劉艷萍，覃紹鵬，黃獻(xiàn)文，金伶

新生兒缺氧缺血性腦病患兒T淋巴細(xì)胞亞群和D－二聚體及心肌酶水平的變化及意義

劉艷萍，覃紹鵬，黃獻(xiàn)文，金伶

目的探討新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)T淋巴細(xì)胞亞群、D－二聚體及心肌酶水平的變化及意義。方法選取2008年1月—2011年6月我院新生兒科足月HIE患兒65例為研究對(duì)象，分為輕度組24例、中度組21例、重度組20例，另隨機(jī)選擇同期、健康、足月新生兒30例作為對(duì)照組。檢測(cè)所有受檢新生兒T淋巴細(xì)胞亞群的百分率，血漿D－二聚體、α－羥丁酸脫氫酶(α－HBDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK－MB)水平，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果4組外周血D－二聚體、α－HBDH、CK、CK－MB水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其中對(duì)照組與輕度組、中度組、重度組外周血D－二聚體、α－HBDH、CK、CK－MB水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);輕度組與中度組、中度組與重度組、輕度組與重度組百分率、D－二聚體、α－HBDH、CK、CK－MB水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);輕度組與中度組、重度組百分率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);輕度組、中度組與重度組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Spearman相關(guān)分析，HIE患兒外周血與D－二聚體呈負(fù)相關(guān)(r=－0.46，P＜0.05);與CK－MB呈負(fù)相關(guān)(r=－0.89，P＜0.05);D－二聚體與CK－MB呈正相關(guān)(r=0.43，P＜0.05)。結(jié)論新生兒HIE的發(fā)生、發(fā)展是多因素參與的復(fù)雜過程，其中免疫、炎癥反應(yīng)、血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、凝血/纖溶系統(tǒng)等異?？赡苁峭桨l(fā)生，并相互關(guān)聯(lián)。

缺氧缺血，腦;T淋巴細(xì)胞;D－二聚體;心肌酶

新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic－ischemic encephalopathy，HIE)是指新生兒因圍生期腦血供和氣體交換障礙所致的一種全腦性損傷，嚴(yán)重者可導(dǎo)致新生兒死亡或不可逆性腦損害，如智力低下、腦性癱瘓、生長(zhǎng)和發(fā)育落后、癲癇等［1］。缺氧缺血性腦損傷發(fā)生后，神經(jīng)元通過分泌細(xì)胞因子來激活下丘腦－垂體－腎上腺軸和交感神經(jīng)系統(tǒng)的活性，進(jìn)而抑制免疫系統(tǒng)［2］;通過一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)進(jìn)一步激活凝血系統(tǒng)［3］，嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致多器官系統(tǒng)的損害，如腦、心、腎、肺、胃腸等器官均有不同程度的損害［4］?；诖耍狙芯客ㄟ^檢測(cè)HIE患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群、D－二聚體及心肌酶的水平，探討三者的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2008年1月—2011年6月我院新生兒科足月HIE患兒65例為研究對(duì)象，均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)新生兒學(xué)組2005年修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］:(1)有明確可導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)窘迫的異常產(chǎn)科病史以及嚴(yán)重胎兒宮內(nèi)窘迫表現(xiàn)〔胎心＜100次/min，持續(xù)5 min以上;和(或)羊水Ⅲ度污染〕，或分娩過程中有明顯窒息史;(2)出生時(shí)出現(xiàn)重度窒息，Apgar評(píng)分1 min≤3分，并延續(xù)至5 min時(shí)仍≤5分;或臍動(dòng)脈血?dú)鈖H值≤7.0;(3)出生不久出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，并持續(xù)24 h以上。依據(jù)HIE病情分度標(biāo)準(zhǔn)，分為輕度組24例、中度組21例、重度組20例。另選擇同時(shí)期新生兒科出生的健康足月新生兒30例為對(duì)照組。所有新生兒排除感染性疾病、先天畸形、溶血性疾病等，母親均無自身免疫性疾病及其他可能影響新生兒免疫功能的疾病，新生兒住院期間均未使用可影響免疫功能的藥物。均已征得新生兒家長(zhǎng)知情同意。各組新生兒性別構(gòu)成、胎齡、日齡、出生體質(zhì)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，見表1)，具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法所有受檢新生兒于入新生兒科次日清晨7:00空腹抽取股靜脈血5 ml，分注3管;應(yīng)用美國(guó)BD Facscalibur流式細(xì)胞儀以間接免疫熒光檢測(cè)血漿T淋巴細(xì)胞亞群的百分率;應(yīng)用法國(guó)STAGO全自動(dòng)血凝儀檢測(cè)血漿D－二聚體;應(yīng)用日本奧林巴斯AU2700全自動(dòng)生化分析

儀檢測(cè)血清α羥丁酸脫氫酶(α－HBDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK－MB)。均使用儀器配套試劑，嚴(yán)格按儀器規(guī)程和試劑盒說明進(jìn)行操作及判斷結(jié)果，試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料以(±s)表示，多組間比較采用方差分析;兩兩比較采用q檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn);相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1 各組新生兒一般資料比較Table 1 Comparison of general data among each group

表2 四組新生兒觀察指標(biāo)比較(±s)Table 2 Comparison of observation indexes among four groups

表2 四組新生兒觀察指標(biāo)比較(±s)Table 2 Comparison of observation indexes among four groups

注:α－HBDH=α羥丁酸脫氫酶，CK=肌酸激酶，CK－MB=肌酸激酶同工酶;與對(duì)照組比較，*P＜0.05;與輕度組比較，▲P＜0.05;與中度組比較，△P＜0.05

組別例數(shù)CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+D－二聚體(mg/L)心肌酶(U/L)α－HBDHCKCK－MB對(duì)照組3087±659±827±62.86±1.150.28±0.05118±42137±6614±4輕度組2478±7*51±8*24±5*2.50±1.06*0.86±0.11*273±101*256±120*59±13*中度組2175±9＊▲48±9＊▲22±7＊▲2.34±0.96*2.14±0.29＊▲466±130＊▲845±290＊▲140±60＊▲重度組2071±10＊▲△46±10＊▲20±7＊▲2.01±0.72＊▲△6.25±0.36＊▲△695±206＊▲△1 658±385＊▲△195±75＊▲△F 4.814.424.113.355.127.519.248.20 P值＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.01＜0.05＜0.05值

3 討論

腦組織代謝旺盛，其耗氧量約占全身耗氧量一半，在胎兒期因母嬰間血液循環(huán)及氣體交換障礙使得血氧濃度降低，引起腦損害疾病包括新生兒HIE，是新生兒科中嚴(yán)重的疾病之一，圍生期窒息是其主要的病因［6］。在缺氧情況下，腦組織的能量代謝障礙、通氣功能障礙以及腦微血管通透性增高產(chǎn)生血管源性腦水腫，繼而發(fā)生選擇性神經(jīng)元壞死、基底神經(jīng)節(jié)變性一系列病理改變［7］。

T淋巴細(xì)胞是一個(gè)具多功能的細(xì)胞群體，細(xì)胞免疫的過程中，各T淋巴細(xì)胞亞群的相互作用和影響，對(duì)維持機(jī)體的免疫功能穩(wěn)定發(fā)揮極其重要作用［8］。代表總T淋巴細(xì)胞，分為調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)活性的輔助性T細(xì)胞亞群，以為細(xì)胞標(biāo)記;還包括抑制性T細(xì)胞亞群，以為細(xì)胞標(biāo)記。細(xì)胞作用為促進(jìn)體液免疫，細(xì)胞則是抑制其反應(yīng)，比值水平反映了免疫系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性［9］。生理狀態(tài)下輔助性與抑制性T細(xì)胞亞群維持著動(dòng)態(tài)平衡，失調(diào)則會(huì)導(dǎo)致免疫損傷。本研究結(jié)果顯示，HIE患兒細(xì)胞數(shù)量較正常新生兒均明顯減少，且重度HIE患兒下降更明顯，即患HIE時(shí)機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)，這與卞洪亮等［10］、張向東等［11］研究結(jié)論一致。HIE患兒的免疫功能抑制機(jī)制可能在于:(1)缺氧缺血時(shí)，神經(jīng)元產(chǎn)生大量細(xì)胞因子激活了下丘腦－垂體－腎上腺軸以及交感神經(jīng)系統(tǒng)活性，從而抑制免疫系統(tǒng);(2)缺氧缺血時(shí)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)自身內(nèi)分泌功能改變，通過神經(jīng)內(nèi)分泌遞質(zhì)抑制了免疫系統(tǒng)，但是其確切機(jī)制尚需進(jìn)一步的探討。

D－二聚體作為纖溶酶水解交聯(lián)纖維蛋白降解后形成的特異性可溶性降解產(chǎn)物，是體內(nèi)高凝狀態(tài)以及纖溶亢進(jìn)的分子標(biāo)記物之一［12］。本研究結(jié)果顯示，HIE患兒外周血D－二聚體水平明顯升高，其中重度HIE患兒較輕、中度患兒明顯升高，表明機(jī)體內(nèi)纖溶性增高，既有血栓形成傾向又有纖溶亢進(jìn)，處于一種高水平動(dòng)態(tài)平衡。其原因可能是腦組織缺氧缺血時(shí)，體內(nèi)的血液重新分布、內(nèi)皮細(xì)胞損傷以及組織因子暴露，激活了內(nèi)、外源凝血系統(tǒng)，導(dǎo)致凝血功能亢進(jìn)，血液呈現(xiàn)高凝狀態(tài)，導(dǎo)致出現(xiàn)彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)的可能性增加。這與文獻(xiàn)報(bào)道HIE患兒D－二聚體水平明顯增高，且與病情呈正相關(guān)是一致的［13］。

心肌酶在人體內(nèi)廣泛分布，同時(shí)存在于許多組織器官中，包括心肌、骨骼肌、肝臟、腎臟等重要的組織器官［14］。在機(jī)體正常狀態(tài)，CK－MB在心肌細(xì)胞的含量最高而血清含量極微，心肌細(xì)胞受損傷后2～13 h內(nèi)血清CK－MB活性會(huì)急劇上升，上升的程度和心肌壞死面積成正比，因此CK－MB水平對(duì)判斷心肌損害具有高度的靈敏性和特異性，是心肌損害的一個(gè)很重要的診斷指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，HIE患兒外周血α－HBDH、CK、CK－MB水平均顯著升高，可能與機(jī)體免疫反應(yīng)，細(xì)胞因子、炎性遞質(zhì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷等有關(guān)［15］。

本研究中，HIE患兒包括輕、中、重度各病情程度的患兒，但應(yīng)排除其他影響血T淋巴細(xì)胞、D－二聚體及心肌酶的因素，如本研究中的新生兒排除感染性疾病、先天畸形、溶血性疾病等，母親無自身免疫性疾病及其他可能影響到新生兒免疫功能的疾病，且未使用可影響免疫功能的藥物。本研究因時(shí)間所限，所選研究樣本較少，在后續(xù)研究中可進(jìn)一步擴(kuò)大研究樣本，選取其他有意義的T淋巴細(xì)胞亞群或其他血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)研究。

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Correlation of T Lymphocyte， D－dimer and Myocardial Enzymes in Neonates with Hypoxic－ischemic Encephalopathy

LIU Yan－ping，QIN Shao－peng，HUANG Xian－wen，et al.Department of Laboratory Medicine，Liuzhou People's Hospital，Liuzhou 545001，China

ObjectiveTo investigate the levels and correlation of serum T lymphocyte，D－dimer and myocardial enzymes in neonates with hypoxic－is chemic encephalopathy(HIE).Methods65 full－term neonates with HIE admitted to neonates department of our hospital from January 2008 to June 2011 were divided into mild group(24 cases)，moderate group(21 cases)and severe group(20 cases).Meanwhile，30 full－term healthy neonates of the same period were selected as control group.Serum T lymphocyte subsets percentageplasma D－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB were detected and the correlation was analyzed.ResultsThelevels in peripheral blood，D－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB among the four groups all showed statistically significant differences(P＜0.05).The levels ofD－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB in the control group showed statistically significant differences compared with those in the mild group，moderate group and severe group(P＜0.05).TheD－dimer，α－HBDH，CK and CK－MB all showed statistically significant differences between mild group and moderate group，moderate group and severe group and mild group and severe group(P＜0.05).The levels ofin mild group showed statistically significant differences compared with those in the moderate group and severe group(P＜0.05).Thein mild group and moderate group showed statistically significant difference compared with that in severe group(P＜0.05)．Spearman correlation analysis showed that thein peripheral blood was negatively correlated with D－dimer in HIE neonates(r=－0.46，P＜0.05).Thewas negatively correlated with CK－MB(r=－0.89，P＜0.05).The D－dimer was positively correlated with CK－MB(r=0.43，P＜0.05).ConclusionThe occurrence and development of HIE in neonates is a complicated course involving various factors.Immune，inflammatory reaction，vascular endothelial cell injury and coagulation/fibrinolytic system abnormality may occur simultaneously and relate to each other.

Hypoxic－ischemic，brain;T lymphocyte;D－dimer;Myocardial enzymes

R 722.12

A

1007－9572(2012)11－3842－03

10.3969/j.issn.1007－9572.2012.11.091

545001廣西柳州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(劉艷萍，覃紹鵬)，兒科(黃獻(xiàn)文，金伶)

劉艷萍，545001廣西柳州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;E－mail:cdsoft@163.com

2012－03－10;

2012－09－25)(本文編輯:陳素芳)