楊 娟 肖 蘭 楊繼洲

宮頸癌的發(fā)病率日趨上升并有年輕化的趨勢，早期發(fā)現(xiàn)癌前病變是防治宮頸癌的關(guān)鍵。國際癌癥中心于2004年提出HPV感染是宮頸鱗狀細(xì)胞癌及宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變的必要因素，沒有持續(xù)的HPV感染，女性發(fā)生宮頸鱗狀細(xì)胞癌的可能性幾乎為零[1,2]。我們利用表面等離子諧振技術(shù)(surface plasmon resonance，SPR)檢測多種HPV的類型及負(fù)載量，旨在研究高危型HPV負(fù)載量與子宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變及子宮頸鱗癌的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2011年1月至2012年1月對(duì)在孝感市中心醫(yī)院經(jīng)TCT診斷為低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)、不能明確意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞，不能除外高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(atypical squamous cells cannot exclude HSIL ，ASC-H)的221例患者同時(shí)進(jìn)行HPV檢測，其中HPV高危陽性的患者196例，將這196例患者作為觀察對(duì)象。HPV高危陽性的196例患者年齡22～56歲，平均年齡37歲，均進(jìn)行了陰道鏡活檢，其中子宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ級(jí)87例，子宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級(jí)(CINⅡ/Ⅲ)級(jí)69例，鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)40例。

1.2 方法

1.2.1 TCT檢測 用薄層液基細(xì)胞學(xué)宮頸刷插入宮頸口，在宮頸外口鱗柱狀上皮交界處，均勻旋轉(zhuǎn)3～5周，取出宮頸刷，將宮頸刷置于保存液瓶中(保存液由孝感宏翔生物技術(shù)有限公司提供)，細(xì)胞學(xué)分類根據(jù) TBS 2001年陰道 /宮頸細(xì)胞學(xué)診斷系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷。

1.2.2 HPV檢測 DNA提?。孩賹⒓?xì)胞保存液混勻，取1 ml細(xì)胞懸液，加入到1.5 ml離心管中，12 000離心5 min，用移液器去上清。②向細(xì)胞沉淀中加1 ml Cell Washing Solution，搖動(dòng)或渦旋，充分懸浮細(xì)胞沉淀，12 000離心5 min，用移液器去上清。③加入200 μl FastExtract Solution，搖動(dòng)或渦旋，充分懸浮細(xì)胞沉淀。④95℃水浴15 min，每5 min混勻一次。⑤12 000離心3 min，上清可直接用于PCR擴(kuò)增。

PCR擴(kuò)增:①配體系95 μl擴(kuò)增混合液+5 μl樣本。每4支樣本配1支陽性對(duì)照管。②配好的體系充分混勻離心后于PCR儀內(nèi)特定程序擴(kuò)增。③擴(kuò)增完成后如不立即檢測，可置于-20℃保存，于1周內(nèi)完成檢測。

分型檢測:①擴(kuò)增好的樣本每管加入60 μl雜交緩沖液和20 μl陽性對(duì)照，充分混勻后離心。②將混勻后的樣本于PCR儀內(nèi)95℃變性5 min。③變性后的樣本即可放入W2600基因分型檢測儀內(nèi)檢測。檢測完成后儀器自動(dòng)分析結(jié)果，整組檢測結(jié)束后，應(yīng)對(duì)儀器做簡單維護(hù)。

1.2.3 陰道鏡活檢 于非月經(jīng)期窺器暴露宮頸，依次經(jīng)過涂生理鹽水，5%醋酸溶液，碘染，鏡下觀察，取異常和可疑部位活檢。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用χ2檢驗(yàn)，t檢驗(yàn)及直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：高危型HPV陽性率CINⅠ分別與CINⅡ/Ⅲ及SCC比較，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，CINⅡ/Ⅲ與SCC比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HPV平均負(fù)載量CINⅠ分別與CINⅡ/Ⅲ及SCC比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，CINⅡ/Ⅲ與SCC無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ及SCC和HPV負(fù)載量呈正相關(guān)(γ=0.521,P<0.05)，CINⅡ/Ⅲ、SCC和HPV負(fù)載量無明顯相關(guān)(γ=0.065,P>0.05)，見表1。

表1 高危型HPV感染與宮頸病變的情況

3 討論

HPV是乳多空病毒科中一組病毒的總稱，分布廣泛。HPV可引起人類良性腫瘤和疣，如尖銳濕疣等，以及惡性腫瘤如宮頸癌等。依據(jù)不同型別的HPV與腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)性的高低分為低危型及高危型。尖銳濕疣、扁平濕疣等良性病變中以低危型感染為主,而CINⅡ、Ⅲ及宮頸癌則以高危型感染為主，蔣艷萍等[3]的研究也表明CIN 程度的增加， 高危型HPV感染比例會(huì)增加。

我們通過對(duì)196例宮頸癌前病變患者情況進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：CINⅡ/Ⅲ及SCC的高危型HPV陽性率明顯高于CINⅠ，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示高危型HPV感染與宮頸癌前病變進(jìn)展有相關(guān)性；高危型HPV負(fù)載量和CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ及SCC呈正相關(guān)，提示高危型HPV負(fù)載量能預(yù)測CINⅠ級(jí)的進(jìn)展，而高危型HPV負(fù)載量和CINⅡ/Ⅲ及SCC無相關(guān)性，提示高危型HPV負(fù)載量不能預(yù)測宮頸高級(jí)別上皮內(nèi)病變的進(jìn)展。我們認(rèn)為：確診CIN后有必要進(jìn)行HPV DNA 分型，若為高危型，應(yīng)積極治療，尤其是組織學(xué)診斷為CINⅠ，檢測為高危型HPV感染的。有學(xué)者認(rèn)為，CIN患者行 LEEP或?qū)m頸冷刀錐切 (CKC)，術(shù)前高危型HPV負(fù)載量與病灶殘留和復(fù)發(fā)密切相關(guān)。 Park等[4]分析了 77例因CINⅡ/Ⅲ級(jí)或微小浸潤癌行CKC后 6個(gè)月內(nèi)再行全子宮切除術(shù)的患者,發(fā)現(xiàn)術(shù)前高危型HPV負(fù)荷量>300(HC2法)的患者 67.5%術(shù)后有殘留,而術(shù)前高危型HPV負(fù)荷量<300，殘留率只有37.8%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Song等[5]研究了67例高危型HPV陽性的CINⅡ/Ⅲ患者,所有患者均行CKC,且切緣均為陰性。術(shù)后 6個(gè)月再次行HPV DNA檢測(HC2法)，發(fā)現(xiàn)術(shù)前高危型HPV DNA>500的患者 43.8%存在 HPV持續(xù)感染,而高危型HPV DNA<500的患者僅 9.8%術(shù)后存在 H PV持續(xù)感染，提示術(shù)前高病毒負(fù)荷是術(shù)后切緣陰性患者持續(xù)病毒感染的獨(dú)立影響因素。行 LEEP、 CKC術(shù)均能顯著降低 HPV負(fù)荷量，但仍有部分CIN患者手術(shù)治療后HPV仍未轉(zhuǎn)陰，原因可能是： ①術(shù)前患者感染 HPV 負(fù)荷量高,病毒拷貝數(shù)多；②術(shù)后HPV再感染；③可能與復(fù)查時(shí)間有關(guān)。Bar -Am等[6]認(rèn)為 CIN患者治療后即使細(xì)胞學(xué)正常,若 HPV 病毒負(fù)荷量較高,則存在CINⅡ/Ⅲ的可能性達(dá) 80%。手術(shù)治療后仍持續(xù)感染 HPV的患者，應(yīng)密切隨訪,因?yàn)檫@些患者是術(shù)后病灶殘留或復(fù)發(fā)的高危人群。

綜上，高危型HPV感染與宮頸癌前病變的發(fā)展密切相關(guān)，并且高危型HPV負(fù)載量與子宮頸癌前病變的發(fā)展呈正相關(guān)，高危型HPV負(fù)載量能預(yù)測低級(jí)別宮頸病變的風(fēng)險(xiǎn)，能預(yù)測宮頸病變治療后有無殘留病灶,并能評(píng)估治療效果及判斷預(yù)后。對(duì)于患者的臨床診治具有重要指導(dǎo)作用。

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