陸翠芬， 郭美仙， 柳 斌， 陳光勇

(大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南 大理 671000)

毛大丁草Gerbera piloselloides(L.)Cass.為菊科帚菊木族大丁草屬物，是多年生被毛草本植物。在我國分布于西藏、云南、四川、貴州、廣西、廣東、湖南、湖北、江西等地[1]。又名兔耳風(fēng)和毛耳風(fēng)[2]。毛大丁草全草入藥，全草包括葉、花、根、根莖，主治傷風(fēng)感冒、咳嗽痰多、扁桃腺炎、水腫、胃及十二指腸潰瘍、胃腸炎、毒蛇咬傷等[3]。具有清熱解毒、理氣和血的功效，治癰腫、乳蛾、痄腮、瘰疬結(jié)核、胸肋痞氣、疝氣、下血[4～5]。相關(guān)研究表明毛大丁草具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘等作用[6～8]。還有研究表明，毛大丁草有良好的抗菌作用[9]。目前，國內(nèi)尚未見毛大丁草葉鎮(zhèn)咳、祛痰作用的研究報道，為此筆者進行了毛大丁草葉醇提物對小鼠的鎮(zhèn)咳、祛痰作用進行研究，為更好開發(fā)利用毛大丁草提供一定科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 動物 KM健康小鼠，體重為(20±2)g，雌雄各半，由昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(滇)2011-0004。

1.2 藥品與試劑 苯酚紅(上海試劑三廠，批號：820925)，碳酸氫鈉(重慶制藥六廠，批號：810204)，氨水(上海試劑三廠，批號：820925)，復(fù)方甘草口服液(大理學(xué)院附屬醫(yī)院制劑室，批號：110927)，急支糖漿(太極集團重慶涪陵制藥廠有限公司，批號：11010035)。

1.3 儀器 FW135中藥粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)，SHZ-D循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)，RE-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)，YP3001N電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)721可見分光光度計(上海第三分析儀器廠)，XK96-A快速混勻器(姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司)。

2 方法

1.1 樣品來源及有效成分的提取 毛大丁草采自云南省大理市下關(guān)鎮(zhèn)，經(jīng)大理學(xué)院生藥學(xué)教研室周濃副教授鑒定為菊科大丁草屬植物毛大丁草。將葉粉碎后，取葉粉600 g，無水乙醇回流提取3次，每次2 h。合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮成浸膏240 g，提取率為40%。臨用時用蒸餾水配制成15%、30%、45% 的溶液。

1.2 動物分組及給藥 取健康小鼠60 只，隨機分為6 組，每組10 只，即對照組、復(fù)方甘草液組、急支糖漿組、毛大丁草葉低、中、高劑量組。對照組灌胃(i.g.)給蒸餾水、甘草液組i.g.給復(fù)方甘草口服液、糖漿組i.g.給急支糖漿、毛大丁草葉低、中、高劑量組分別i.g.給15%、30%、45% 的醇提物溶液；給藥體積均為10 mL/kg，每天給藥1 次，連續(xù)給藥14 d。

1.3 造模及指標測定

1.3.1 鎮(zhèn)咳試驗 分別對各組小鼠(每組取10 只)進行鎮(zhèn)咳試驗。末次給藥30 min 后，取直徑1 cm 瓶蓋，內(nèi)墊兩層濾紙扣于1000 mL廣口瓶下，吸取28% 氨水0.5 mL注射于瓶蓋內(nèi)濾紙上，扣1 min，迅速取出瓶蓋，將小鼠扣于廣口瓶下，觀察和記錄2 min 內(nèi)咳嗽次數(shù)和咳嗽潛伏期(首次開始咳嗽的時間)，并觀察各給藥組與對照組之間鎮(zhèn)咳作用的差異[10～11]。

1.3.2 祛痰試驗 繪制酚紅吸光度(OD)曲線，回歸方程為Y=-0.129406578+13.684599621X。X 為546 nm 處的OD 值；Y為酚紅濃度。分別對各組小鼠(每組取10 只)進行祛痰試驗。末次給藥30 min后，腹腔注射0.5% 酚紅20 mL/kg，注射酚紅30 min后，脫頸椎處死小鼠，仰臥位固定于蛙板上并分離氣管(預(yù)先準備5 mL的試管，編號，并加入1.5 mL的5% NaHCO3 溶液)。用1 mL注射器吸取5% NaHCO3 溶液0.5 mL，注入氣管內(nèi)，反復(fù)來回沖洗呼吸道3 次，最后1次將沖洗液收集于相應(yīng)編號的試管內(nèi)，按上述方法再重復(fù)2 次。將試管放在混勻器上震蕩2 min，用721分光光度計在波長546 nm 處測OD 值。根據(jù)回歸方程計算出酚紅含量，根據(jù)公式計算校正酚紅含量[10～12]。

校正酚紅含量(ng/kg)=酚紅含量/體重

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±S)表示，采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件進行方差分析。

1.4 結(jié)果

1.4.1 毛大丁草葉醇提物對小鼠的鎮(zhèn)咳作用 表1 顯示：與對照組比較，甘草液組和急支糖漿組均可使小鼠咳嗽潛伏期延長(P<0.01)、咳嗽次數(shù)減少(P<0.01)，表明造模成功。與對照組比較，毛大丁草葉低、中、高劑量組均可使小鼠的咳嗽潛伏期延長(P<0.01)、咳嗽次數(shù)減少(P<0.01)。結(jié)果表明：毛大丁草葉醇提取物低、中、高劑量組鎮(zhèn)咳作用顯著，且均比急支糖漿組強；中、高劑量組鎮(zhèn)咳作用也比復(fù)方甘草液組強。

表1 毛大丁草葉醇提物對小鼠的鎮(zhèn)咳作用( ±s ，n=10)

表1 毛大丁草葉醇提物對小鼠的鎮(zhèn)咳作用( ±s ，n=10)

組別給藥劑量潛伏期(s)2min咳嗽次數(shù)對照組—17 9±3．436 5±4 7復(fù)方甘草液組10mL/kg45 8±5．5??17 6±2 01??急支糖漿組10mL/kg37 0±4．1??25 7±3 2??低劑量組4g/kg40 2±5．9??21 4±3 2??中劑量組8g/kg56 0±9．4??17 4±2 2??高劑量組12g/kg79 4±10．2??10 7±1 9??

注：與對照組比較，**P<0.01

1.4.2 毛大丁草葉醇提物對小鼠的祛痰作用 表2顯示：與對照組比較，復(fù)方甘草液組和急支糖漿組均可使小鼠呼吸道酚紅排泌量增加(P<0.05，P<0.01)，表明造模成功。與對照組比較，毛大丁草葉低中、高劑量組均可使小鼠呼吸道酚紅排泌量增加(P<0.01)。結(jié)果表明：毛大丁草葉醇提取物中、高劑量組祛痰作用顯著，且毛大丁草葉醇提取物中、高劑量組祛痰作用比甘草液組強；高劑量組祛痰作用也比急支糖漿組強。

表2 毛大丁草葉醇提物對小鼠的祛痰作用( ±s ，n=10)

表2 毛大丁草葉醇提物對小鼠的祛痰作用( ±s ，n=10)

組別給藥劑量體重(g)酚紅含量(ng)校正酚紅含量(ng/kg)對照組—28 3±1 22 57±0 1935 09±2 49復(fù)方甘草液組10mL/kg29 0±2 33 00±0 2140 95±2 69?急支糖漿組10mL/kg29 2±2 73 61±0 3049 28±3 97??低劑量組4g/kg29 7±2 62 91±0 2939 65±3 79中劑量組8g/kg28 4±1 33 47±0 3547 35±4 72??高劑量組12g/kg29 0±2 33 57±0 3448 79±4 53??

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

3 討論

咳嗽是人體清除呼吸道內(nèi)的分泌物或異物的保護性呼吸反射動作。在一般情況下，咳嗽具有重要的呼吸道防御功能；咳痰是呼吸道的反復(fù)感染、異物、過熱過冷的空氣、刺激性氣體、香煙或過敏因素的刺激下，支氣管分泌大量痰液?？人浴⒖忍凳桥R床常見的癥狀，多種疾病(如感冒、急慢性氣管炎、肺炎等)均可出現(xiàn)，且咳嗽常伴咳痰。嚴重且持續(xù)的咳嗽、咳痰使病人不適，妨礙睡眠和休息，可造成呼吸道組織和功能的損害，并可引起全身多種并發(fā)癥。臨床上鎮(zhèn)咳藥、祛痰藥的種類繁多，作用機制也不盡相同，但多數(shù)藥物具有不同程度的各種副作用。而中藥鎮(zhèn)咳、祛痰的副作用相對較小。

本試驗通過濃氨水誘發(fā)小鼠咳嗽，用毛大丁草葉醇提物進行治療，觀察毛大丁草葉的鎮(zhèn)咳作用。結(jié)果顯示：毛大丁草葉醇提物對小鼠濃氨水引起的咳嗽有明顯的抑制作用，能明顯延長咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)。毛大丁草葉醇提取物低、中、高劑量組鎮(zhèn)咳作用顯著，且均比急支糖漿組強；中、高劑量組鎮(zhèn)咳作用也比復(fù)方甘草液組強。本試驗通過給小鼠腹腔注射酚紅，利用酚紅部分從氣管排泌的特點，用分光光度計測出氣管沖洗液內(nèi)酚紅的量。結(jié)果顯示：毛大丁草葉醇提物能明顯增加小鼠氣管排泌酚紅的量，通過促進支氣管分泌物的排泌，使痰液黏度下降，易于咳出。實驗結(jié)果表明毛大丁草葉醇提物具有明顯的鎮(zhèn)咳、祛痰作用，毛大丁草葉醇提取物中、高劑量組祛痰作用比甘草液組強；高劑量組祛痰作用也比急支糖漿組強，其作用機制需進一步研究。

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