周 寧，祝 峰，劉金波

肌酐與血脂試劑對總膽汁酸檢測的影響及對策

周 寧，祝 峰，劉金波

目的探討肌酐(creatinine，CR)、膽固醇(cholestoenone，TC)、三酰甘油(triacylglyceride，TG)和高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)試劑對血清總膽汁酸(total bile acid，TBA)檢測結(jié)果的影響。方法先單獨(dú)檢測30次混合血清標(biāo)本TBA含量;之后檢測CR、TC、TG、HDL試劑對TBA檢測結(jié)果的影響及其持續(xù)時(shí)間;設(shè)定特殊清洗程序后再檢測CR、TC、TG、HDL試劑對TBA檢測結(jié)果的影響。結(jié)果CR、TC、TG、HDL試劑對TBA檢測有明顯的交叉污染。結(jié)論合理安排檢測順序及設(shè)定特殊清洗程序能有效地消除CR、TC、TG、HDL試劑對TBA檢測的影響。

總膽汁酸;全自動(dòng)生化分析儀;試劑;交叉污染

全自動(dòng)生化分析儀具有微量、快速、精密度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)，但在臨床運(yùn)用中，由于生化分析儀共用試劑針、攪拌棒及比色杯等易引起交叉污染。筆者在工作中發(fā)現(xiàn)常規(guī)生化多項(xiàng)目檢測中TBA出現(xiàn)假性升高現(xiàn)象，復(fù)查后結(jié)果正常，提示部分檢測項(xiàng)目對TBA的檢測可能存在交叉污染，經(jīng)分析后初步認(rèn)為CR、TC、TG、HDL對TBA的檢測存在影響。本研究進(jìn)一步探討以上項(xiàng)目對TBA的檢測影響并提出改進(jìn)措施。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 羅氏Modular生化免疫一體分析系統(tǒng)，美國羅氏公司生產(chǎn);堿性清洗液、酸性清洗液和 CR(酶法)、TC、TG、HDL、TBA 試劑為羅氏公司原廠配套產(chǎn)品。

1.2 混合血清 取當(dāng)天本院100份正常體檢者血清混合備用。

1.3 方法

1.3.1 參數(shù)設(shè)定 各檢測項(xiàng)目按試劑生產(chǎn)廠家提供的參數(shù)進(jìn)行設(shè)定。

1.3.2 對照組 連續(xù)檢測混合血清TBA 30次，計(jì)算TBA的均值作為參考值。

1.3.3 檢測 CR、TC、TG、HDL 試劑中的 TBA 含量

為去除基質(zhì)效應(yīng)，將CR、TC、TG、HDL試劑(雙試劑按比例混合)與混合血清按1∶4混合作為樣本檢測TBA含量;對照組采用生理鹽水與混合血清按

1∶4混合。

1.3.4 檢測順序 按 CR→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA、TC→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA、TG→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA、HDL→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA的順序分別先檢測混合血清中CR、TC、TG、HDL含量，再檢測TBA含量，每個(gè)項(xiàng)目重復(fù)檢測30次。

1.3.5 特殊清洗程序和檢測順序 每次試劑針吸樣完成后，先用堿性清洗液清洗，再用去離子水進(jìn)行清洗;檢測前用酸性清洗液與堿性清洗液對比色杯進(jìn)行清洗。用混合血清先檢測CR再檢測TBA，重復(fù)檢測20次。TC、TG、HDL按以上程序重復(fù)。

2 結(jié) 果

2.1 CR、TC、TG、HDL試劑對 TBA直接干擾 混合血清中加入CR、TC、TG、HDL試劑后時(shí)行TBA測定，共檢測30次取其均值(表1)。

2.2 CR、TC、TG、HDL 試劑對 TBA 測定中的干擾及持續(xù)時(shí)間 先測定CR 1次后連續(xù)測定TBA 5次，再將以上程序重復(fù)30次。TC、TG、HDL按以上程序重復(fù)。結(jié)果表明，CR、TC、TG、HDL試劑對TBA測定存在明顯干擾，其中以HDL對TBA檢測干擾影響最大，持續(xù)時(shí)間最長，經(jīng)過5次測定后仍存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05，表2)。

表1 混合血清加入CR、TC、TG、HDL試劑后TBA檢測結(jié)果(±s)

表1 混合血清加入CR、TC、TG、HDL試劑后TBA檢測結(jié)果(±s)

組別±s t P對照組5.11 ±0.29 － －加入 CR試劑 161.37 ±5.32 160.64 P ＜0.05加入 TC 試劑 85.66 ±2.21 207.15 P ＜0.05加入 TG試劑 112.56 ±2.66 219.95 P ＜0.05加入 HDL 試劑 261.84 ±12.84 109.49 P＜0.05

表2CR、TC、TG、HDL試劑對TBA測定的干擾及持續(xù)時(shí)間(±s)

表2CR、TC、TG、HDL試劑對TBA測定的干擾及持續(xù)時(shí)間(±s)

注:與對照組比較，①P ＜0.05

組別檢測次數(shù)1次 2次 3次 4次 5次對照組6.43 ±0.42 － － － －先測定 CR 41.20±2.63① 23.26 ±1.34① 12.60 ±0.76① 8.72±0.46① 6.48±0.45先測定 TC 23.85±1.32① 12.74 ±1.18① 7.33 ±0.63① 6.45±0.42 6.43±0.42先測定 TG 26.42±1.36① 14.81 ±1.17① 8.98 ±0.67① 6.56±0.45 6.43±0.42先測定 HDL 62.39 ±3.74① 36.77 ±2.38① 19.68 ±1.26① 9.69±0.72① 6.92±0.56①

2.3 設(shè)定特殊清洗程序與檢測程序 采取特殊清洗程序與檢測程序后，TBA檢測結(jié)果與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明特殊清洗程序可以有效地去除CR、TC、TG、HDL所引起的交叉污染(表3)。

表3 采取特殊清洗程序與檢測程序后TBA檢測結(jié)果(±s)

表3 采取特殊清洗程序與檢測程序后TBA檢測結(jié)果(±s)

組別±s t P對照組6.43 ±0.42 － －先測定 CR 6.62 ±0.53 1.26 ＞0.05先測定 TC 6.44 ±0.48 0.07 ＞0.05先測定 TG 6.42 ±0.49 0.07 ＞0.05先測定HDL 6.64 ±0.63 1.24 ＞0.05

3 討 論

生化分析儀廣泛使用給檢驗(yàn)人員帶來工作便利的同時(shí)也產(chǎn)生了交叉污染的新問題，包括樣品針、試劑針、攪拌針、比色杯污染。部分全自動(dòng)生化分析儀在檢測過程中吸取不同樣本與試劑后，樣本針和試劑針僅用去離子水進(jìn)行沖洗，很難完全清洗干凈，如果前一樣本某項(xiàng)待檢測物含量較高，或前一檢測項(xiàng)目試劑中含有后一檢測項(xiàng)目的成分，或含有對后一檢測項(xiàng)目有干擾的物質(zhì)時(shí)，就會(huì)不可避免地會(huì)產(chǎn)生攜帶污染的問題［1］。

TBA以膽固醇為原料在肝細(xì)胞內(nèi)合成，協(xié)助脂類物質(zhì)的消化吸收，能反映肝臟的代謝水平，因此，準(zhǔn)確測定TBA含量對疾病的診斷有重要的臨床意義［2］。本研究通過 CR、TC、TG、HDL 試劑作為樣本進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)部分試劑中可能含有TBA或者干擾TBA檢測的成分，其中HDL試劑中TBA的檢測結(jié)果高達(dá)261.84μmol/L。引起TBA檢測結(jié)果升高的原因，可能是CR試劑中含有活性較高的抗壞血酸氧化酶，影響了 TBA 氧化還原過程［3］。文獻(xiàn)［1，3］認(rèn)為，TC、TG、HDL試劑中含有的膽酸鈉具有與膽汁酸相同的反應(yīng)特性，從而對TBA的檢測產(chǎn)生干擾;也有研究認(rèn)為，TC、TG、HDL試劑中含有高濃度的TBA成分［4］，但本研究試劑說明書未發(fā)現(xiàn)其含有TBA的成分，可能與不同生產(chǎn)廠家其生產(chǎn)配方和工藝不同有關(guān)。

本研究表明，先行測定CR、TC、TG、HDL后再進(jìn)行TBA測定會(huì)對檢測產(chǎn)生極大的干擾，TBA檢測值較對照組檢測結(jié)果上升了4～10倍。各種不同的試劑對TBA檢測產(chǎn)生干擾的持續(xù)時(shí)間也不同，其中HDL影響時(shí)間最長，連續(xù)檢測5次后仍然存在明顯干擾。設(shè)定特殊清洗程序與檢測程序后再進(jìn)行檢測，與對照組比較，其他各檢測結(jié)果未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，進(jìn)一步證實(shí)，致TBA假性升高的原因是試劑間的攜帶污染所引起。

目前，部分生化分析儀已采用通過多管道噴嘴加樣、超聲混勻等多種方式，可有效地避免交叉污染。鑒于試劑成分的復(fù)雜性，部分廠家由于保密等原因，其說明書不能如實(shí)反映試劑成分，故開設(shè)新增檢驗(yàn)項(xiàng)目前應(yīng)做攜帶污染試驗(yàn)，防止交叉污染發(fā)生。文獻(xiàn)［5］表明，在做好儀器日常保養(yǎng)工作的同時(shí)，采取特殊清洗程序與檢測程序可以減少或清除攜帶污染事件的發(fā)生，但由于部分生化分析儀無此功能，執(zhí)行合理的檢測順序也可以減少攜帶污染引起的檢測誤差［6］。筆者認(rèn)為，TBA 檢測應(yīng)在 CR、TC、TG、HDL檢測之前進(jìn)行，或在檢測結(jié)束后進(jìn)行多個(gè)其他檢測項(xiàng)目檢測后方可進(jìn)行。如能兩者相配合，既采取特殊清洗程序與檢測程序，又能按一定順序合理地安排檢測項(xiàng)目，則能有效地去除交叉污染，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

［1］崔 軍.三酰甘油和總膽固醇試劑對總膽汁酸檢測結(jié)果的影響［J］.華西醫(yī)學(xué)，2010，25(7):1328 －1329.

［2］謝小兵，李 萍，夏 歷，等.血脂與谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑對總膽汁酸檢測的攜帶污染觀察［J］.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2008，15(4):1246 －1247.

［3］朱武軍，邰 飛，邵燕麗，等.循環(huán)酶法測定總膽汁酸試劑交叉污染及預(yù)防措施［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(9):990 －991.

［4］丁雙雙，汪 浩，沈 霞.HDL－C試劑干擾血清膽汁酸測定結(jié)果的原因分析與對策［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，26(3):215－216.

［5］顧光煜，郭 群，高 磊.肌酐和總膽固醇試劑對總膽汁酸測定結(jié)果的影響［J］.臨床檢驗(yàn)雜志;2005(23)5:361－362.

［6］吳 健.全自動(dòng)生化分析儀測定順序?qū)z測結(jié)果的影響［J］.貴州醫(yī)藥，2004，28(2):124 －125.

Analysis of effect of creatinine and blood lipid reagents on detection of total bile acid

ZHOU Ning，ZHU Feng，and LIU Jinbo.Jiangsu Provincial Corps Hospital，Chinese Police’s Armed Police Forces，Yangzhou 225003，China

ObjectiveTo study the effect of creatinine，triglyceride，cholesterol and high－density lipoprotein reagents on determination results of serum total bile acid.Methods WTBZTBA content of 30 serum samples(mixed serum)was independently detected.The impact of CR，TC，TG，and HDL reagents on detection of TBA was investigated and detected again after special cleaning procedures.Results There was clear cross－contamination in detection of TBA using CR，TC，TG，HDL reagents.Conclusions

Rational detection order and special testing and cleaning procedures can effectively eliminate the effect of CR，TC，TG，and HDL reagents on TBA examination.

total bile acid;full automatic biochemical analyzer;reagent;cross contamination

R446.1

周 寧，男，1964年出生。本科學(xué)歷，主任技師。主要從事醫(yī)院管理和臨床檢驗(yàn)工作。

225003 揚(yáng)州，武警江蘇總隊(duì)醫(yī)院

(2012－01－16收稿 2012－08－01修回)

(責(zé)任編輯 尤偉杰)