江丹，周京國△，青玉鳳，謝文光，楊其彬，李敏，趙明才，2

(1.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫研究所;2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 南充 637000)

血漿瘦素在原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎及高尿酸血癥患者的表達(dá)及臨床意義

江丹1，周京國1△，青玉鳳1，謝文光1，楊其彬1，李敏1，趙明才1，2

(1.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫研究所;2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 南充 637000)

目的:檢測血漿瘦素(leptin，LEP)在原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者(gouty arthritis，GA)、高尿酸血癥者(hyperuricemia，HA)及健康體檢者(normal control，NC)的表達(dá)水平，從而探討LEP在GA和HA發(fā)病機(jī)制中可能的作用。方法:采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測GA組(84例)、HA組(38例)和NC組(43例)血漿LEP含量，比較其差異性，分析血漿LEP與GA及HA組臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果:LEP在三組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=17.78，P＜0.05)，進(jìn)一步兩兩分析(LSD法)發(fā)現(xiàn)LEP在GA組的表達(dá)顯著高于HA組［(436.55±246.65)pg/mL vs(306.25±173.16)pg/mL，P＜0.05］和NC組［(436.55±246.65)pg/mL vs(199.68±185.54)pg/mL，P＜0.05］，HA組顯著高于NC組［(306.25±173.16)pg/mL vs(199.68±185.54)pg/mL，P＜0.05］。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)痛風(fēng)患者LEP水平與體重指數(shù)(BMI)、極低密度脂蛋白(VLDL)、肌酐(Cr)均呈顯著正相關(guān)(r=0.31，r=0.28，r=0.25;P均＜0.05)，而與血尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、血糖(GLU)、中性粒細(xì)胞絕對值(GR)、淋巴細(xì)胞絕對值(LY)、血沉(SR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)均無明顯相關(guān)性(P均＞0.05)。高尿酸血癥者LEP水平與GLU呈顯著正相關(guān)(r=0.42，P＜0.05)，與UA、TG、HDL、LDL、VLDL均無明顯相關(guān)性(P均＞0.05)。結(jié)論:LEP的高表達(dá)可能參與了原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎及高尿酸血癥的發(fā)生發(fā)展。LEP可能主要在痛風(fēng)的脂代謝障礙及腎功能損害中發(fā)揮作用，可能參與高尿酸血癥的糖代謝過程。

關(guān)節(jié)炎;痛風(fēng);高尿酸血癥;瘦素

痛風(fēng)(gout)是由于嘌呤代謝紊亂和(或)尿酸排泄減少而導(dǎo)致尿酸鹽沉積并伴隨組織損傷的一組疾病。臨床可表現(xiàn)為急性復(fù)發(fā)性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石形成、痛風(fēng)石性慢性關(guān)節(jié)炎、尿酸鹽腎病、尿酸性尿路結(jié)石，嚴(yán)重者可出現(xiàn)關(guān)節(jié)致殘、腎功能不全。近年來，隨著社會富裕程度的提高，人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，痛風(fēng)發(fā)病率和患病率呈逐漸增加的趨勢。高尿酸血癥(hyperuricemia，HA)是痛風(fēng)最重要的生化基礎(chǔ)，約5%～12%的HA最終可發(fā)展為痛風(fēng)［1］，血尿酸的升高不僅與痛風(fēng)發(fā)病密切相關(guān)，而且可能增加患心血管疾病的危險(xiǎn)［2］。研究證實(shí)，痛風(fēng)患者常伴發(fā)肥胖、高血壓、糖尿病及高脂血癥［3］。瘦素(leptin，LEP)是一種主要由脂肪細(xì)胞分泌的激素樣細(xì)胞因子，其結(jié)構(gòu)與IL-6、IL-12等Ⅰ型細(xì)胞因子家族成員相似，在攝食調(diào)節(jié)、能量代謝、炎癥及免疫調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要作用［4］。本文通過檢測原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者(gouty arthritis，GA)、高尿酸血癥者及健康體檢者(normal control，NC)血漿LEP的表達(dá)，結(jié)合臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)從而探討LEP在GA和HA發(fā)病中可能的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院風(fēng)濕血液科2009年1月至2011年3月門診或住院符合1977年美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］的GA患者84例，排除由其他原因所致的繼發(fā)性痛風(fēng)患者，所有患者均為急性發(fā)作期男性，年齡23～74歲，平均年齡(46±11)歲。HA和NC均來自我院2010年1月至2011年3月的體檢人群。HA組為38名UA＞420 μmol/L的男性體檢者，年齡27～79歲，平均(45±12)歲，均排除血液系統(tǒng)及肝腎功能損害。NC組為43名男性健康體檢者，年齡21～69歲，平均(42±11)歲，均無實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)異常。HA及NC組均無痛風(fēng)既往史及家族史。所有研究對象均排除其他自身免疫性疾病、感染性疾病及腫瘤性疾病。該實(shí)驗(yàn)得到當(dāng)?shù)貍惱砦瘑T會支持，且所有參與者均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 血漿LEP水平檢測所有研究對象禁食8 h以上，次日晨抽取約5 mL空腹靜脈血，3000 r/min離心10 min分離血漿，－20℃保存標(biāo)本。人LEP酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒購自美國R＆D公司。操作步驟按說明書:在已包被LEP抗體的酶標(biāo)板上，每孔加入100 μL血漿或標(biāo)準(zhǔn)品，36℃孵育90 min，洗滌液洗滌5次，加100 μL生物素化抗體工作液，36℃孵育60 min，洗滌液洗滌5次，加100 μL酶結(jié)合物工作液，36℃孵育30 min，再用洗滌液洗滌5次，加底物，36℃避光孵育15 min，加終止液。然后在酶標(biāo)儀上，以450 nm為測量波長，620 nm為參考波長測定其吸光度(A)值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品吸光度及濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出待測血漿的LEP水平。

1.2.2 臨床及實(shí)驗(yàn)室常規(guī)指標(biāo)的測定實(shí)驗(yàn)室常規(guī)指標(biāo)測定均在我院檢驗(yàn)科完成，血細(xì)胞分析采用美國Beckman公司生產(chǎn)的LH750血細(xì)胞分析儀，血生化儀分析采用美國Beckman公司生產(chǎn)的DxC800全自動(dòng)生化儀，酶比色法檢測血尿酸濃度。由專人測量研究對象常規(guī)站立位身高(m)及體重(kg)，并計(jì)算體重指數(shù)［BMI=體重(kg)/身高(m)2］，血壓采用標(biāo)準(zhǔn)水銀柱式血壓計(jì)測量，由專人按照《中國高血壓防治指南》中血壓測量要求測量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

以SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以x－±s表示，三組間比較，方差齊同，組間差異采用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD法;方差不齊，組間差異采用秩和檢驗(yàn)。血漿LEP水平與各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組LEP的表達(dá)水平及差異

血漿LEP在GA組為(436.55±246.65)pg/mL，HA組為(306.25±173.16)pg/mL，NC組為(199.68±185.54)pg/mL，三組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=17.78，P＜0.05)。GA組血漿LEP水平顯著高于HA組和NC組(P均＜0.05)，HA組血漿LEP水平顯著高于NC組(P＜0.05)。

2.2 三組臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

三組在年齡、性別和BMI構(gòu)成比上差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。三組UA、舒張壓(DBP)、GLU、白細(xì)胞(WBC)、GR、TG、LDL、VLDL、載脂蛋白A1(apoA1)表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，UA、DBP、GLU、WBC、GR、TG、VLDL分別在GA組、HA組和NC組表達(dá)呈逐步降低趨勢，而LDL和apoA1表達(dá)呈逐步升高趨勢，見表1。

表1 三組臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較s)

表1 三組臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較s)

*:方差分析的F值，#:秩和檢驗(yàn)的Z值;a:GA組與HA組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，b:GA組與NC組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，c:HA組與NC組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

843843年齡(歲)46±1145±1241±112.76*＞0.05 BMI(kg/m2)26±327±724±62.90*＞0.05收縮壓(mmHg)131±16134±17127±104.57#＞0.05例數(shù)(n)舒張壓b(mmHg)87±1183±1280±94.40*＜0.05 WBCab(×109/L)8.29±2.636.97±1.286.87±1.3611.97#＜0.05 GRab(×109/L)5.42±2.483.96±0.913.86±0.8220.10#＜0.05 LY(×109/L)2.20±0.902.25±0.532.29±0.582.70#＞0.05 MO(×109/L)0.58±0.200.57±0.150.52±0.163.20#＞0.05 TGbc(mmol/L)2.51±1.722.44±1.461.16±0.2642.73#＜0.01 TC(mmol/L)4.79±0.934.53±0.804.44±0.413.31#＞0.05 HDL(mmol/L)1.22±0.401.20±0.551.28±0.280.38*＞0.05 LDLbc(mmol/L)2.35±0.932.36±0.742.36±0.7411.67#＜0.01 VLDLbc(mmol/L)1.10±0.751.07±0.540.52±0.1335.45#＜0.01 apoA1b(mmol/L)1.13±0.331.23±0.321.24±0.1712.63#＜0.01 apoB100(mmol/L)0.88±0.240.82±0.180.81±0.154.78#＞0.05 GLUb(mmol/L)5.88±1.515.40±1.105.15±0.4412.19#＜0.01 UAbc(mmol/L)494.39±149.96478.04±44.01336.49±48.4767.12#＜0.05 Ur(μmol/L)5.12±1.735.19±1.064.58±1.071.62*＞0.05＞0.05 Cr(μmol/L)99.78±98.3788.36±16.6879.68±8.451.17*

2.3 LEP與臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性分析

GA患者血漿LEP與BMI、VLDL和Cr均呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)，HA患者血漿LEP水平與GLU均呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)，見表2。

表2 血漿LEP與GA組和NC組各項(xiàng)臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)相關(guān)性分析

3 討論

LEP是一種由肥胖基因編碼的蛋白質(zhì)，主要由脂肪細(xì)胞分泌，可通過與下丘腦的瘦素受體結(jié)合，抑制神經(jīng)肽Y基因的表達(dá)以減少機(jī)體攝食和能量消耗，與2型糖尿病、骨質(zhì)疏松癥等代謝性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［6－7］。隨著研究的不斷深入，LEP在炎癥和免疫調(diào)節(jié)過程中的作用也逐漸被人們所認(rèn)識，LEP可與單核巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等表面的長型受體結(jié)合激發(fā)炎癥免疫應(yīng)答，參與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展［8］。痛風(fēng)除是代謝性疾病外，同為臨床上常見的自身炎性疾?。?］，本課題研究發(fā)現(xiàn)LEP在原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血漿的表達(dá)顯著增高，與Inokuchi等［3］報(bào)道相符，提示LEP可能在痛風(fēng)的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。

近年來流行病學(xué)調(diào)查顯示，痛風(fēng)發(fā)病率和患病率呈逐漸增加的趨勢，發(fā)病人群以中年男性和絕經(jīng)期后女性更為多見，高尿酸血癥是痛風(fēng)最重要的生化基礎(chǔ)，在血尿酸水平持續(xù)增高的人群中，大多數(shù)為無癥狀高尿酸血癥，說明痛風(fēng)發(fā)病原因較為復(fù)雜，除機(jī)體代謝異常外，尚有其它因素參與調(diào)節(jié)人體血尿酸溶解度、尿酸鹽結(jié)晶的識別、炎癥激活及免疫調(diào)節(jié)等過程，本研究發(fā)現(xiàn)血漿LEP在痛風(fēng)患者較高尿酸血癥者是顯著增高的，進(jìn)一步相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)痛風(fēng)患者血漿LEP的水平與SR、WBC、GR、LY等炎性指標(biāo)無相關(guān)性，而與VLDL等代謝指標(biāo)呈顯著正相關(guān)，提示LEP可能未參與原發(fā)性痛風(fēng)的炎癥反應(yīng)，而與痛風(fēng)患者的脂代謝障礙相關(guān)，痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性發(fā)作時(shí)，機(jī)體的高代謝狀態(tài)可引起脂肪酸水平上升從而誘導(dǎo)LEP釋放入血，痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血漿LEP較高尿酸血癥者高表達(dá)。有研究指出，LEP可能通過促進(jìn)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞增生和刺激系膜細(xì)胞產(chǎn)生膠原等加重腎臟損害，減少尿酸的排泄，引起血尿酸濃度增高［10］，而經(jīng)尸檢證實(shí)90%～100%的痛風(fēng)患者存在腎臟損害［11］，本研究發(fā)現(xiàn)，GA組血漿LEP水平與Cr呈顯著正相關(guān)，提示LEP可能參與了原發(fā)性痛風(fēng)患者的腎功能損害。腎臟是尿酸排泄的主要器官，痛風(fēng)患者體內(nèi)的尿酸鹽結(jié)晶沉積于腎臟可表現(xiàn)為慢性尿酸鹽腎病、尿酸性尿路結(jié)石等，嚴(yán)重者可出現(xiàn)腎小球?yàn)V過功能下降，腎功能不全，而瘦素主要由腎臟清除，腎功能受損會進(jìn)一步升高血瘦素水平。本研究還發(fā)現(xiàn)GA組LEP水平顯著高于HA組，進(jìn)一步明確高水平LEP參與痛風(fēng)的發(fā)生發(fā)展或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致LEP高表達(dá)，對認(rèn)識痛風(fēng)發(fā)病機(jī)制可能具有重要意義。

脂肪組織分泌的多種脂肪因子包括脂聯(lián)素、LEP等在代謝綜合征的發(fā)病機(jī)制中起重要作用［12］。高尿酸血癥與肥胖、高血壓、糖尿病、脂代謝紊亂等代謝綜合征的組成成分密切相關(guān)［13］。本研究也提示，三組GLU、TG、LDL、VLDL、apoA1表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，GLU、TG、VLDL分別在GA組、HA組和NC組表達(dá)水平呈逐步降低趨勢，而LDL和apoA1的表達(dá)呈逐步升高趨勢。本研究發(fā)現(xiàn)高尿酸血癥組血漿LEP水平明顯高于正常對照組，與Lin等［12］的報(bào)道一致，提示LEP可能參與了高尿酸血癥的發(fā)生發(fā)展過程。進(jìn)一步相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，高尿酸血癥者LEP水平與GLU呈顯著正相關(guān)，而GLU水平在GA組、HA組和NC組表達(dá)水平呈逐步降低趨勢，有研究指出血漿瘦素與機(jī)體的胰島素抵抗和2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［14］，LEP可能參與高尿酸血癥者的糖代謝障礙。

總之，本研究表明LEP的高表達(dá)可能參與了原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎及高尿酸血癥的發(fā)生發(fā)展。LEP可能主要在原發(fā)性痛風(fēng)的脂代謝障礙及腎功能損害中發(fā)揮作用，可能參與高尿酸血癥的糖代謝過程。進(jìn)一步對參與本實(shí)驗(yàn)的原發(fā)性痛風(fēng)患者以及高尿酸血癥者進(jìn)行隨訪，設(shè)立自身對照，檢測痛風(fēng)患者在不同時(shí)期(急性發(fā)作期、間歇期及慢性期)的血漿LEP水平，同時(shí)比較發(fā)展為痛風(fēng)的高尿酸血癥者不同時(shí)期血漿LEP表達(dá)水平的差異，深入研究LEP與原發(fā)性痛風(fēng)和高尿酸血癥的關(guān)系，可能為痛風(fēng)以及高尿酸血癥發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)，為診斷、預(yù)防和治療痛風(fēng)及高尿酸血癥提供新思路。

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Expression and significance of plasma leptin in patients with primary gouty arthritis and hyperuricemia

JIANG Dan1，ZHOU Jing-guo1△，QING Yu-feng1，XIE Wen-guang1，YANG Qi-bin1，LI Min1，ZHAO Ming-cai1，2
(1.Institute of Rheumatology and Immunoloy;2.Department of Clinical Laboratory，the Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College，Nanchong 637000，Sichuan，China)

Objective:To investigate the expression levels of plasma leptin(LEP)in patients with primary gouty arthritis(GA)and hyperuricemia(HA)respectively，as well as to explore the pathogenesis of GA and HA.Methods:ELISA was used to determine the levels of plasma leptin in 84 GA，38 HA，and 43 normal control(NC)patients.Correlation analysis was used to evaluate the relationship between the levels of LEP and the data which were collected from clinical and laboratory samples.Results:Plasma concentrations of leptin were significantly different in the three groups(F=17.78，P＜0.05).The expression levels of plasma leptin were significantly higher in GA than that in HA(436.55±246.65 pg/ml vs 306.25±173.16 pg/ml，P＜0.05)and NC(436.55±246.65 pg/ml vs 199.68±185.54 pg/ml，P＜0.05)，and the expression levels of plasma leptin in HA increased significantly when compared to the NC(306.25±173.16 pg/ml vs 199.68±185.54 pg/ml，P＜0.05).In GA patients，the levels of leptin were positively correlated with BMI，VLDL and Cr(r=0.31，r=0.28，and r=0.25;P＜0.05)，but there was no correlation between UA，TG，HDL，LDL，GLU，GR，LY，SR，CRP and the expression levels of leptin(P＞0.05).The levels of leptin were positively correlated with GLU(r=0.42;P＜0.05)，but there was no relationship between UA，TG，HDL，LDL，VLDL(P＞0.05).and the expression levels of leptin in HA.Conclusion:The increased expression of the leptin is involved in the metabolic disturbance of lipid and the functional lesion of the kidney in primary gouty arthritis.It has a relationship with glycometabolism in hyperuricemia，and may play a key role in the pathogenesis of primary gouty arthritis and hyperuricemia.

Arthritis;Gout;Hyperuricemia;Leptin

1005-3697(2012)06-0566-05

R589.7

A

10.3969/j.issn.1005-3697.2012.06.012

四川省教育廳科研基金(10ZA081)

2012-06-12

江丹(1985－)，女，四川安岳人，碩士研究生，主要從事自身免疫性疾病基礎(chǔ)與臨床研究。

△通訊作者:周京國，E-mail:jgzhou@nsmc.edu.cn網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間:2012-11-1217∶11

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20121112.1711.015.html