甄運寰，顏登國，張汝一

(貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肛腸外科，貴陽 550004)

大腸癌是消化道常見的惡性腫瘤。目前，手術(shù)切除仍是治療大腸癌的主要措施。但術(shù)后5年生存率仍較低[1]。50%～60%的患者死于腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[2-3]。引起腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的主要原因是腫瘤具有侵襲和轉(zhuǎn)移性。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是腫瘤細胞與宿主細胞之間一系列復(fù)雜的、多步驟、多因素相互作用的動態(tài)過程，主要包括腫瘤細胞與細胞外基質(zhì)黏附、貼近腫瘤細胞的基質(zhì)降解、腫瘤細胞在趨化因子的作用下向縱深方向移動和腫瘤淋巴管生成等。乙酰肝素酶(hparanase,Hpa)能降解細胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜(BM)組成的屏障，從而促進腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移[4]。而血管內(nèi)皮生長因子-C(vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)誘導(dǎo)在腫瘤外周形成新的淋巴管[5]，使腫瘤細胞從新生淋巴管進入淋巴結(jié)，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[6-8]。作者通過免疫組織化學(xué)檢測大腸癌組織中Hpa和VEGF-C蛋白的表達，探討其與大腸癌侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肛腸外科1994～1999年收治的40例術(shù)前未經(jīng)放化療，術(shù)后腫瘤組織石蠟塊仍保存完好的大腸癌病例。其中，男19例，女21例。年齡25～77歲，平均55.7歲。結(jié)腸癌11例，直腸癌29例。40例均為腺癌，高分化9例，中分化25例，未分化及低分化6例。浸潤深度在漿膜層以內(nèi)16例，浸潤深度達到或超過漿膜層24例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。臨床分期：按國際抗癌聯(lián)盟(union international control cancer,UICC)提出的TNM分期法，Ⅰ期11例、Ⅱ期13例、Ⅲ11例、Ⅳ5例。40例患者35例行根治性切除，5例行姑息性切除。正常組織來源于大腸腺瘤切除的大體標(biāo)本中。

1.2試劑與方法 對大腸正常組織及大腸癌組織進行普通HE染色，確定所有切片中均存在所需組織。免疫組織化學(xué)染色采用Envision兩步法，兔抗人Hpa單克隆抗體購于武漢博士德生物工程有限公司；兔抗人VEGF-C多克隆抗體，購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組織化學(xué)通用型PV9000試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。操作按說明書進行。

1．3結(jié)果判斷 由2位病理專家單獨閱片，結(jié)果再綜合分析確定。Hpa和VEGF-C染色陽性信號為胞漿呈清晰棕黃色顆粒。每張切片在400倍顯微鏡下選定10個視野計算陽性細胞的百分數(shù)。表達強度判斷，陰性(-)：全部腫瘤細胞無顯色或胞漿染色陽性的細胞數(shù)小于5%；(+)：陽性細胞5%～24%；(++)：陽性細胞25%～50%；(+++)：陽性細胞大于50%。

1．4隨訪 隨訪時間11個月至6年。術(shù)后經(jīng)書信隨訪到38例，失訪2例，隨訪率為95%。生存5年以下者23例，生存5年或以上者15例。

1．5統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包處理，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1Hpa和VEGF-C表達比較 大腸癌組織中Hpa和VEGF-C的陽性表達率明顯高于大腸正常組織中的表達率(P<0.01)，見表1，封2圖1～2。

表1 Hpa與VEGF-C在大腸癌組織及正常組織中的表達

2．2Hpa和VEGF-C在大腸癌中的表達與臨床病理特征的關(guān)系 Hpa和VEGF-C在性別、年齡、腫物大小、腫物位置及浸潤深度方面的陽性表達比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；在有無淋巴轉(zhuǎn)移、Ⅲ、Ⅳ期與TNM Ⅰ、Ⅱ、生存期小于5年與大于或等于5年的陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，見表2。

表2 Hpa和VEGF-C在大腸癌中的表達和臨床病理特征的關(guān)系

表3 Hpa和VEGF-C的表達在大腸癌中的相關(guān)性

2．3Hpa和VEGF-C的表達在大腸癌中的相關(guān)性 Hpa和VEGF-C在大腸癌中的表達呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.570，P<0.01，見表3。

3 討 論

3．1Hpa和VEGF-C的表達與大腸癌發(fā)生、發(fā)展 侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的最重要特征，是影響腫瘤治愈率的主要因素。大多數(shù)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，Hpa在腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[9]。硫酸乙酰肝素(HS)是ECM和BM組成的屏障中的主要成分。Hpa是體內(nèi)惟一能降解HS的酶，使ECM和BM組成的屏障受到破壞，是腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中的一個關(guān)鍵酶。Hpa可以釋放和激活結(jié)合在HS上的堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)，bFGF能促進腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞和成纖維細胞增生遷移從而誘導(dǎo)腫瘤血管生成和使血管的通透性增強，促使腫瘤細胞的侵入血管和遠處種植。許多研究已證實，Hpa在許多高轉(zhuǎn)移惡性腫瘤細胞中表達水平很高[10-11]。VEGF-C屬血管內(nèi)皮生長因子和血小板生長因子家族，主要與分布在淋巴管內(nèi)皮細胞上的VEGFR-3受體結(jié)合，誘導(dǎo)在腫瘤外周形成新的淋巴管，并使新的淋巴管與已存淋巴管融合，是腫瘤細胞從新生淋巴管進入淋巴結(jié)，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，通過淋巴系統(tǒng)向全身其他器官擴散[12]。VEGF-C與分布于血管內(nèi)皮細胞上的受體 VEGFR-2結(jié)合，促進腫瘤血管增生，誘導(dǎo)新生血管形成，從而促進腫瘤細胞的血行轉(zhuǎn)移。許多研究中 VEGF-C高表達的患者生存時間和生存率明顯降低[13-14]。本實驗結(jié)果顯示，大腸癌患者中Hpa、VEGF-C的表達明顯高于正常組織，大腸癌有淋巴轉(zhuǎn)移、Ⅲ～Ⅳ期、生存時間小于5年者Hpa、VEGF-C的表達明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移、Ⅰ～Ⅱ期、生存時間大于或等于5年者，這與許多研究相一致。

3．2Hpa和VEGF-C 在大腸癌的臨床病理學(xué)特征中的表達 本實驗中Hpa和VEGF-C的表達與患者性別、年齡、腫物大小、腫物位置、腫瘤浸潤深度和腫瘤的分化程度均無關(guān)(P>0.05)。這與臨床上腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移與性別、年齡、腫物大小、腫物位置無關(guān)相吻合。臨床上大腸癌腫瘤浸潤的深度、腫瘤分化程度與腫瘤轉(zhuǎn)移有一定的相關(guān)性，浸潤深度越深、腫瘤分化程度越差，發(fā)生轉(zhuǎn)移的可能性越高，這與臨床上分化程度與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的觀點相矛盾，這可能說明腫瘤發(fā)生與轉(zhuǎn)移是較復(fù)雜的，是受多種因素影響的。Hpa和VEGF-C在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，這提示Hpa和VEGF-C表達與大腸癌組織的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。這可能與Hpa促進腫瘤血管生成及增加血管通透性，而VEGF-C能誘導(dǎo)腫瘤外周形成新的淋巴管和新的血管，從而使腫瘤細胞可通過淋巴-靜脈連接進入淋巴管或直接侵入與血管伴行的淋巴管，促進淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。

3．3Hpa和VEGF-C在大腸癌中的相關(guān)性 Hpa和VEGF-C在大腸癌中的表達呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.570，P<0.01，說明Hpa和VEGF-C在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用，功能上可能具有互補性，Hpa能破壞ECM和BM組成的屏障，使腫瘤發(fā)生侵襲，VEGF-C使腫瘤所在位置形成淋巴管，使侵襲的腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成為可能。二者均能誘導(dǎo)新生血管形成，促進腫瘤發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。說明兩者在腫瘤的發(fā)生、浸潤及轉(zhuǎn)移過程中相互促進、關(guān)系密切。

3．4Hpa和VEGF-C與大腸癌分期及預(yù)后的關(guān)系 臨床上Ⅲ、Ⅳ期的大腸癌患者5年生存率明顯低于Ⅰ、Ⅱ患者[15]，Hpa和VEGF-C在Ⅲ、Ⅳ期大腸癌患者的陽性表達率明顯高于TNM Ⅰ、Ⅱ期；在生存期小于5年大腸癌中的陽性表達率明顯高于大于等于5年組(P<0.01)。提示Hpa和VEGF-C高表達的大腸癌患者腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的能力越強，預(yù)后越差。

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