葉冬蘭

（湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北武漢430014）

腑實(shí)證是兒科疾病中常見(jiàn)病證，小兒脾常不足，常因飲食不慎、感受外邪，腑氣不通，則大便秘結(jié)，并見(jiàn)發(fā)熱。通腑導(dǎo)滯法是兒科治療腑實(shí)證的常用方法 。通腑方是武漢市中醫(yī)醫(yī)院兒科經(jīng)驗(yàn)方，為了探討通腑方治療小兒腑實(shí)證的作用機(jī)理，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腑實(shí)證大鼠模型，觀察不同劑量通腑方直腸滴入對(duì)腑實(shí)證大鼠體溫及胃腸功能的影響。

1 材料與方法

1.1 藥物通腑方：由大黃、川樸、萊菔子等藥物組成，水煎劑（武漢市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)基地制備）。造模藥物：附子、肉桂、干姜水煎劑（武漢市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)基地制備）。陽(yáng)性藥物：番瀉葉浸劑（武漢市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)基地制備）。

1.2 動(dòng)物SD大鼠42只，SFF級(jí)，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半。湖北省疾病預(yù)防控制中心，合格證號(hào)：SCXK（鄂）2008-0005）。

1.3 儀器與試藥電子分析天平（上海方瑞儀器有限公司）；Powerlab電子體溫計(jì)（歐姆龍株式會(huì)社）；光學(xué)顯微鏡（Motic公司BA200型）；低溫高速離心機(jī)（上海利鑫堅(jiān)離心機(jī)儀器有限公司）；大鼠胃動(dòng)素（MTL）ELISA試劑盒（武漢基因美生物制品有限公司）；大鼠胃泌素（GAS）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）（武漢基因美生物制品有限公司）；酶標(biāo)儀（美國(guó)寶特Blo-TekELX800）；輸液器（山東瑞通高分子醫(yī)療器械有限公司）；羧甲基纖維素鈉（sigma公司）；酵母菌（安琪酵母菌制品有限公司，批號(hào)20120312）。1.4模型制備將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、通腑方高、中、低劑量組、陽(yáng)性組，每組7只。參考梁念海［1］腑實(shí)證造模方法 ，除去空白對(duì)照組，其他5組每日用附子、肉桂、干姜（比例為1∶1∶1）水煎劑，按20 g/kg灌胃，用藥12 d后禁食（不禁水）12 h，給濃度為100 g/L大鼠糞便混懸液2 mL灌胃，每日2次，連續(xù)2 d，同時(shí)5%乙醇代水隨意飲用，每日更換。第14日下午16時(shí)開(kāi)始，觀察并記錄各組大鼠的飲食、大便等外觀方面的變化。以排便粒數(shù)減少，大便干結(jié)，并成圓珠狀或串珠作為腑實(shí)證造模成功標(biāo)準(zhǔn)。

1.5 給藥方法 造模成功后，從第15日15：00開(kāi)始禁食禁水18 h，第16日9：00開(kāi)始給模型組直腸滴注蒸餾水，低劑量組直腸滴注低劑量通腑方（2 g/mL），中劑量組直腸滴注中劑量通腑方（4 g/mL），高劑量組直腸滴注高劑量通腑方（8 g/mL），陽(yáng)性藥物組直腸滴注番瀉葉浸劑（4 g/mL），每日2次，連續(xù)3 d。大鼠給藥量為2 mL/200 g。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè)（1）解熱實(shí)驗(yàn)：每日觀察并記錄各組實(shí)驗(yàn)大鼠的毛發(fā)色澤、行為狀態(tài)、飲食、大便等外觀方面的變化。給藥期間每日固定時(shí)間測(cè)體溫1次。體溫采用肛溫測(cè)量法，將電子體溫計(jì)插入大鼠肛門（探頭插入0.5 cm），待讀數(shù)穩(wěn)定后，讀取數(shù)值。首次給藥前30 min，于每鼠背部皮下注射34℃濃度為15%的酵母菌溶液，劑量為10 mL/kg，制造發(fā)熱大鼠模型。給藥后0.5、1、2、4、6、8 h各測(cè)量并記錄體溫1次。（2）胃排空率：末次給藥1 h后按10 mL/kg灌營(yíng)養(yǎng)性半固體糊［2］，20 min后將大鼠剪頭處死，打開(kāi)腹腔結(jié)扎胃賁門及幽門。立即取胃在電子天平上稱全胃質(zhì)量，然后剪開(kāi)胃大彎洗凈胃內(nèi)容物，將空胃在濾紙上輕拭蘸去多余水分稱空胃質(zhì)量，按下列公式計(jì)算胃排空率胃排空率，胃排空率胃排空率%=1－（全胃質(zhì)量-空胃質(zhì)量）／食料質(zhì)量×100%。將取胃后的動(dòng)物分離出自幽門至回盲部的全部小腸，測(cè)量小腸全長(zhǎng)及炭末糊頭端至幽門距離，計(jì)算炭末推進(jìn)率%=炭末頭端至幽門距離/小腸全長(zhǎng)×100%。（3）血漿MTL和GAS：各組大鼠剪頭后采血，4℃，4000 r/min離心10 min制備血漿，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法分別測(cè)各組大鼠血漿MTL和GAS含量。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（s）表示，用多樣本間兩兩比較采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 解熱實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表1。0.5 h，各組大鼠體溫均開(kāi)始升高，各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。1 h體溫各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。2 h體溫各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。4 h體溫各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。6 h高劑量組同模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），陽(yáng)性組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。8 h低劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），中劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），陽(yáng)性組與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說(shuō)明通腑方有一定的解熱作用，并且其解熱作用比陽(yáng)性藥物作用更持久。

表1 各組大鼠體溫比較（℃，s）

表1 各組大鼠體溫比較（℃，s）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。

組別n空白對(duì)照組7模型組7 4 h 30.3±0.7 30.1±0.531.3±0.631.7±0.6 32.1±0.5 34.3±0.6致熱前30.3±0.6 0.5 h 30.0±0.5 1 h2 h 30.4±0.6 30.3±0.6 31.5±0.5 31.5±0.8 6 h8 h 30.2±0.8 30.2±0.8陽(yáng)性組7低劑量組7中劑量組7 30.1±0.431.1±0.531.4±0.7 31.8±0.8*34.0±0.6 30.1±0.331.3±0.831.6±0.4 32.1±0.5 32.7±0.7**30.0±0.431.3±0.831.8±0.4 32.4±0.5 32.8±0.5**31.4±0.6 31.4±0.6 31.5±0.8 31.5±0.8 31.4±0.8 31.4±0.6高劑量組730.0±0.531.2±0.631.3±0.7 31.6±0.8*32.2±0.8**31.4±0.6 31.3±0.6

2.2 通腑方對(duì)胃排空率和腸推率的影響見(jiàn)表2。排空率：中劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），中劑量組與高劑量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。說(shuō)明通腑方對(duì)胃排空有促進(jìn)作用，中劑量組比高劑量組作用更好。腸推率：低劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），中劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），中劑量組與高劑量組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說(shuō)明3個(gè)劑量的通腑方對(duì)腸蠕動(dòng)均有推動(dòng)作用，中劑量組與高劑量組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。

表2 各組大鼠胃排空率和腸推率比較（%，±s）

表2 各組大鼠胃排空率和腸推率比較（%，±s）

組別n空白對(duì)照組7模型組7排空率84.26±2.77腸推率45.87±11.6 44.21±5.1932.95±7.56陽(yáng)性組7低劑量組7中劑量組7 62.32±6.0247.71±6.56 42.64±3.2140.86±9.54 66.26±4.14**46.59±14.64**高劑量組758.21±3.62**45.47±13.20**

2.3 通腑方對(duì)大鼠血漿MTL、GAS含量的影響見(jiàn)表3。中劑量組和模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。中劑量組和陽(yáng)性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。中劑量組和高劑量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說(shuō)明中劑量、高劑量組能促進(jìn)胃動(dòng)素產(chǎn)生，但中劑量與高劑量無(wú)明顯差異。中劑量、高劑量組能促進(jìn)胃泌素產(chǎn)生，但中劑量與高劑量無(wú)明顯差異。

表3 各組大鼠血漿MTL、GAS含量比較（μmol/L，±s）

表3 各組大鼠血漿MTL、GAS含量比較（μmol/L，±s）

組別n空白對(duì)照組7模型組7 MTL 67.29±2.77 GAS 159.98±11.60 43.12±5.19124.59±7.56陽(yáng)性組7低劑量組7中劑量組7 62.01±6.02156.71±12.56 41.86±3.21128.86±9.66 57.37±4.14**154.59±14.64**高劑量組758.21±3.62**155.47±13.20**

3 討論

通腑方來(lái)源于《傷寒論》之小承氣湯，去原方枳實(shí)改用萊菔子，枳實(shí)破氣之力太強(qiáng)，小兒稟賦薄弱，不耐攻克，故改為萊菔子，藥性平穩(wěn)而有下氣通腑之功。肺與大腸相表里，熱結(jié)不通，邪郁于肺，則郁熱難瀉，應(yīng)用通腑使邪有出路而瀉熱?？涤裢さ龋?］認(rèn)為大黃有清熱瀉火解毒，活血祛瘀，導(dǎo)滯作用，同時(shí)有明顯拮抗內(nèi)毒素作用，能抑制內(nèi)毒素發(fā)熱。

實(shí)驗(yàn)表明通腑方有一定的解熱作用，胃的排空和腸的推動(dòng)功能是檢測(cè)胃腸動(dòng)力的2個(gè)重要指標(biāo)。MTL能刺激胃和上胃腸道運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)消化間期的胃排空。GAS可以刺激胃酸分泌。通腑方對(duì)胃排空有促進(jìn)作用，對(duì)腸蠕動(dòng)也有推動(dòng)作用，且能促進(jìn)MTL和GAS的產(chǎn)生，對(duì)消化功能有著積極的作用。胃腑以通降為順，若其不通不降，則邪滯而為病，故恢復(fù)胃腑通降功能至關(guān)重要。通腑方使大便通利，則胃得通降，脾胃功能恢復(fù)。大黃善通腑氣攻積滯，朱金照等［4］在對(duì)大黃促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)機(jī)制的研究中認(rèn)為，大黃通過(guò)促進(jìn)P物質(zhì)的釋放來(lái)興奮腸道，并使血漿及空腸組織中VIP降低，從而促進(jìn)腸道的運(yùn)動(dòng)。厚樸能燥濕消痰，下氣除滿。王賀玲等［5］對(duì)在體大鼠胃排空的實(shí)驗(yàn)中證實(shí)，厚樸對(duì)大鼠胃腸動(dòng)力障礙有明顯的改善作用，其機(jī)制與提高血漿胃動(dòng)素水平有關(guān)。萊菔子能消食除脹，降氣化痰。唐健元等［6］研究表明萊菔子具有明顯的促進(jìn)小鼠胃排空和腸推進(jìn)的作用。直腸屬于中醫(yī)學(xué)大腸，與肺相表里，且其絡(luò)肺，“肺朝百脈”，通腑方經(jīng)直腸吸收輸于肺，通過(guò)肺的宣發(fā)作用運(yùn)送到全身而發(fā)揮其整體作用，故治療中應(yīng)用通腑方灌腸療效顯著。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，中、高劑量的通腑方對(duì)于腑實(shí)證的大鼠的解熱、促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)、促進(jìn)GAS、MTL胃動(dòng)素分泌較之低劑量組有明顯優(yōu)勢(shì)，同時(shí)中、高劑量組之間沒(méi)有顯著性差異，這表明中劑量的配方就可以達(dá)到較好的解熱、促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)、促進(jìn)GAS、MTL分泌作用。這就有效地避免了高劑量的藥物在治療疾病的產(chǎn)生的寒涼、瀉下太過(guò)，損傷脾胃等副作用。本實(shí)驗(yàn)研究為臨床進(jìn)一步擴(kuò)大該方的運(yùn)用范圍做出了有益的探討，同時(shí)實(shí)驗(yàn)所提供的數(shù)據(jù)為臨床運(yùn)用本方時(shí)的用量也做了科學(xué)的指導(dǎo)，通腑方的解熱、促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)及促進(jìn)GAS、MTL分泌的機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

［1］ 梁念海，宓穗卿，胡瑞德，等.胃熱證動(dòng)物模型的建立［J］.中藥新藥與臨床藥理，2004，15（2）：82-86.

［2］ 李秀芳，林青.云木香丙酮提取物對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型的影響［J］.云南中醫(yī)中藥雜志，2007，12（6）：34-35.

［3］ 康玉亭，康小剛.小承氣湯保留灌腸治療小兒高熱驚厥60例［J］.陜西中醫(yī)，2005，26（10）：1041.

［4］ 朱金照，冷恩仁，史洪濤，等.大黃促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)的機(jī)制的探討［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002，18（6）：339.

［5］ 王賀玲，白菡，王學(xué)清，等.厚樸對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠的胃動(dòng)力影響［J］.實(shí)用藥物與臨床，2007，10（2）：65-66.

［6］ 唐健元，張磊，彭成，等.萊菔子行氣消食的機(jī)制研究［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2003，11（5）：289.