郭閆葵 賈 敏 張曉燕 高 琛

（山東省濟(jì)南市中醫(yī)醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250012）

隨著年齡的增加，血管性癡呆的患病率逐年增長，國內(nèi)調(diào)查顯示：60歲以上老人的血管性癡呆的患病率為32.4/10萬，給個人和社會帶來巨大的負(fù)擔(dān)。筆者以中醫(yī)藥理論為基礎(chǔ)，結(jié)合多年臨床經(jīng)驗，認(rèn)為血管性癡呆的病位在腦，腎虛為本，痰濁瘀血蘊(yùn)積，化熱生風(fēng)，釀生濁毒為本病發(fā)病過程中的基本環(huán)節(jié)。因此，本研究提出了補(bǔ)腎瀉濁法作為治療的基本法則，觀察醒神健腦顆粒對血管性癡呆的防治作用。

1 材料與方法

1.1 動物 Wistar大鼠由山東中醫(yī)藥大學(xué)動物中心提供，動物合格證：魯動字200500201。

1.2 藥物 醒神健腦顆粒由濟(jì)南市中醫(yī)醫(yī)院提供，每克相當(dāng)于含生藥2.1 g，使用前用生理鹽水適當(dāng)稀釋。實驗動物所用醒神健腦顆粒按高、低劑量分別配成 20%、10%（4、2 g/kg）藥液，分別相當(dāng)于臨床人用劑量的10、5倍，于4℃儲藏備用。實驗用陽性對照藥石杉堿甲，河南太龍藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號20090205，50 mg/片。實驗動物用藥劑量為15.0 mg/kg，相當(dāng)于臨床人用劑量的5倍。

1.3 試劑及儀器 UV2100紫外、可見光分光光度計，上海尤尼卡公司。LDZ4-0.8醫(yī)用低速離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠。FA1104型電子分析天平，上海天平儀器廠。WKY型移液器，上海榮泰生化工程有限公司。XZC－5A小鼠跳臺儀，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站。實驗用超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）藥盒，南京建成公司提供。鹽酸腎上腺素注射液，天津金耀氨基酸有限公司0708051。戊巴比妥鈉，上?；瘜W(xué)試劑公司進(jìn)口分裝。氨基乙酸，湖南洞庭制藥廠，990526.伊文思蘭，F(xiàn)luka進(jìn)口。

1.4 模型制備 健康大鼠50只，隨機(jī)均勻分為5組。分別是空白對照組和模型對照組 （灌胃生理鹽水）、醒神健腦高劑量組（灌胃醒神健腦液4 g/kg）、醒神健腦低劑量組（灌胃醒神健腦液2 g/kg）、石杉堿甲組（灌胃石杉堿甲15.0 mg/kg）。每日1次，連續(xù)5 d。末次給藥后1 h進(jìn)行實驗。除空白對照組外，其余各組稱體質(zhì)量后，腹腔注射戊巴比妥鈉30 mg/kg麻醉，仰臥固定，解剖頸部；分離左頸總動脈，穿線結(jié)扎近心端，遠(yuǎn)心端插入頭皮針并固定。通過頭皮針緩慢注入氨基乙酸腎上腺素混合液（每毫升含氨基乙酸75 mg，腎上腺素37.5 mg）0.2 mL，以誘發(fā)腦血管內(nèi)多發(fā)性腦血栓形成（空白對照組不注射）。4min后注入1.5%伊文思蘭0.2mL。8 min后處死動物，取左側(cè)大腦半球，稱質(zhì)量。

1.5 標(biāo)本采集與檢測 （1）抗血栓實驗：大鼠取適量腦組織用丙酮勻漿，勻漿室溫下靜置2 h，3000 r/min離心10 min，上清液于分光光度計620 nm測OD值（該值高低代表腦內(nèi)血栓形成的多少）。（2）生化指標(biāo)：測定多發(fā)性腦栓塞模型大鼠腦組織SOD、MDA含量。（3）組織形態(tài)學(xué)觀測:將處死大鼠部分腦組織常規(guī)固定，石蠟包埋，HE染色，進(jìn)行病理學(xué)光鏡檢查。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，比較組間差異。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 醒神健腦顆?？寡ㄗ饔?見表1。結(jié)果顯示兩種劑量的醒神健腦顆粒及石杉堿甲均可顯著減少腦內(nèi)血栓形成，明顯減少伊文思蘭在腦內(nèi)的儲留量（P＜0.05），大劑量的醒神健腦顆粒作用更加突出。

表1 各組大鼠在體腦血栓比較（±s）

表1 各組大鼠在體腦血栓比較（±s）

與模型對照組比較，*P＜0.05。下同。

組 別空白對照組n 10光密度值0.0131±0.0032模型對照組 10 0.4380±0.0651醒神健腦高劑量組 10 0.1724±0.0354醒神健腦低劑量組 10 0.1198±0.0291石杉堿甲組 10 0.1390±0.0117

2.2 醒神健腦顆粒神經(jīng)生化學(xué)指標(biāo)的影響 見表2。醒神健腦高、低劑量組SOD含量均高于模型對照組（P＜0.05），醒神液高劑量組MDA含量高于醒神液低劑量組和石杉堿甲組 （P＜0.05）。

2.3 組織形態(tài)學(xué)觀察 左側(cè)海馬區(qū)組織形態(tài)光鏡檢查結(jié)果示，空白對照組：海馬組織結(jié)構(gòu)正常，無充血、水腫現(xiàn)象。錐體細(xì)胞分層整齊排列。細(xì)胞形態(tài)正常，邊界清晰；核仁、核膜清晰可見。細(xì)胞間質(zhì)均勻，核周體與基質(zhì)間未見明顯間隙。模型對照組：海馬組織細(xì)胞水腫明顯，細(xì)胞帶排列紊亂，細(xì)胞間隙明顯增寬。大部分錐體細(xì)胞呈缺血改變，表現(xiàn)為胞體腫脹變形，細(xì)胞漿呈空泡狀，胞核固縮，核仁、核膜模糊；細(xì)胞間質(zhì)水腫明顯。部分神經(jīng)元壞死、破碎或消失。醒神健腦高劑量組：海馬組織無明顯水腫、充血；多數(shù)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)較完整，形態(tài)相對正常；細(xì)胞及間質(zhì)水腫程度輕；少量神經(jīng)元變性壞死。醒神健腦低劑量組：海馬組織無明顯充血、水腫；錐體細(xì)胞層數(shù)有所減少，細(xì)胞間隙稍大，層次結(jié)構(gòu)不清；但細(xì)胞帶排列比較規(guī)整，細(xì)胞形態(tài)略不規(guī)則，多呈輕度缺血改變。少量神經(jīng)元水腫、變性，細(xì)胞核固縮或消失。石杉堿甲組：海馬組織輕度充血、水腫；可基本保持錐體細(xì)胞，但細(xì)胞形態(tài)欠規(guī)則，多部分細(xì)胞呈輕度缺血改變；細(xì)胞輕度固縮，核仁、核膜結(jié)構(gòu)尚清晰；少量神經(jīng)元變性壞死。見圖1。

表2 各組大鼠腦內(nèi)SOD、MDA含量比較（±s）

表2 各組大鼠腦內(nèi)SOD、MDA含量比較（±s）

與醒神健腦高劑量組比較，△P＜0.05。

組 別空白對照組n 10 SOD（U/mL） MDA（mmol/mL）3.0210±0.9912 10.013±1.128模型對照組 10醒神健腦高劑量組 10 2.0098±0.0671 14.560±1.310 3.8841±0.1029* 9.301±0.731*醒神健腦低劑量組 103.3270±0.0563* 9.105±0.873*△石杉堿甲組 102.9983±0.0975* 9.016±0.904*△

圖1 各組大鼠腦海馬區(qū)組織細(xì)胞形態(tài)（HE染色，×400）

3 討 論

大腦是氧需求量很高的組織器官，缺血再灌注后產(chǎn)生大量的自由基，可發(fā)揮強(qiáng)氧化作用，它可以與生物大分子，尤其是膜上的不飽和脂肪酸反應(yīng)，形成脂質(zhì)過氧化物，破壞生物膜系統(tǒng)［1］，對神經(jīng)細(xì)胞有明顯的毒性作用。SOD為機(jī)體直接清除自由基防止氧化損傷的重要酶類，其主要功能是將氧的單價還原產(chǎn)物O2－歧化成水，從而阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)，抑制脂褐素形成，保護(hù)細(xì)胞免受毒害作用［2］。研究表明，衰老動物體內(nèi)有大量脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，并伴有SOD的降低。脂質(zhì)過氧化物的生成和沉積可以引起一系列的衰老癥狀，因此脂質(zhì)過氧化物的含量是評價衰老的主要指標(biāo)之一。MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物，故MDA水平間接反映了組織中自由基含量及脂質(zhì)過氧化程度。研究發(fā)現(xiàn)，腦缺血后腦組織中MDA及含水量明顯增加，而抗氧化酶活性明顯降低，意味著腦缺血后過多產(chǎn)生的自由基導(dǎo)致了缺血性腦損傷［3］。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，海馬屬邊緣系統(tǒng)，是與學(xué)習(xí)記憶和情緒、行為功能密切相關(guān)的重要腦區(qū)，是對腦缺血最敏感的區(qū)域之一［4］。血管性癡呆智能衰退，與腦缺血造成海馬損傷密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，即使短暫的腦缺血也可造成海馬CAI區(qū)錐體細(xì)胞延遲性神經(jīng)元死亡［5］。

醒神健腦顆粒由何首烏、膽南星、女貞子、遠(yuǎn)志、赤芍、丹參、地龍等組成，具有補(bǔ)腎益精、活血化痰、開竅醒神之功效。本實驗結(jié)果顯示：一定劑量的醒神健腦顆?？蓽p少大鼠在體腦血栓形成；升高SOD活性，降低組織內(nèi)MDA水平，體現(xiàn)其抗氧化、清除自由基的作用；同時對缺血缺氧狀態(tài)下腦組織細(xì)胞、神經(jīng)元呈現(xiàn)明顯保護(hù)作用。

［1］龔秀云，吳曉光，高維娟，等.益腎降濁湯對大鼠腦缺血再灌注損傷腦組織抗氧化酶活力的干預(yù)效應(yīng)［J］.中國臨床康復(fù)，2006，10（19）：41-43.

［2］戴恩來，馬鴻斌，歐秀梅，等.通絡(luò)益智散對擬血管性癡呆大鼠AchE，MSA 和 SOD 的影響［J］.甘肅中醫(yī)，2006，19（5）:38-40.

［3］王松林，王桂敏，楊霄鵬.首烏延壽丹對大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用［J］.中國實用神經(jīng)疾病雜志，2007，10（1）：33-34.

［4］趙衛(wèi)國，呂素君.中醫(yī)藥治療血管性癡呆作用機(jī)制的實驗研究探討［J］.實用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2005，19（6）：504-506.

［5］趙建新，田元祥，李國明，等.腦缺血再灌注擬血管性癡呆小鼠皮層及海馬細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)動態(tài)觀察［J］.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2000，17（4）:200.