發(fā)現(xiàn)新的腫瘤抑制基因 RECK可在轉(zhuǎn)錄后水平抑制多種與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的表達，并且其高表達可抑制腫瘤新生血管的形成，從而抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移〔1〕。RECK基因與腫瘤轉(zhuǎn)移的研究成為當今腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)研究的熱點。但仍缺乏與腎細胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的臨床研究。因此，本研究旨在探討RECK、MMP-9蛋白表達與腎細胞癌侵襲、轉(zhuǎn)移之間的相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取2005年1月至2010年7月我院泌尿外科所行腎癌根治性切除病例，經(jīng)病理檢查確診為腎細胞癌，收集其石蠟標本包括腎細胞癌組織及相應癌旁正常腎組織(距離腫瘤2 cm以上)共57例。所選病例臨床資料和病理資料均完整，術(shù)前均未進行化療、放療及生物治療。其中男35例，女22例，平均年齡57(45～79)歲。按WHO最新組織學分型標準分為腎透明細胞癌37例，乳頭狀腎細胞癌9例，嫌色細胞癌4例，未分類腎細胞癌7例;按組織學分級標準分為高分化31例，中分化9例，低分化或未分化17例。采用2002年AJCC的臨床分期(cTNM):Ⅰ期10例，Ⅱ期21例，Ⅲ期15例，Ⅳ期11例。無轉(zhuǎn)移者44例，有轉(zhuǎn)移者13例。

1.2 方法 采用免疫組化SP法檢測腎細胞癌組織、相應癌旁腎組織及正常腎組織中 RECK、MMP-9蛋白的表達水平。RECK、MMP-9單克隆抗體稀釋，稀釋倍數(shù)分別為1∶100和1∶50，DAB顯色，蘇木素復染。操作嚴格按試劑盒流程進行。以0.01 mol/L PBS液(pH7.4)代替一抗作陰性對照，用已知RECK、MMP-9陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對照。

1.3 結(jié)果判斷 RECK與MMP-9蛋白陽性細胞均表現(xiàn)為在細胞膜或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒樣物質(zhì)。每例切片隨機在玻片的四角與中央取5個高倍(200倍)視野進行觀察，按以下標準進行染色強弱判定RECK與MMP-9蛋白表達水平:①按切片中細胞著色深淺評分:細胞無顯色0分;淺黃色1分;棕黃色2分;棕褐色3分。②按陽性細胞數(shù)占同類細胞數(shù)的百分比:＜30%為1分;30% ～70%為2分;＞70%為3分。?、?，②兩項評分的乘積作為總積分，0～1分為陰性(－);2～3分為弱陽性(+);≥4分為陽性(■)。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析，組間比較采用χ2檢驗。相關(guān)性分析用Spearman等級相關(guān)檢驗。

2 結(jié)果

2.1 腎細胞癌組織中RECK蛋白的表達及其與臨床生物學行為的關(guān)系 RECK蛋白陽性表達在腫瘤細胞的胞質(zhì)中呈淺黃色(圖1)。腎細胞癌組織中RECK蛋白的陽性表達率明顯低于相應癌旁正常腎組織(P＜0.01)。RECK表達水平與患者的年齡、性別無關(guān)(P＞0.05)，但與腎細胞癌的組織學分級、臨床病理分期的進展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系(均P＜0.05)(表1)。

2.2 腎細胞癌組織中MMP-9蛋白的表達及其與臨床生物學行為的關(guān)系 MMP-9蛋白陽性表達在腫瘤細胞的胞質(zhì)中呈深黃色(圖1)。腎細胞癌組織中MMP-9蛋白的陽性表達率明顯高于相應癌旁正常腎組織(P＜0.01)。MMP-9表達水平與患者的年齡、性別無關(guān)(P＞0.05);其表達水平隨腎細胞癌的組織學分級和臨床病理分期的進展而逐漸升高(均P＜0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者MMP-9蛋白陽性表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P＜0.05)(表1)。

2.3 腎細胞癌組織中RECK、MMP-9蛋白表達的相關(guān)性分析RECK蛋白的表達水平與MMP-9蛋白表達水平呈負相關(guān)

(r= －0.614，P ＜0.05)。

表1 RECK和MMP-9蛋白陽性表達與腎細胞癌臨床生物學行為的關(guān)系〔n(%)〕

圖1 RECK、MM P-9在腎細胞癌組織中的陽性表達(×200)

3 討論

RECK為編碼971個氨基酸的膜錨定糖蛋白，在人體內(nèi)多種正常組織細胞中均有較高水平的表達，而在各種腫瘤來源的細胞系及轉(zhuǎn)染了Ras等癌基因的細胞中不表達。RECK具有獨特的抑制MMPs表達與活性的功能，與許多癌基因信號及細胞外基質(zhì)重建密切相關(guān)，可以通過抑制MMPs活性和腫瘤血管新生兩方面影響腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移，進而影響患者預后〔2〕。國外研究發(fā)現(xiàn)在非小細胞肺癌、胰腺癌、胃癌和乳腺癌等侵襲性較強的腫瘤中RECK基因在蛋白、mRNA水平的表達明顯下降，甚至無表達，與這些腫瘤的預后密切相關(guān)，腫瘤組織中RECK表達陽性的患者預后好于表達陰性的患者，提高RECK的表達可抑制腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移〔3〕。

本研究表明RECK基因的表達缺失在腎細胞癌的發(fā)展過程中可能起著重要作用，RECK低表達的腫瘤具有較強的侵襲轉(zhuǎn)移能力。這與Takemoto等〔4〕報道的一致。提示RECK基因的表達與腎細胞癌的預后相關(guān)。從臨床角度證實RECK蛋白是抑制腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控蛋白，其低水平的表達趨向利于腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移。

惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移涉及腫瘤細胞穿破細胞外基質(zhì)(ECM)屏障、血管壁基膜及進入宿主微環(huán)境等復雜病理過程。MMP-9不僅使腫瘤細胞通過缺損基底膜向周圍組織浸潤，有促進腫瘤侵襲作用;還通過影響腫瘤新生血管生成，而與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，從多方面影響腫瘤的生物學行為。

MMP-9在淋巴轉(zhuǎn)移的患者活性增高、表達過度，免疫組化表現(xiàn)為陽性增強，并且與腎細胞癌的侵襲性、轉(zhuǎn)移特性呈正相關(guān)〔5〕。本研究提示可能由于腎細胞癌組織中RECK的表達水平降低，減弱了對MMP-9表達的抑制作用，從而使RECK蛋白低表達的癌細胞具有較強的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。這與國外有關(guān)結(jié)直腸癌和前列腺癌的研究結(jié)果相一致〔6〕。故可以通過對RECK和MMP-9蛋白的共同檢測，來預測腎細胞癌的惡性潛能及作為預后的評價指標。

1 Joaquim Bellmunt.Current treatment in advanced renal cell carcinoma(RCC):impactof targeted therapies in themanagement of RCC〔J〕.Eur Urol Suppl，2007;6(7):484-91.

2 Clark JC，Thomas DM，Chong PF，et al.RECK-a newly discovered inhibitor ofmetastasis with prognostic significance in multiple forms of cancer〔J〕.Cancer Metastasis Rev，2007;26(3-4):675-83.

3 Song SY，Son HJ，Nam E，et al.Expression of reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazalmotifs(RECK)as a prognostic indicator in gastric cancer〔J〕.Eur JCancer，2006;42(1):101-8.

4 Takemoto N，Tada M，Hida Y，et al.Low expression of reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazalmotifs(RECK)indicates a shorter survival after resection in patientswith adenocarcinoma of the lung〔J〕.Lung Cancer，2007;58(3):376-83.

5 林 浩，吳碧蓮，鄭清水.MMP-9在腎細胞癌組織中的表達與臨床病理因素相關(guān)性研究〔J〕.醫(yī)學理論與實踐，2010;23(3):260-1.

6 Rabien A，Burkhardt M，Jung M，et al.Decreased RECK expression indicating proteolytic imbalance in prostate cancer is associated with higher tumor aggressiveness and risk of prostate-specific antigen relapse after radical prostatectomy〔J〕.Eur Urol，2007;51(5):1259-66.

R737.11

A

1005-9202(2012)12-2480-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.015

廣東省醫(yī)學科學技術(shù)研究基金(WSTJJ 20081117440102196901074030)

傅全勝(1969-)，男，主治醫(yī)師，在職醫(yī)學博士，主要從事泌尿系腫瘤的診斷及微創(chuàng)治療研究。

〔2012-01-09收稿 2012-02-10修回〕

(編輯 曹夢園)