宋艷華 孫洪梅 陳立宏 楊井坤 高明輝

（1.黑龍江職業(yè)學(xué)院，雙城 150111；2.內(nèi)蒙古赤峰市克旗經(jīng)棚一中，赤峰 025350）

2011年8月，黑龍江省雙城市某牛場(chǎng)犢牛曾發(fā)生疑似巴氏桿菌感染病例?，F(xiàn)就該病的流行情況、病理變化、實(shí)驗(yàn)室診斷及防治作簡(jiǎn)要匯報(bào)，供廣大獸醫(yī)臨床工作者參考。

1 發(fā)病情況

發(fā)病牛場(chǎng)共飼養(yǎng)育肥犢牛62頭，其中黃牛10頭，夏洛來41頭，荷爾斯坦公牛11頭，年齡分布均在1～3月齡之間。主訴：最初有5頭發(fā)病。其中，1頭出現(xiàn)高熱、食欲減退、呼吸加快、腹瀉，糞便中混有黏液和血液，發(fā)病后第2 d死亡。另外，4頭癥狀如下：高熱、食欲減退、呼吸困難，在其頭頸部和胸前的皮下出現(xiàn)浮腫，發(fā)病后第3 d死亡。其余57頭，犢牛仍有13頭精神沉郁，呆立不動(dòng)，喜臥；大部分犢牛排稀便。同時(shí)，牛群飲欲和食欲明顯降低，個(gè)別牛流鼻涕，鼻涕內(nèi)帶有血絲。地方獸醫(yī)對(duì)最初發(fā)病的犢牛采用青鏈霉素和大劑量地塞米松治療2 d無效，后改用紅霉素、慶大霉素注射亦不能完全控制病情。該養(yǎng)殖戶不明確這些病牛的病因，就將那頭急性病死牛送到我們實(shí)驗(yàn)室，請(qǐng)求做適當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)及診斷。

2 病理變化

內(nèi)臟器官廣泛性出血。黏膜、漿膜以及肺、舌、皮下組織和肌肉都有出血點(diǎn)。淋巴結(jié)顯著水腫。胸腹腔內(nèi)有大量積液，內(nèi)含纖維素性絮狀物。肺組織發(fā)生肉樣變，呈暗紅色或灰紅色，質(zhì)地較硬，小葉間結(jié)締組織由于發(fā)生漿液性水腫而增寬，其切面呈大理石樣花紋。心內(nèi)外膜有片狀出血。肝、腎發(fā)生較嚴(yán)重的實(shí)質(zhì)變性。咽喉部呈膠凍樣水腫。小腸內(nèi)有米粒大至蠶豆大的潰瘍。脾臟無明顯病理變化。采該病犢牛心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟，10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟切片，鏡檢，可見心肌纖維著色深淺不一，有的發(fā)生斷裂、崩解，甚至溶解；肝臟發(fā)生顆粒變性，胞漿中出現(xiàn)大量微細(xì)顆粒，有時(shí)見胞漿中出現(xiàn)小空泡；肺臟呈典型的纖維素性肺炎，氣管、支氣管及肺泡腔內(nèi)有大量嗜中性細(xì)胞、吞噬細(xì)胞和脫落的上皮細(xì)胞。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 鏡檢

無菌采取病死犢牛的肝臟、脾臟、心血等病變組織直接涂片，制備若干張，自然干燥后，用甲醇固定。先進(jìn)行美藍(lán)染色，鏡檢可見有數(shù)量較多的兩極濃染的近似于橢圓形的球桿菌；再進(jìn)行革蘭氏染色，發(fā)現(xiàn)菌體兩極著色明顯，呈革蘭氏陰性。

3.2 分離培養(yǎng)

將送檢牛的病料（即肝臟、脾臟和肺臟）分別接種于營養(yǎng)瓊脂平板、血瓊脂平板及麥康凱瓊脂平板，置37℃溫箱中培養(yǎng)24 h，未見菌落，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后觀察，可見血瓊脂平板上有淡黃色、圓形、表面光滑、邊緣整齊的濕潤的露珠樣小菌落。經(jīng)美蘭染色，顯微鏡下觀察，可見形態(tài)多為卵圓形、兩端鈍圓且著色較深的短小桿菌；革蘭氏染色陰性。

3.3 生化試驗(yàn)

無菌操作，鉤取血瓊脂平板培養(yǎng)基上的可疑菌落，分別接種到蔗糖、葡萄糖、果糖、甘露醇液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后觀察，結(jié)果為產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；另一組接種鼠李糖、水楊苷液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后結(jié)果為陰性（不發(fā)酵）；而M-R試驗(yàn)及V-P試驗(yàn)均為陰性；硫化氫試驗(yàn)為陽性，甲基紅試驗(yàn)為陰性反應(yīng)。根據(jù)細(xì)菌的菌落特征、生長特性和生化鑒定結(jié)果，查閱《伯吉手冊(cè)》，確定該細(xì)菌為多殺性巴氏桿菌。

3.4 動(dòng)物試驗(yàn)

將菌落收集于離心管中，加適量生理鹽水混勻，離心，取上清液給小白鼠注射，劑量為0.2 ml/只，接種后小白鼠18～24 h死亡，其病理變化與犢牛病理變化一致，并在小鼠的肺臟檢出與病犢牛肺臟同樣的病原菌——巴氏桿菌，且接種小鼠的內(nèi)臟及胃腸道敗血癥變化更為明顯。

3.5 藥敏試驗(yàn)

將純化的細(xì)菌接種于血清瓊脂培養(yǎng)基上，用紙片法對(duì)15種藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，置37℃溫箱中培養(yǎng)24 h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)頭孢曲松鈉、左旋氧氟沙星高度敏感，其抑菌圈大于20 mm；恩諾沙星、磺胺嘧啶鈉中度敏感，其抑菌圈大于10 mm；青霉素、卡諾霉素、紅霉素和慶大霉素不敏感。

4 治療

首先，隔離病牛。用頭孢曲松鈉、美洛西林、丁胺卡那進(jìn)行治療（用藥劑量參照說明書）。對(duì)體溫升高、食欲減退的病牛在使用以上藥物的同時(shí)，再用10%磺胺嘧啶鈉注射液50～100 ml配入500 ml生理鹽水中、5%碳酸氫鈉溶液100～150 ml靜脈注射，2次/d，直到體溫正常。連用藥3 d后牛群癥狀大為好轉(zhuǎn)，5 d后，除5頭嚴(yán)重病牛死亡外，其余牛8 d后全部康復(fù)。在對(duì)病牛進(jìn)行隔離治療的同時(shí)，注意圈舍通風(fēng)，對(duì)圈舍、飼槽、用具及污染場(chǎng)地用碘制劑或火堿徹底消毒，糞便收集作生物發(fā)酵處理。

4 預(yù)防

預(yù)防，可采用接種疫苗的方法。目前用于預(yù)防巴氏桿菌病的疫苗有滅活苗和弱毒苗2種，一般疫苗在接種14 d后可以產(chǎn)生較好的免疫效果，免疫期為6～9個(gè)月。在疫區(qū)，每年有必要在春冬2季進(jìn)行2次接種。對(duì)于從外地引入的犢牛，在運(yùn)輸期間應(yīng)細(xì)心照料，避免過度勞累。為了避免運(yùn)輸應(yīng)激引起巴氏桿菌病，可以在運(yùn)輸前注射高免血清預(yù)防；到達(dá)目的地后，應(yīng)先隔離觀察，不立即與其他犢牛盲目混群，以防擴(kuò)大疾病流行范圍。

[1]蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)（第四版）[M]北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：301-304

[2]張宏偉，董永森.動(dòng)物疫病 [M]北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009：74-83

[3]許慶陽.牛巴氏桿菌病[J].畜牧與飼料科學(xué)，2009，（3）：11-12