潘廷啟攵,文全泰,肖林彬,張照平,顏?zhàn)娴?黃鎖義

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)本科,廣西 百色 533000 E-mail:pantingqigx@163.com; 2.右江民族醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系,廣西 百色 533000)

中藥是我國的國粹,是祖先留下的寶貴遺產(chǎn)。世界植物藥和傳統(tǒng)醫(yī)藥在全球的地位正在悄悄地發(fā)生著深刻的根本性變化,從民間的認(rèn)同,發(fā)展到官方的認(rèn)可,全球已進(jìn)入對傳統(tǒng)藥和植物藥進(jìn)行立法管理的時(shí)代?！侗静菥V目》有記載:金櫻子,無故而服之,以取快欲,則不可;若精氣不固者服之,何咎之有[1]。金櫻子(Rosa laevigata),又名糖罐子、蜂蜜罐、黃茶瓶等,屬薔薇科薔薇屬常綠蔓性灌木野生果樹,在我國西南、華南、華中、華東均有分布,尤其以貴州分布廣,產(chǎn)量高[2]。研究表明,金櫻子果實(shí)中富含的金櫻子多糖、黃酮等物質(zhì)具有抗氧化、抗炎、提高機(jī)體免疫力等作用[3～5],可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥及保健食品領(lǐng)域,市場前景廣闊,因此有效提取金櫻子多糖具有重要意義。

多糖是金櫻子的重要營養(yǎng)成分之一?，F(xiàn)代藥理研究表明金櫻子有收斂止汗止瀉、對抗實(shí)驗(yàn)性粥樣硬化、抗衰老、抗菌抗病毒等藥理作用。臨床上用于治療上呼吸道感染、燒傷燙傷、直腸脫垂及各種婦科疾病等[6]。因此,對多糖進(jìn)行研究具有重要的應(yīng)用價(jià)值。近年來超聲波技術(shù)在天然產(chǎn)物成分提取領(lǐng)域得到了很大發(fā)展和應(yīng)用。超聲提取多糖可以明顯降低提取溫度、縮短提取時(shí)間、提高提取產(chǎn)量,便于產(chǎn)品純化,對提取產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)無影響[7]。有關(guān)金櫻子多糖超聲波提取的研究尚未見報(bào)道,為此研究金櫻子多糖的提取工藝條件。本研究采用超聲波法提取金櫻子多糖,探討影響提取的因素,確定提取最佳條件,為金櫻子的深入研究和開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器 KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、植物粉碎機(jī) FZ102(上海銳豐儀器儀表有限公司)、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)、電熱式恒溫水浴鍋HHS-21-4(江蘇金壇宏凱儀器廠)、SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)、電子分析天平FA1104(上海天平儀器廠)、755B紫外可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.1.2 試藥 金櫻子(購于廣西百色,由右江民族醫(yī)學(xué)院民族醫(yī)學(xué)教研室覃道光副教授鑒定為薔薇科薔薇屬常綠蔓性灌木野生果實(shí))、苯酚、濃硫酸、葡萄糖等均為分析純。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 金櫻子多糖待測液的制備 將干燥的金櫻子在植物粉碎機(jī)上粉碎,制成金櫻子干粉。根據(jù)實(shí)驗(yàn)按需稱取1g金櫻子干粉若干份,分別在不同料液比、超聲功率、提取溫度、作用時(shí)間等單因素條件下進(jìn)行提取實(shí)驗(yàn)。將提取液過濾后定容,取上液適量稀釋一定的倍數(shù),待測。根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,以多糖提取率為實(shí)驗(yàn)指標(biāo),進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 金櫻子多糖提取率的檢測 本實(shí)驗(yàn)對多糖的測定采用苯酚-硫酸法[8]。取待測液0.5ml置于10ml的試管中,加入5%的苯酚溶液1.0ml,混勻,迅速加入5.0ml的濃硫酸,搖勻, 40℃水浴中反應(yīng)30min,然后置于冷水中冷卻10min,以葡萄糖為標(biāo)樣,于波長490nm處測定吸光度值。由一元線性回歸方程推算出金櫻子多糖的質(zhì)量。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取干燥(105℃)至恒重的葡萄糖50mg,加蒸餾水定容至100ml,得標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液0ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml,分別定容至50ml,得不同濃度的稀釋液。分別精密吸取上述稀釋液0.5ml按“1.2.2”中方法顯色,測定吸光度值,以吸光度值(A)對質(zhì)量濃度C(mg/ml)進(jìn)行回歸,得回歸方程為:A=4.840C-0.0276,r =0.9992,表明對照品葡萄糖含量在0.010～0.100mg/ml范圍內(nèi)與對應(yīng)吸光度值有良好線性關(guān)系。

1.2.4 優(yōu)化工藝條件的正交實(shí)驗(yàn) 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)可知,料液比、提取溫度、超聲功率、作用時(shí)間等因素都影響金櫻子多糖的提取效果。為確定這4個(gè)因素的綜合影響,以多糖提取率為指標(biāo),按L9(34)正交表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)確定最佳提取工藝條件,正交因素水平見表1,正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。由分析結(jié)果可知,各因素對金櫻子多糖提取率影響的主次順序?yàn)锳＞B＞C＞D,即提取料液比＞溫度＞超聲功率＞超聲時(shí)間。方差分析見表3,表3表明,提取溫度在超聲提取金櫻子多糖中差異有高度顯著性,料液比在超聲提取金櫻子多糖中差異有顯著性。因此,優(yōu)選出的最佳提取工藝為A1B3C2D3,即按1∶20料液比,以180W的超聲功率在70℃下進(jìn)行提取40min。

表2 L9(34)正交實(shí)驗(yàn)及結(jié)果

表3 方差分析

1.2.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 取金櫻子干粉3份,每份1g,按優(yōu)選出的最佳提取工藝進(jìn)行提取,即按1∶20料液比,以180W的超聲功率在70℃下進(jìn)行提取40min。將提取液過濾后定容,取上液適量稀釋一定的倍數(shù),測定吸光度,計(jì)算金櫻子多糖的提取率。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果見表4,按最佳提取條件進(jìn)行提取,多糖提取率平均為31.01%,RSD為0.33%。結(jié)果與正交試驗(yàn)中的2號試驗(yàn)的多糖提取率相近,因此我們認(rèn)為正交試驗(yàn)得出的結(jié)果是可靠的且工藝穩(wěn)定可行。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2 討論

超聲波提取是利用超聲波產(chǎn)生的熱作用、機(jī)械作用、空化作用等,加速植物材料中的有效成分進(jìn)入溶劑,從而增加有效成分的提取率,縮短提取時(shí)間,并且還可避免高溫對提取成分的影響。本實(shí)驗(yàn)采用蒸餾水為提取劑進(jìn)行提取,提取效率高,極大地縮短了提取周期,起到簡化工藝流程、節(jié)省成本、減少雜質(zhì)的作用,具有合理、經(jīng)濟(jì)、可行的優(yōu)點(diǎn);超聲波提取法在中草藥化學(xué)成分提取中的應(yīng)用已經(jīng)顯示出明顯的優(yōu)勢,具有省時(shí)、節(jié)能、提出率高等優(yōu)點(diǎn),對提取產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)無影響,為金櫻子多糖的提取方法及其工業(yè)化生產(chǎn)提供了新手段。

與傳統(tǒng)工藝相比,超聲提取金櫻子多糖具有省時(shí)、高效、節(jié)能的優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)旨在優(yōu)化金櫻子多糖的超聲提取工藝,以蒸餾水為提取劑,以金櫻子多糖提取率為考察指標(biāo),采用正交設(shè)計(jì)法,得出最佳超聲提取工藝條件為:金櫻子料液比1∶20,超聲功率180W,提取溫度70℃,作用時(shí)間40min。在此條件下,金櫻子多糖的平均提取率為31.01%,RSD為0.33%,采用苯酚-硫酸顯色法測定提取液中的多糖含量簡捷可靠。

[1] 李時(shí)珍.本草綱目(下冊)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 1978:2096-2097.

[2] 蔡金騰,丁筑紅.金櫻子果汁飲料的加工工藝[J].食品科學(xué),1996,17(3):42-44.

[3] 張庭延,聶劉旺,劉愛民,等.金櫻子多糖的免疫活性研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2005,11(4):55-58.

[4] 張庭廷,潘繼紅,聶劉旺,等.金櫻子多糖的抑菌和抗炎作用研究[J].生物學(xué)雜志,2005,22(2):41-42.

[5] 趙云濤,國興明,李付振,等.金櫻子多糖的抗氧化作用[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2003,24(4):35-37.

[6] 鄭虎占,董澤宏,佘靖,等.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用:第三卷[M].北京:學(xué)苑出版社,1998:2915.

[7] 王桓,潘楊,敬思群.超聲強(qiáng)化提取喀什小棗多糖的工藝研究[J].食品研究與開發(fā),2009,30(11):40-43.

[8] 鐘方曉,任海華,李巖.多糖含量測定方法比較[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2007,18(8):1916-1917.