隆維東，劉萬彬，李 堅，張玲玲

(重慶市巴南區(qū)人民醫(yī)院檢驗科 401320)

成分輸血是臨床醫(yī)學重要的治療手段，而ABO血型鑒定是開展臨床成分輸血的重要基礎(chǔ)[1]。按照《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》要求，輸血科在交叉配血前，需復(fù)查受血者和供血者ABO血型(正反定型)。在臨床血型鑒定過程中,諸多因素可對血型正定型試驗造成干擾，而同時開展反定型試驗時,可及時發(fā)現(xiàn)和糾正正定型中的錯誤。在基層醫(yī)院，血型鑒定及交叉配血標本量少，而商品化的血型反定型試劑紅細胞價格昂貴、有效期短。同時，其他文獻報道的自制反定型試劑紅細胞方法、原材料準備及配制過程復(fù)雜,故部分基層醫(yī)院未做血型反定型鑒定[2]。本院通過一種簡便、經(jīng)濟、實用的自制反定型試劑紅細胞方法，在基層醫(yī)院運用，效果較好，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1材料與試劑 BIOBASE生物安全柜,由濟南鑫貝西生物技術(shù)有限公司提供。Nikon YS100光學顯微鏡由南京覃思科技有限公司提供。隱血(FOB)檢測試劑(膠體金法)，批號：201101014，由艾康生物技術(shù)有限公司提供?？笰、抗B血型定型試劑(單克隆抗體)，批號：20100610，由長春博德生物技術(shù)有限公司提供。ABO血型反定型試劑紅細胞(人紅細胞)，批號：201008005，由江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供。各型紅細胞懸液，由重慶市血液中心提供。一次性真空采血管(無附加劑)，批號：100824，由成都市雙流雙陸醫(yī)療器械有限公司提供。

1.2方法

1.2.1反定型試劑紅細胞配制 收集距離失效期大于20 d的A、B、O型紅細胞懸液血袋上多余的交叉配血小辮。在生物安全柜內(nèi)，將3個相同血型的不同獻血員交叉配血小辮內(nèi)的血液混合在一起，置于一次性無菌真空采血管(無附加劑)內(nèi)。再通過ABO血型鑒定復(fù)核血型后，在試管上注明血型，配制日期，配制人，有效期，置2～6 ℃冰箱保存。

表1 自制反定型試劑紅細胞溶血情況

表2 自制反定型試劑紅細胞抗原穩(wěn)定性檢測結(jié)果

-：此項無數(shù)據(jù)。

1.2.2自制反定型試劑紅細胞穩(wěn)定性觀察 自試劑配制當日起，每2天觀察上清液有無出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，并記錄上清液顏色及透明度。同時,吸取紅細胞層,推薄片,在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。然后再吸取少量上清液，用無菌等滲生理鹽水作倍比稀釋,用隱血試紙條檢測溶血程度,記錄出現(xiàn)隱血陰性時的稀釋倍數(shù)。

1.2.3自制反定型試劑紅細胞抗原穩(wěn)定性檢測 自試劑配制當日起，每2天用單克隆抗A、抗B血清分別與各型自制反定型試劑紅細胞作凝集試驗，肉眼觀察凝集狀況，凝集強度以4+、3+、2+、1+、±表示。

1.2.4自制反定型試劑紅細胞臨床驗證 收集本院成年健康體檢人員標本520份，同時用商品化ABO血型反定型試劑紅細胞(人紅細胞)及自制試劑紅細胞做ABO血型鑒定，對比兩種試劑血型鑒定結(jié)果是否相符。

2 結(jié) 果

2.1自制反定型試劑紅細胞溶血情況 從第1～15天，各型自制試劑紅細胞，肉眼觀察試劑底部的紅細胞呈鮮艷紅色，上清液呈微黃色,清澈透明。16 d后,上清液出現(xiàn)輕度溶血,呈淺紅色。紅細胞推薄片顯微鏡下觀察，第1～15天，紅細胞呈正常的圓盤狀，均勻分布，無皺縮及其他異常情況。16 d后，少量紅細胞出現(xiàn)皺縮或碎片。通過隱血試紙條檢測的溶血情況結(jié)果(該隱血試紙條檢出限為0.1 g/L，1∶8稀釋陰性相當于含量低于0.8 g/L)，見表1。

2.2自制反定型試劑紅細胞抗原穩(wěn)定性檢測結(jié)果 第1～9天A、B型試劑紅細胞與相應(yīng)的抗A、抗B血清產(chǎn)生4+凝集強度，第10～15天A、B型試劑紅細胞與相應(yīng)的抗A、抗B血清產(chǎn)生3+凝集強度，17 d后A、B型試劑紅細胞與相應(yīng)的抗A、抗B血清產(chǎn)生2+凝集強度。而O型試劑紅細胞19 d內(nèi)與抗A、抗B血清未產(chǎn)生凝集反應(yīng)，見表2。

2.3自制反定型試劑紅細胞臨床應(yīng)用驗證結(jié)果 520例成年健康體檢人員商品化試劑紅細胞與自制試劑紅細胞血型鑒定結(jié)果完全相符，見表3。

表3 自制反定型試劑紅細胞臨床應(yīng)用驗證結(jié)果

3 討 論

現(xiàn)代輸血發(fā)展的啟動是由于ABO紅細胞血型系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn),而ABO血型的準確鑒定是開展臨床成分輸血的基礎(chǔ)。進行ABO血型鑒定時，需通過已知抗A、抗B標準血清檢查紅細胞表面抗原成分(正定型)和已知的反定型試劑紅細胞來檢查血清中的抗體成分(反定型)，只有正、反定型結(jié)果相符的情況下，才能準確判斷ABO血型。而當正、反定型結(jié)果不相符時，須進一步查找原因來明確血型[3]。

本文通過混合相同血型血袋上交叉合血小辮內(nèi)的血液來配制成反定型試劑紅細胞。因血袋上交叉配血小辮內(nèi)的血液與血袋內(nèi)的紅細胞懸液經(jīng)過了同樣的處理，其中包括獻血員篩查，如HBsAg、HCV、抗HIV、梅毒、ALT的檢測，故該自制試劑傳染性相對較少。同時，細胞保存液能有效地為細胞代謝提供能量，防止溶血，保持紅細胞活性[4]。在試劑穩(wěn)定性方面,從第1～15天，各型自制試劑紅細胞穩(wěn)定性較好，16 d后,出現(xiàn)少量紅細胞破壞現(xiàn)象。溶血情況從表1可以看出,各型試劑配制 16 d后，上清液游離血紅蛋白含量仍低于0.8 g/L，與其他相關(guān)文獻報道基本一致[5]?？乖€(wěn)定性方面，從表2可以看出，試劑配制17 d后A、B型試劑紅細胞與相應(yīng)的抗A、抗B血清產(chǎn)生2+凝集強度，而O型試劑紅細胞19 d內(nèi)與抗A、抗B血清不產(chǎn)生凝集反應(yīng)。從臨床應(yīng)用驗證來看，520份健康成年體檢人員標本,通過長春博德生物技術(shù)有限責任公司提供的抗A、抗B血清做正定型鑒定，使用商品化試劑紅細胞與自制試劑紅細胞同時作反定型試驗，520份標本血型鑒定結(jié)果完全相符(100％)。

自制反定型試劑紅細胞細胞濃度較高,在臨床反定型應(yīng)用過程中,需吸取底層紅細胞,用無菌等滲生理鹽水洗滌3次，再稀釋至5％左右濃度后使用，保質(zhì)期為24 h[6]。從以上試驗可以看出，通過該方法配制的反定型試劑紅細胞,在15 d有效期內(nèi)，試劑穩(wěn)定性、抗原穩(wěn)定性及臨床應(yīng)用效果較好[7]，15 d后，自制試劑溶血加重，抗原穩(wěn)定性下降，故本文建議將自制試劑的有效期控制在15 d內(nèi)。在日常應(yīng)用過程中，每天需通過抗A、抗B血清進行抗原確認及質(zhì)量控制，防止細菌生長或交叉污染。同時，為穩(wěn)定紅細胞正常功能及保證細胞膜結(jié)構(gòu)的完整性，在試劑配制和使用過程中，要盡量減少機械損傷對紅細胞的破壞[8]。因該試劑配制方法無需特殊試劑、材料及儀器，操作簡便，經(jīng)濟實用，故適合在基層醫(yī)院推廣。

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