孫艷 張群

新疆維吾爾自治區(qū)伊犁州友誼醫(yī)院，新疆伊寧 835000

RP-HPLC法測(cè)定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A的含量

孫艷 張群

新疆維吾爾自治區(qū)伊犁州友誼醫(yī)院，新疆伊寧 835000

目的 建立RP-HPLC法測(cè)定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A的含量的方法。方法采用反相高效液相色譜，色譜柱：Zirchrom C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)403 nm；柱溫30℃；流速1 mL/min。結(jié)果 羥基紅花黃色素A在0.0 408～0.3 264 μg內(nèi)線性良好，y=644 726.015 4×-2058.071 4，r=0.999 9，回收率為101.73%，RSD為1.65%。結(jié)論 采用該方法進(jìn)行含量測(cè)定準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，對(duì)谷紅注射液的質(zhì)量控制有重要意義。

HPLC；谷紅注射液；羥基紅花黃色素A

谷紅注射液為中西藥復(fù)方制劑，為乙酰谷酰胺和紅花提取物制成的滅菌水溶液，主要用于治療腦血管疾病和腦供血不足，腦血栓，腦栓塞及腦出血恢復(fù)期，還可以用于治療冠心病，脈管炎等。該制劑的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只是采用高效液相法對(duì)乙酰谷酰胺進(jìn)行了質(zhì)量控制，對(duì)紅花提取物未作相關(guān)研究。查閱國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)從紅花提取物角度進(jìn)行研究的文獻(xiàn)僅有寥寥數(shù)篇。該研究建立了反相高效液相色譜法測(cè)定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A含量的方法，較文獻(xiàn)報(bào)道的方法方便快捷，縮短了出峰時(shí)間，對(duì)谷紅注射液的質(zhì)量控制起到一定的指導(dǎo)作用。

1 儀器與材料

Waters 2695；Sartorius BS210S型電子天平；UV-2490型紫外分光光度計(jì)；SK5200HP超聲波清洗器。谷紅注射液，博安兄弟制藥（中國(guó)）有限公司生產(chǎn)20mL/支，批號(hào)為20110723，20110724，20110725；羥基紅花黃色素A對(duì)照品，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111637-200905；甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Zirchrom C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)403 nm；柱溫 30℃；流速 1 mL/min，進(jìn)樣量 10 μL。所選擇的流動(dòng)相為甲醇-0.5%磷酸水(40∶60)等度洗脫。理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)，應(yīng)不低于5500。精密吸取供試品溶液、流動(dòng)相、對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀中，繪制液相色譜圖，由色譜圖提示，在對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，流動(dòng)相在此峰位無(wú)吸收，對(duì)羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定無(wú)干擾，方法專屬性良好。見(jiàn)圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取2.04 mg羥基紅花黃色素A對(duì)照品置于100 mL的容量瓶中，25%甲醇定容至刻度，濃度為0.020 4 mg/mL，作為對(duì)照品，置于4℃冰箱備用。

2.3 供試品的制備

精密量取本品1 mL，置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

圖1 谷紅注射液及對(duì)照品色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

取對(duì)照品溶液 2、4、6、8、10、12、14、16 μL 進(jìn)樣， 以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=644 726.015 4×-2 058.071 4,r=0.999 9。表明當(dāng)進(jìn)樣量在0.040 8～0.326 4 μg內(nèi)，羥基紅花黃色素A線性關(guān)系良好。其標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.5 精密度的測(cè)定

精密吸取對(duì)照品10 μL進(jìn)樣，連續(xù)6次。羥基紅花黃色素A的RSD分別為0.85%。表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性的測(cè)定

按2.3項(xiàng)下方法制備供試品6份，過(guò)0.22 μm的微孔濾膜，取10 μL進(jìn)樣，羥基紅花黃色素A的平均含量分別為0.25 mg/mL；RSD分別為1.22%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性的考察

按 2.3 項(xiàng)下配制供試品， 在 0，2，4，6，8，10 h 取 10 μL 進(jìn)樣測(cè)定，羥基紅花黃色素A的平均含量分別為0.25 mg/mL；RSD分別為1.55%。表明樣品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率

精密稱量已知含量的樣品1 mL置于50 mL容量瓶，加入定量的對(duì)照品，甲醇定容至刻度。精密吸取10 μL進(jìn)樣，羥基紅花黃色素A的加樣回收率分別為104.9%；RSD分別為1.64%，見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定

按2.3項(xiàng)下配制樣品，精密吸取10 μL進(jìn)樣，見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取適量羥基紅花黃色素A，加水制成每1 mL含羥基紅花黃色素A 0.5 mg的溶液，在200～800 nm波長(zhǎng)內(nèi)掃描，結(jié)果顯示，羥基紅花黃色素A的403 nm處呈現(xiàn)最大吸收，因此選擇403 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

表2 樣品中羥基紅花黃色素A的含量

3.2 液相條件的選擇

《中國(guó)藥典》（2010年版）第1部中關(guān)于紅花的質(zhì)量控制采用的流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72)，首先選擇該條件進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該條件下主峰拖尾，分離度不是很理想，現(xiàn)參考有關(guān)羥基紅花黃色素A的文獻(xiàn)資料[1-5]，確定了該實(shí)驗(yàn)所采用的色譜條件，在該條件下，主峰峰型對(duì)稱，分離度較好。

3.3 測(cè)定方法的選擇

該本實(shí)驗(yàn)采用RP-HPLC法測(cè)定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A的含量，該方法簡(jiǎn)單易操作、準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，對(duì)控制谷紅注射液藥材的質(zhì)量具有指導(dǎo)性作用。

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R284.1

A

1674-0742（2012）09（c）－0131-02

2012-08-07）