趙會(huì)生

水產(chǎn)品中微生物的快速檢測(cè)方法探討

趙會(huì)生

本文主要闡述了幾種水產(chǎn)品中一些可能致病的微生物快速檢測(cè)的方法，這些水產(chǎn)品的檢測(cè)方法為水產(chǎn)品的檢測(cè)提供更加安全有力的保障。通過(guò)對(duì)幾種比較有效快速檢測(cè)方法的介紹以期可以更好的應(yīng)用在水產(chǎn)品微生物中，更好的保障人們的健康。

水產(chǎn)品；微生物；檢測(cè)方法

一般水產(chǎn)品的致病生物包含了以下幾種，第一種是水產(chǎn)品本身就有的一些細(xì)菌，廣泛分布在水中，比較常見(jiàn)的如李斯特菌（Listeria monocytosens）和冷源性細(xì)菌肉毒桿菌（Clostridium Botulinum）。第二種是人為因素所造成的一些細(xì)菌，一般存在動(dòng)物以及人的腸道，后因?yàn)槿嘶蛘邉?dòng)物對(duì)水環(huán)境的污染而產(chǎn)生的一些細(xì)菌，比較常見(jiàn)的有大腸桿菌（Escherichia coli）和沙門(mén)氏菌（Salmonellussp）。第三種以雙殼軟體動(dòng)物作為載體的病毒，如諾伏克病毒（Norwalk Vivus）和甲型肝炎病毒（HepatitistypeAHAV）。上述微生物一般是通過(guò)水產(chǎn)品來(lái)對(duì)人體造成影響，患者一般表現(xiàn)為嘔吐以及胃腸炎和痢疾等癥狀。目前對(duì)于水產(chǎn)品的檢驗(yàn)主要是針對(duì)水產(chǎn)品和水產(chǎn)品成品中的致病菌以及污染所進(jìn)行的檢驗(yàn)。但常規(guī)檢驗(yàn)一般需要 6～7d，通常也有特異性的缺點(diǎn)。這與水產(chǎn)品的儲(chǔ)存時(shí)間比較短，在實(shí)踐中需要進(jìn)行快速的檢驗(yàn)的要求不符合。生物技術(shù)有著其他技術(shù)在水產(chǎn)品檢驗(yàn)中無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)，在水產(chǎn)品微生物的檢測(cè)方面發(fā)揮出了越來(lái)越重要的作用。本文主要論述了以免疫學(xué)和 DNA作為基礎(chǔ)的快速檢測(cè)水產(chǎn)品致病微生物的幾種有效的方法。

1 實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)

所謂實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，是采用探針和熒光技術(shù)來(lái)確保擴(kuò)增的相關(guān)特異性，同時(shí)所采取的熒光信號(hào)的強(qiáng)弱程度和擴(kuò)增產(chǎn)物之間成正比例關(guān)系，這使得精確的定量成為了可能。實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄PCR方法是一種在常規(guī)逆轉(zhuǎn)錄PCR的檢測(cè)中使用1條熒光探針。這種技術(shù)不需要使用任何電池，對(duì)檢測(cè)和研究人員的自身更加的健康。

伴隨著PCR技術(shù)的成熟，使用逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)諾伏克病毒的技術(shù)成熟。另一方面，采用多種嵌套式PCR的擴(kuò)增，從濾食性軟體動(dòng)物中提取的DNA的片段，通過(guò)研究PCR的一些擴(kuò)增后的限制性的片段可以對(duì)人體糞便中的隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)進(jìn)行鑒定以及檢測(cè)，結(jié)果表明使用這種方法比較適合貝類(lèi)中的賈第蟲(chóng)以及隱孢子蟲(chóng)的相關(guān)檢測(cè)。

2 酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）開(kāi)始于1971年，伴隨著單克隆技術(shù)的不斷發(fā)展和免疫試劑盒的市場(chǎng)化發(fā)展。ELISA在食品分析、臨床醫(yī)藥以及生物學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域都得到了很好的應(yīng)用。ELISA是采取將抗體和抗原的特異性進(jìn)行結(jié)合而作為基礎(chǔ)，使用酶和輔酶來(lái)作為標(biāo)記物，使用酶來(lái)促使反應(yīng)的放大作用。ELISA在進(jìn)行水產(chǎn)品中的檢驗(yàn)報(bào)道比較多，水產(chǎn)品中比較常見(jiàn)的一些致病菌都可以用 ELISA來(lái)進(jìn)行相關(guān)的檢測(cè)。比較常見(jiàn)的如大腸桿菌、李斯特菌以及沙門(mén)氏菌都可通過(guò)這種方法來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。采取這種方法進(jìn)行檢測(cè)更為簡(jiǎn)單和快捷，一般可以在23h左右出具相關(guān)的報(bào)告，比一般常規(guī)的方法要快出5d。同時(shí)這種方法比較穩(wěn)定，不會(huì)和親水氣單孢菌等13種雜菌發(fā)生交叉反應(yīng)。

通過(guò)應(yīng)用酶聯(lián)免疫技術(shù)所制造出來(lái)的全自動(dòng)的免疫分析儀，是使用了熒光分析技術(shù)，采用固相吸附器，使用已知的來(lái)進(jìn)行目標(biāo)生物體的撲捉。采用這種方法的優(yōu)勢(shì)是靈敏度高并且速度很快，能夠?qū)魏死钏固鼐蜕抽T(mén)氏菌做出快速的鑒定。

3 基因芯片技術(shù)

基因芯片技術(shù)以通過(guò)各種基因寡核苷酸點(diǎn)樣在芯片的表面，微生物的樣品DNA經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增之后制備銀光標(biāo)記的探針。再和基因芯片上的寡核苷酸點(diǎn)進(jìn)行雜交，最終通過(guò)掃描儀進(jìn)行定量并且分析熒光分布的模式來(lái)確定檢測(cè)的樣品中是否存在著某種特定的微生物。這種技術(shù)能夠?qū)λa(chǎn)品的致病微生物進(jìn)行高通量的并行檢測(cè)。從理論上分析，基因芯片技術(shù)具有再一次實(shí)驗(yàn)中對(duì)多種潛在致病菌檢驗(yàn)的能力，同時(shí)能夠使用芯片對(duì)某一種病源的多種潛在的遺傳學(xué)的指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。

這種技術(shù)具有特異、靈敏以及快速便捷的特點(diǎn)，因此在水產(chǎn)品致病菌的檢測(cè)過(guò)程中有著很好的應(yīng)用價(jià)值。雖然基因芯片技術(shù)已經(jīng)取得了很好的進(jìn)展，但是要想將這種技術(shù)廣泛的應(yīng)用在食品微生物的檢測(cè)上，還有很多問(wèn)題需要解決，比如降低檢測(cè)的費(fèi)用、建立標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)程序等。所以說(shuō)，基因芯片技術(shù)在水產(chǎn)品致病微生物的檢測(cè)中還需要進(jìn)一步的加強(qiáng)和提升。

4 免疫磁珠分離法

免疫磁珠分離法是通過(guò)將特異性抗體進(jìn)行偶聯(lián)在磁性顆粒的表面，和樣品被檢測(cè)的致病微生物發(fā)生特異性的結(jié)合。載有致病微生物的磁性微球在外加磁場(chǎng)的作用之下向著磁極的方向進(jìn)行聚集。所以能夠特異性的將目標(biāo)微生物從樣品中很好的分離出來(lái)。

與常規(guī)水產(chǎn)品的檢驗(yàn)進(jìn)行比較，使用免疫磁珠分離方法具有比較明顯的優(yōu)勢(shì)。這是因?yàn)椴扇∶庖叽胖榉蛛x法可從大量的水產(chǎn)品中將目標(biāo)微生物進(jìn)行分離，及時(shí)和其他一些比較快速的檢測(cè)方法來(lái)比較，這種技術(shù)仍然能夠較為快速的提升水產(chǎn)品中致病菌的檢測(cè)效率。采取這種方法比較靈敏、特異。靈敏度程度相當(dāng)于是逆轉(zhuǎn)錄PCR方法結(jié)合打點(diǎn)雜交。將視頻中的單核細(xì)胞增多性李斯特菌進(jìn)行免疫磁珠分離和 PCR方法一起進(jìn)行結(jié)合使用的檢測(cè)方法是建立了檢測(cè)視頻中單核細(xì)胞增多性的李斯特菌的IMS-PCR方法，實(shí)踐表明，這種方法可有效的培養(yǎng)基成分、雜菌以及水產(chǎn)品的基質(zhì)等對(duì)PCR檢測(cè)的干擾，且檢測(cè)所耗費(fèi)的時(shí)間比較短，敏感度很高，檢測(cè)的結(jié)果非常準(zhǔn)確。

5 總結(jié)

基于特異遺傳因子和免疫特性的指標(biāo)來(lái)進(jìn)行測(cè)定微生物的數(shù)量的PCR法，基因芯片和免疫法等技術(shù)在現(xiàn)實(shí)中具有很好的應(yīng)用價(jià)值，PCR技術(shù)能夠使得微量特定的 DNA片段在很短的時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增到百萬(wàn)倍，這極大的提升了檢測(cè)的速度和靈敏度。另外，在實(shí)驗(yàn)條件不當(dāng)時(shí)會(huì)引起特異性和靈敏度的下降。相對(duì)而言，基因芯片技術(shù)具有更好的現(xiàn)實(shí)應(yīng)用性，避免了PCR技術(shù)的一些缺陷，但基因芯片的費(fèi)用比較高，如果想要進(jìn)行大規(guī)模的投入使用，則需要大量的時(shí)間以及資金進(jìn)行投入。隨著生物學(xué)技術(shù)的不斷向前發(fā)展，使用多種技術(shù)來(lái)進(jìn)行綜合的使用，能夠使得水產(chǎn)品致病微生物的檢測(cè)發(fā)揮出越來(lái)越積極地作用。

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