吳麗君，劉 瑋，曹金莉，趙國明，李倩倩，閔順耕*

（1.中國農(nóng)業(yè)大學理學院應用化學系，北京 100193；2.云南省煙草公司大理州公司，云南 大理 671000）

煙草香氣是衡量其質(zhì)量的重要指標之一[1]，是煙葉的重要組成部分[2-3]，香氣的質(zhì)與量對煙的吃味具有決定作用[4]。煙草香氣分析是煙草質(zhì)量評價的重要環(huán)節(jié)，通常采用溶劑萃取[5]、水蒸汽蒸餾萃取[6]、同時蒸餾萃取[7-9]、超臨界流體萃取[10]、固相微萃取[11]、液相微萃取[12]、頂空分析[13]等方法提取，其中同時蒸餾萃取和減壓蒸餾萃取兩種方法應用較為普遍[13]，主要采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分離測定[14-15]。

煙草中含有大量的醇類化合物，含量為0.77%～1.25%，其中包括脂肪醇、脂環(huán)醇、芳香族醇、甾醇和萜醇等。醇類化合物對香氣質(zhì)和量有較大影響，如沉香醇、龍腦、薄荷醇、苯甲醇和苯乙醇等對卷煙香味作用明顯，已用于煙草加香中。薄荷醇是制造薄荷煙的重要原料。醇類分子結(jié)構(gòu)中的羥基是強的致香基團，但羥基數(shù)增加就會使香氣變?nèi)?，芳香醇比脂肪醇、氧化芳香醇的香氣強。高級脂肪醇和萜醇是煙草香氣物質(zhì)的前體，在煙葉加工過程中降解為一系列小分子香氣成分，是煙草香氣的重要來源之一[16]。因此，測定煙草醇類化合物對煙草質(zhì)量的評價具有重要作用。

近年來國內(nèi)對煙草香氣物質(zhì)的研究較多，但對某一類香氣物質(zhì)的報道局限于有機酸類、多酚類等，缺乏單獨針對醇類香氣物質(zhì)的的研究。本研究主要采用同時蒸餾萃取-氣相色譜/質(zhì)譜法對大理地區(qū)8個縣采集的108份紅花大金元（簡稱：紅大）烤煙樣品中的醇類香氣物質(zhì)進行了分析，研究了大理州不同地區(qū)紅大烤煙中醇類香氣物質(zhì)的特征，并對不同產(chǎn)地及不同部位紅大烤煙中的醇類香氣物質(zhì)的差異進行比較研究。

1 材料與方法

1.1 供試材料

煙樣：選取大理州8個縣（巍山、云龍、賓川、鶴慶、祥云、南澗、洱源、彌渡）的紅大烤煙樣品108份。

試劑：二氯甲烷（天津，99.5%色譜純）、無水硫酸鈉（北京，分析純）、硝基苯（北京，分析純），氯化鈉（北京，分析純）。

儀器：同時蒸餾萃取裝置（鄭州）、天平（梅特勒）、PE Clarus 600 GC-MS（美國 PerkinElmer公司）、NIST2008譜圖庫。

1.2 試驗方法

稱20 g煙末于1000 mL燒瓶中，加入350 mL飽和氯化鈉水溶液，1 mL內(nèi)標（625 mg/L硝基苯），混合均勻，取萃取液二氯甲烷40 mL置于100 mL燒瓶中，分別連接在SDE裝置上。1000 mL燒瓶用可調(diào)電爐加熱至沸騰，100 mL燒瓶用60 ℃水浴加熱，裝置中出現(xiàn)分層時開始計時。同時蒸餾萃取2 h后，開始收集萃取液。加入5 g無水硫酸鈉搖勻至溶液澄清，轉(zhuǎn)有機相于雞心瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)至干，用1.00 mL二氯甲烷定容，吸取1 μL進樣分析。

采用PE Clarus 600 氣質(zhì)聯(lián)用儀對煙葉樣品進行分析。色譜柱為 DB-5MS，30 m × 0.25 mm × 0.25 μm。初溫60 ℃，恒溫2 min后以 5 ℃/min升至200 ℃保持5 min，再以5 ℃/min升至250 ℃，保持 5 min；進樣口溫度250 ℃；He為載氣，分流比為10∶1；進樣量1.0 μL。質(zhì)譜條件為溶劑延遲2 min；傳輸線溫度250 ℃，離子源溫度180 ℃；掃描范圍為50～350 amu。采用NIST2008譜圖庫檢索定性。假定相對校正因子為1，采用內(nèi)標法定量。

1.3 試驗樣品測定

利用同時蒸餾萃取提取紅大烤煙樣品中香氣成分，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）分離測定，通過AMDIS解卷積，譜庫檢索和匹配度定性方法定性煙葉中醇類香氣成分15種，利用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對大理地區(qū)全部烤煙樣品中的15種醇類香氣物質(zhì)進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 大理紅大烤煙中醇類香氣物質(zhì)含量

利用同時蒸餾萃取提取大理州8個縣（巍山、云龍、賓川、鶴慶、祥云、南澗、洱源、彌渡）的紅大烤煙樣品 108份，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分離測定，鑒定出15種醇類香氣物質(zhì)（表1）。

2.2 不同產(chǎn)地烤煙中醇類香氣物質(zhì)含量差異

從表2可以看出，不同產(chǎn)地烤煙中醇類物質(zhì)的含量存在差異，各產(chǎn)地烤煙中醇類物質(zhì)總含量由高到低表現(xiàn)為云龍＞洱源＞南澗＞賓川＞彌渡＞巍山＞鶴慶＞祥云的趨勢，其中云龍煙葉中醇類物質(zhì)總含量為195.51 μg/g，祥云煙葉中醇類物質(zhì)總含量為81.46 μg/g，二者相差一倍以上。為了進一步了解不同產(chǎn)地烤煙中醇類香氣物質(zhì)含量之間是否有顯著差異，對各產(chǎn)地烤煙中醇類香氣物質(zhì)含量進行了方差分析，結(jié)果見表3，可以看出，由于生態(tài)因子，土壤等條件等存在差異，醇類總量產(chǎn)地間差異達到了極顯著差異水平，F(xiàn)值為3.49，p為0.002（＜0.01）。異戊醇、寸拜醇和4,8,13-西柏三烯-1,3-二醇的含量各產(chǎn)地間的差異也達到了極顯著水平（表3）；異戊烯醇和 6-甲基-5-庚烯-2-醇的含量在各產(chǎn)地間的差異達到顯著水平；但糠醇、5-甲基糠醇、α-松油醇、芳樟醇、六氫金合歡醇、香葉基香葉醇、苯甲醇、苯乙醇含量產(chǎn)地間的差異未達到5%顯著水平。

表1 大理烤煙中醇類香氣物質(zhì)含量的描述性統(tǒng)計Table 1 Descriptive statistics of contents of alcohol aroma component in tobacco in Dali

表2 大理不同產(chǎn)地烤煙中醇類香氣物質(zhì)含量 μg/gTable 2 Mean contents of alcohol aroma components in flue-cured tobacco leaves from various locations

2.3 不同部位烤煙中醇類香氣物質(zhì)含量的分析

不同部位煙葉醇類物質(zhì)總量由高到低表現(xiàn)為中部＞下部＞上部的趨勢（表4），中部和下部葉較接近。為了進一步了解各部位烤煙中醇類香氣物質(zhì)含量之間是否有顯著差異，對各部位烤煙中醇類香氣物質(zhì)含量進行方差分析，結(jié)果見表3?？梢钥闯?，除1,2,2-三甲基-3-苯基-3-環(huán)戊烯醇的含量在部位間存在顯著差異外，醇類香氣物質(zhì)總量或其他醇類香氣物質(zhì)含量部位間的差異均未達到5%顯著水準。

表3 產(chǎn)地、部位間煙葉中醇類香氣物質(zhì)含量方差分析結(jié)果Table 3 Analysis of variance on alcohol aroma component contents in tobacco leaves among locations and leaf positions

3 小 結(jié)

醇類物質(zhì)是煙草中重要的香氣物質(zhì)，本研究采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)從大理地區(qū)紅大烤煙中鑒定出15種醇類物質(zhì)?？緹煒悠分?5種醇類物質(zhì)的含量變幅較大，其中含量最高的香氣物質(zhì)是4,8,13-西柏三烯-1,3-二醇，為 90.84 μg/g；含量最低的香氣物質(zhì)是異戊烯醇，為0.11 μg/g。

表4 不同部位烤煙中醇類香氣物質(zhì)含量的描述性統(tǒng)計Table 4 Descriptive statistics of alcohol aroma component contents in flue-cured tobacco leaves among different positions

不同產(chǎn)地間烤煙中醇類香氣物質(zhì)的總含量由高到低的順序為：云龍＞洱源＞南澗＞賓川＞彌渡＞巍山＞鶴慶＞祥云，說明不同醇類物質(zhì)在不同產(chǎn)地烤煙中的含量分布是不同的；烤煙中醇類香氣物質(zhì)的總含量在不同產(chǎn)地之間存在極顯著差異，說明同一品種不同產(chǎn)地的紅大烤煙的香氣的質(zhì)和量均有明顯的不同。

醇類物質(zhì)總含量在不同部位烤煙中，除 1,2,2-三甲基-3-苯基-3-環(huán)戊烯醇含量存在極顯著差異外，其他均未達到5%差異顯著水準。

綜上所述，大理地區(qū)紅花大金元烤煙煙葉中醇類香氣物質(zhì)的含量與產(chǎn)地間關(guān)系較大，但部位間差異不大，其原因有待進一步研究。

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