彭 筱 ，龔道新 ，周 歆

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，湖南 長沙 410128；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)研究所，湖南 長沙 410128）

阿維菌素，英文名：Avermectins（簡稱 AVM），是一種新型抗生素類殺蟲劑、殺螨劑[1-2]。阿維菌素對捕食性昆蟲和寄生天敵有直接觸殺作用，其在植物表面殘留少，在環(huán)境中無累積作用，且對益蟲的損傷很小，是當(dāng)前農(nóng)業(yè)害蟲綜合防治中較為理想的生物農(nóng)藥[3-4]。但由于阿維菌素類農(nóng)藥的特殊作用機(jī)理和其對哺乳動物繁殖能力的潛在毒性[5]，國際上對阿維菌素的最高殘留限量（MRL）要求非常嚴(yán)格，對其農(nóng)藥殘留的檢測標(biāo)準(zhǔn)十分重視，各國都分別制定了相當(dāng)嚴(yán)格的MRL值。目前，中國、日本、澳大利亞和歐盟等國家和地區(qū)及食品法典委員會（CAC）均規(guī)定柑橘中阿維菌素的MRL值為0.01 mg/kg，美國和加拿大規(guī)定柑橘類食品中其MRL值為0.02 mg/kg[6]。

為探索阿維菌素使用后對食品及環(huán)境安全的影響，研究了在施用50 g/L的阿維菌素后，其在柑橘果實和柑橘園土壤中的消解動態(tài)，以期為阿維菌素在柑橘中的合理使用及其安全性評價提供重要科學(xué)依據(jù)[7-10]。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 儀 器 HP-1100型液相色譜儀（美國惠普公司），SHY-2AS水浴恒溫振蕩器（江蘇大地自動化儀器及環(huán)保設(shè)備廠），JYL-350A榨汁攪拌機(jī)（九陽股份有限公司），TP-220A電子天平（湘儀天平儀器設(shè)備有限公司），SHZ-D（III）循環(huán)水式真空泵（浙江黃巖求精真空泵廠），RE-2000A型旋轉(zhuǎn)濃縮儀，梨形抽濾瓶，具塞三角瓶，250 mL分液漏斗，布氏漏斗，量筒，容量瓶，玻璃層析柱（長20 cm，直徑1.5 cm），移液管，滴定管，玻璃棒等。

1.1.2 試 劑 95.0%的阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品（陜西韋爾奇作物保護(hù)有限公司），分析純甲醇、色譜甲醇（江蘇漢邦科技有限公司），氯化鈉、無水硫酸鈉、二氯甲烷、石油醚、丙酮（分析純，湖南長沙湘科精細(xì)化工廠），弗羅里硅土（Florisil 60－100 mesh，美國 ACROS ORGANICS），用前在 550℃ 烘 3～5 h，待冷卻后以2%蒸餾水脫活，保存在130℃的烘箱中，備用。

1.2 田間試驗設(shè)計

用阿維菌素50 g/L懸浮劑對水（50 kg/667m2）稀釋1 333.3倍（即有效成分的濃度為37.5 mg/L），在選定的柑橘園中對柑橘樹和柑橘園土壤進(jìn)行均勻噴霧處理，分別在施藥后 2 h、1、3、5、7、10、14、21、28、35、42 d采集柑橘果實（每個試驗小區(qū)至少采集12個柑橘果實，采樣量不少于1.0 kg）和柑橘園土壤（柑橘園土壤樣品用土壤取樣器按對角線法取樣，取樣深度為0～10 cm，取樣點不少于10個，取樣量不少于1 kg）。試驗重復(fù)3次，同時采集空白對照樣品。

1.3 樣品處理

1.3.1 樣品提取 柑橘園土壤樣品：準(zhǔn)確稱取柑橘園土壤樣品20.0 g，置于250 mL具塞三角瓶中，加入60 mL甲醇，在水浴恒溫振蕩器中振蕩30 min，經(jīng)過布氏漏斗減壓抽濾，再用30、20 mL甲醇洗滌殘渣和抽濾瓶2次，合并抽濾液轉(zhuǎn)入250 mL磨口三角瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮（45℃）至近干；用二氯甲烷將濃縮液洗入250 mL分液漏斗中，再加入20 mL飽和氯化鈉溶液，搖勻后分別用30、30、20 mL二氯甲烷各萃取1次，合并二氯甲烷萃取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，用2 mL石油醚∶二氯甲烷混合液（7∶3，V/V）溶解，待 Florisil柱凈化。

柑橘全果（橘皮、橘肉）樣品：準(zhǔn)確稱取柑橘全果、果皮和果肉樣品各20.0 g，置于250 mL具塞三角瓶中，加入60 mL甲醇，在水浴恒溫振蕩器中振蕩30 min，經(jīng)過布氏漏斗減壓抽濾，再用甲醇（30 mL/次）洗滌殘渣和抽濾瓶2次，合并抽濾液轉(zhuǎn)入250 mL磨口三角瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮（45℃）至近干；用二氯甲烷將濃縮液洗入250 mL分液漏斗中，再加入20 mL飽和氯化鈉溶液，搖勻后分別用30、30、20 mL二氯甲烷各萃取1次，合并二氯甲烷萃取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，用2 mL石油醚∶二氯甲烷混合液 （7∶3，V/V） 溶解，待Florisil柱凈化。

1.3.2 凈 化 層析柱從下至上依次裝有少許脫脂棉、2 cm厚無水硫酸鈉、4.0 g弗羅里硅土和2 cm厚無水硫酸鈉，在裝柱的過程中要敲緊敲實，并用 20.0 mL 石油醚∶二氯甲烷混合液（7∶3，V/V）淋洗，備用。將上述提取濃縮液用2 mL石油醚∶二氯甲烷混合液（7∶3，V/V）溶解無損轉(zhuǎn)移至層析柱中，用 40 mL 石油醚∶二氯甲烷（7∶3，V/V）混合液分 4～5次淋洗，收集淋出液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至近干，再用色譜甲醇定容至5.0 mL，過0.45 μL膜，待HPLC測定。

1.3.3 高效液相色譜檢測條件 液相色譜柱：HP-1100型高效液相色譜儀（帶紫外檢測器和化學(xué)工作站），色譜柱（不銹鋼柱）為：XB-C18柱（4.6×150 mm），流動相為甲醇∶水=91∶9（V/V），流速為 0.44 mL/min，紫外檢測波長 λ=245 nm，T=25℃，進(jìn)樣量為20 μL，阿維菌素相對保留時間為14 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 準(zhǔn)確度和精確度

在柑橘園土壤、柑橘全果、果肉和果皮的空白對照樣品中分別添加阿維菌素的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液至其濃度為0.01、0.10、1.00 mg/kg，每個濃度處理重復(fù)5次，按上述所選定的方法及檢測條件進(jìn)行樣品的分析檢測，試驗結(jié)果見表1。結(jié)果表明：5次重復(fù)試驗中各樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均在1.93%～8.56%之間，這說明該檢測方法是準(zhǔn)確有效地；在選定的液相色譜條件下，阿維菌素的最小檢出量是4.0×10-10g，在柑橘園土壤、柑橘全果、柑橘果肉和果皮中的最低檢出濃度均為1.0×10-2mg/kg，這說明該方法的精確度有是有保障的。

表1 阿維菌素在柑橘園土壤、柑橘果皮、果肉和全果中的添加回收率

2.2 阿維菌素的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

采用梯度稀釋法，配制阿維菌素濃度分別為0.02、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00 mg/L 的 標(biāo) 準(zhǔn)工作溶液，并在選定的HPLC檢測條件下測定，得出阿維菌素的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液所對應(yīng)的色譜峰面積；再以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度（x，mg/L）與相對應(yīng)的色譜峰面積（y）繪制阿維菌素的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。經(jīng)統(tǒng)計分析得到阿維菌素的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的回歸方程式為：Y=93.17 X－0.387，相關(guān)系數(shù) R2=0.999 9。

2.3 阿維菌素在柑橘園中的消解動態(tài)試驗結(jié)果

2009年和2010年兩年在湖南長沙、浙江杭州和貴州貴陽三個試驗點將阿維菌素50 g/L懸浮劑施用于柑橘園土壤或柑橘樹上后，在施藥后21 d時，阿維菌素在柑橘園土壤及柑橘全果中的降解率均達(dá)90%以上，其中在柑橘全果中的半衰期在3.93～4.53 d之間，平均為4.09 d，在柑橘園土壤中的半衰期在6.22 d～7.15 d之間，平均為6.64 d。這表明在我國自然條件下，阿維菌素在柑橘全果和柑橘園土壤中的消解較快。

試驗結(jié)果還表明，阿維菌素在柑橘園土壤和柑橘全果中的殘留量（C，mg/kg）與其施用后的取樣時間（t，d）之間呈較明顯的負(fù)指數(shù)關(guān)系，故可以用一級化學(xué)反應(yīng)動力學(xué)方程式：Ct=C0e-kt（其中C0為施藥后阿維菌素的原始沉積量，Ct為施藥后間隔t時間的阿維菌素濃度，K為消解速率常數(shù)，t為施藥后的取樣天數(shù)）來擬合試驗數(shù)據(jù)。阿維菌素在柑橘全果及柑橘園土壤中的消解動態(tài)曲線見圖1～圖6，其消解動力學(xué)方程及其半衰期和相關(guān)系數(shù)見表2。

表2 阿維菌素在柑橘園土壤和柑橘全果中的消解動力學(xué)方程及其半衰期和相關(guān)系數(shù)

3 結(jié)論

50 g/L的阿維菌素懸浮劑施用于柑橘園后，其有效成分阿維菌素在柑橘全果和柑橘園土壤中的消解均較快，其半衰期均小于8 d，這表明阿維菌素在柑橘園中屬易降解農(nóng)藥，不過阿維菌素在柑橘全果上的降解要稍快一些，在柑橘園土壤中的降解則要稍慢一些。阿維菌素在柑橘全果和柑橘園土壤中的消解符合一級化學(xué)反應(yīng)動力學(xué)，所以科學(xué)地施用阿維菌素不會對柑橘果實及柑橘園土壤的安全性造成威脅。

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