王雅琦 王美鑒 邱志敏 涂建仁 蘇永峰 董涵之

非霍奇金惡性淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)是少數(shù)幾種可以完全治愈的腫瘤之一。對(duì)于初治患者,常規(guī)全身化療僅有50%～70%的患者可獲得完全緩解[1],約60%的NHL患者治療后不能緩解或緩解后復(fù)發(fā)。有研究表明[2],多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)基因表達(dá)對(duì)惡性血液病的耐藥及化療效果有重要意義。本文主要闡述MDR基因編碼的P-糖蛋(P-glucoprotein,P-gp)在NHL患者中的表達(dá)情況及其相關(guān)的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院2002～2007年經(jīng)病理確診的NHL病例共117份，其中初治76例,化療后復(fù)發(fā)/難治41例；男性68例,女性49例，年齡24～76歲，中位年齡47歲；隨訪至2010年12月；臨床分期(Ann Arbor分期)Ⅰ期8例，Ⅱ期33例，Ⅲ期47例， Ⅳ期29例；惡性程度(1985年成都分類方案分類)：低度惡性25例，中度惡性54例，高度惡性38例。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用免疫組化染色。參照試劑盒說明書操作，用已知陽性切片作陽性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。所用試劑盒均購自福建邁新公司。胞質(zhì)和(或)胞膜呈黃色或棕黃色為P-gp 陽性細(xì)胞。結(jié)果判定:根據(jù)陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的比例來判斷結(jié)果：>10%為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所用數(shù)據(jù)資料用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，行χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α= 0.05 。采用Kaplan-Meier法做生存分析，Cox回歸進(jìn)行相關(guān)分析。生存時(shí)間是從手術(shù)日期(病理確診之日)起到隨訪日期或由于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而死亡的日期為止。生存期從治療日起到死亡或末次隨訪日(2010年12月) 。

2 結(jié)果

2.1 NHL患者中P-gp表達(dá)情況

初治患者中P-gp陽性表達(dá)23例(30.26%)，復(fù)發(fā)/難治的患者中陽性表達(dá)28例(68.29%)，2組比較，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.2 P-gp的表達(dá)對(duì)生存時(shí)間的影響

應(yīng)用Kaplan-Meier法計(jì)算初治組與復(fù)發(fā)/難治組患者的生存時(shí)間與不同P-gp表達(dá)之間的關(guān)系。結(jié)果顯示，P-gp陰性表達(dá)者生存時(shí)間明顯長于陽性表達(dá)者(P<0.05),初治P-gp陰性表達(dá)患者生存時(shí)間最長,見圖1。

圖1 生存曲線圖

2.3 NHL患者生存時(shí)間的多因素分析

Cox回歸分析結(jié)果顯示，患者性別、年齡、有無B癥狀與預(yù)后無關(guān)(P>0.05)，而P-gp表達(dá)、臨床分期、惡性程度、血清LDH水平與患者死亡風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)(P<0.05)，見表1。

表1 回歸分析結(jié)果

3 討論

MDR 是指腫瘤細(xì)胞接觸1種抗腫瘤藥物并產(chǎn)生耐藥后，同時(shí)對(duì)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)理不同的多種天然來源的抗腫瘤藥物具有交叉耐藥性，包括天然性耐藥和獲得性耐藥2種表型[3]。人類基因組中存在2個(gè)MDR基因，即MDR1、MDR2基因?，F(xiàn)已表明，只有MDR1基因與人體腫瘤細(xì)胞耐藥有關(guān)。P-gp為MDR1 基因的蛋白表達(dá)產(chǎn)物，相對(duì)分子質(zhì)量為170 kD的跨膜糖蛋白，是1種ATP依賴性外排泵，能將藥物泵出細(xì)胞外，使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度下降及藥物再分布，減少靶點(diǎn)部位的藥物濃度，使藥物對(duì)細(xì)胞的毒性作用減弱或喪失而導(dǎo)致耐藥[4]。此外，P-gp還具有凋亡抑制作用，保護(hù)耐藥細(xì)胞免于細(xì)胞毒性藥物誘導(dǎo)的多種形式的半胱氨酸蛋白酶依賴性凋亡，而使細(xì)胞獲得耐藥性[5]。

本研究結(jié)果顯示，無論是初治的非霍奇金淋巴瘤患者還是復(fù)發(fā)/難治者，其組織中均存在P-gp表達(dá)(陽性率分別為30.26%、68.29%)，且陽性表達(dá)者平均生存期明顯小于陰性表達(dá)者(初治組20.5個(gè)月:49.1個(gè)月，復(fù)發(fā)/難治組16.7個(gè)月:30.3個(gè)月)，表明惡性淋巴瘤細(xì)胞有不同程度的MDR /P-gp的表達(dá)，對(duì)抗腫瘤治療藥物具有天然的或者獲得性耐藥；且復(fù)發(fā)者P-gp 表達(dá)水平明顯高于初治者，與國內(nèi)外報(bào)道相一致[6,7]。

P-gp的表達(dá)與腫瘤的耐藥及預(yù)后密切相關(guān)， MDR1表達(dá)增加的腫瘤對(duì)生物堿類高度耐藥，對(duì)蒽環(huán)類中度耐藥，對(duì)VP-16低度耐藥，對(duì)烷化劑或抗代謝類藥物及順鉑等不耐藥[8,9]。Tada等認(rèn)為[10]，膀胱癌患者M(jìn)DR表達(dá)與阿霉素耐藥明顯相關(guān)，且化療后殘留腫瘤的MDR表達(dá)比未經(jīng)治療的腫瘤高5.7倍。而晚期鼻咽癌患者M(jìn)DR1陽性，則預(yù)示全身化療后總生存率較低[11]。由此可見，P-gp表達(dá)不僅可預(yù)測患者對(duì)化療藥物的敏感性，指導(dǎo)臨床有針對(duì)性地選擇最有效的化療藥物；其次P-gp高表達(dá)預(yù)示患者預(yù)后不良。本研究表明，P-gp水平的高表達(dá)是NHL患者死亡的危險(xiǎn)因素之一。

近年來，隨著研究的不斷深入，人們迫切需要尋找某種逆轉(zhuǎn)劑來逆轉(zhuǎn)腫瘤的多藥耐藥,目前被證實(shí)具有逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的MDR作用的藥物和制劑很多，包括鈣離子阻滯劑如維拉帕米、尼卡地平等；免疫調(diào)節(jié)劑如環(huán)胞菌素A及其類似物(奎寧類)、利血平等[12]。但由于其不良反應(yīng)大、臨床療效評(píng)估難，或是影響藥物或肝代謝等，臨床上難以推廣。目前， MDR1基因治療是研究的熱點(diǎn)[13,14]，尤其是基因技術(shù)逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥因其特異性和無毒性，將具有廣闊的前景。

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