[摘要] 目的 建立HPLC法測(cè)定克霉唑乳膏含量的不確定度分析方法。方法 通過(guò)建立HPLC含量測(cè)定法的數(shù)學(xué)模型，找出影響不確定度的因素并對(duì)各個(gè)不確定度分量進(jìn)行評(píng)定。結(jié)果 計(jì)算各分量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度，由此計(jì)算合成不確定度和擴(kuò)展不確定度，從結(jié)果可看出對(duì)照品帶來(lái)的不確定性較大。結(jié)論 測(cè)量不確定度可用于對(duì)克霉唑乳膏含量測(cè)定結(jié)果的評(píng)定。

[關(guān)鍵詞] 克霉唑乳膏；含量；HPLC法；測(cè)量不確定度

[中圖分類號(hào)] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2011）36-78-02

Uncertainty Analysis on Assay for Clotrimazole Cream by HPLC

WANG Zhengyu

Suzhou Institute for Drug Control in Anhui Province，Suzhou 234000，China

[Abstract] Objective To establish an uncertainty analysis method for Clotrimazole cream by HPLC. Methods The mathematic model was established by HPLC identified the influence factors impact uncertainty and each component of uncertainty was also evaluated. Results Each component of uncertainty was calculated by analyzing the various variable parameters in the procedure，the combined uncertainty and expanded uncertainty were finally obtained. The results showed the control brought greater uncertainty. Conclusion The mathematic model of uncertainty is establish for applicable to evaluate the accuracy of assay of Clotrimazole cream.

[Key words] Clotrimazole cream；Content；HPLC；Uncertainty of measurement

克霉唑?qū)龠量╊惪拐婢?，?duì)白念珠菌則可抑制其自芽孢轉(zhuǎn)變?yōu)榍忠u性菌絲的過(guò)程；其含量大小直接影響到藥品的治療效果，而在含量的測(cè)定過(guò)程中存在著許多不確定因素，由于測(cè)量誤差的客觀存在，我們對(duì)被測(cè)量值的不能肯定的程度稱為不確定度。本文依據(jù)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定，并按照測(cè)量不確定度評(píng)定與表示方法[1]的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行不確定度進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與方法

1.1 儀器與試藥

Waters2695-2489型高效液相色譜儀（美國(guó)沃特斯公司）；梅特勒XP205型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）（d=0.01mg/0.1mg）；經(jīng)標(biāo)定的A級(jí)100mL、50mL單標(biāo)容量瓶。哌拉西林對(duì)照品（中國(guó)生物制品檢定所提供，批號(hào)：100037-200306，含量100%，干燥后使用）；克霉唑乳膏（蕪湖三益制藥有限公司，批號(hào)：100204，標(biāo)示量為10g/支，含量0.1g）；甲醇為色譜純；其余試劑為分析純；水為重蒸餾水。

1.2 色譜條件

色譜柱：日本島津ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；填充劑：用十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：磷酸鹽溶液-甲醇（25：75）流速1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。

1.3 測(cè)定法

對(duì)照品溶液的制備：取對(duì)照品適量（對(duì)照品1：11.80mg；對(duì)照品2：11.52mg），置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL中約含克霉唑0.5mg的溶液。供試品溶液的制備：取本品5支內(nèi)容物混勻，精密稱取適量（供試品1：1.3351g；供試品2：1.3325g），置25mL量瓶中，加甲醇15mL，置50℃水浴中振搖使克霉唑溶解，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中放置2h，立即濾過(guò)，取續(xù)濾液放置室溫，即得。按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定，結(jié)果計(jì)算出克霉唑的含量為90.3%。

2 結(jié)果

2.1 數(shù)學(xué)模型[2]

本品哌拉西林峰面積按外標(biāo)法計(jì)算，克霉唑含量計(jì)算公式如下：

式中：Y-克霉唑乳膏百分含量，W0-對(duì)照品取樣量，Wx-供試品取樣量，AO-對(duì)照品中克霉唑的峰面積，S-對(duì)照品純度100%，Ax-供試品中克霉唑的峰面積，-克霉唑乳膏的平均裝量，f0-對(duì)照品稀釋倍數(shù)，fx-供試品稀釋倍數(shù)。可以得出方差：

2.2 各分量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.2.1 對(duì)照品純度的相對(duì)準(zhǔn)確不確定度 克霉唑?qū)φ掌芳兌葹?00%，對(duì)照品純度所引入的不確定度u（S）屬于B類不確定度。參照相關(guān)文獻(xiàn)[3]，按均勻分布換算：u（S）=0.25%/■=0.14%（暫假定其分散區(qū)間的半寬度a=0.25％），故：urel（S）=■=1.4×10-4。

2.2.2 對(duì)照品的稱量過(guò)程中引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度 （1）天平示值所引起的不確定度：本實(shí)驗(yàn)用天平經(jīng)過(guò)專業(yè)機(jī)構(gòu)鑒定合格，電子天平的鑒定證書給出的最大允差為±0.03mg，按矩形分布計(jì)算：u（W01）=0.03/■=1.732×10-2mg。（2）稱量重復(fù)性所引起的不確定度：鑒定證書給出的重復(fù)性誤差為0mg，故u（W02）=0mg對(duì)照品采取的是減重法稱量，本實(shí)驗(yàn)共稱取兩份對(duì)照品，每份共稱量了兩次（WO1=11.80mg，WO2=11.25mg），故每份對(duì)照品稱量的不確定度分別為：■，

所以對(duì)照品稱量相對(duì)準(zhǔn)確不確定度為

2.2.3 玻璃儀器引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度 ①溫度：容量瓶的校準(zhǔn)是在室溫為20℃下進(jìn)行，本次實(shí)驗(yàn)溫度也保持在20℃，所以由溫度引起的標(biāo)準(zhǔn)不確定度可以忽略不計(jì)。②校準(zhǔn)：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用到一個(gè)A級(jí)25mL容量瓶，其容量允差為±0.03mL，按均勻分布計(jì)算，由容量允差所引起的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：u（25）a=0.03/■=1.732×10-2mL。

2.2.4 供試品和對(duì)照品稀釋相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度 供試品溶液稀釋和對(duì)照品溶液稀釋過(guò)程中都用到25mL容量瓶1個(gè)，故由稀釋所引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：urel（f0）=u（25）a/25=1.732×10-2/25=6.928 ×10-4，urel（fx）=6.928×10-4。

2.2.5 供試品稱量引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度 （1）天平示值引起的不確定度：u（Wx2）=0.03/■=1.732×10-2mg。（2）天平稱量重復(fù)性引起的不確定度：u（Wx1）=0/■=0mg。

平行稱量供試品兩份，取樣量分別為：樣品1：1.3351g，樣品2：1.3325g。供試品1的urel（Wx-01）=■=2.599×10-4，供試品2的urel（Wx-02）=■=2.604×10-4。

所以，供試品稱量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.2.6 對(duì)照品峰面積引起的相對(duì)不確定度 （1）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，第一份對(duì)照品共進(jìn)樣5次，峰面積分別為1016497.85、1014151.81、1012991.14、1014735.03、1015554.85，平均峰面積AO2=1014486.14?？梢缘贸鱿鄬?duì)偏差SD=1309.317，urel（AO1）=1.290×10-3。（2）第二份對(duì)照品共進(jìn)樣3次，峰面積分別為：1016454.56、1018113.57、1017112.7，平均峰面積AO2=1017226.94。同理可得urel（AO2）=8.21×10-4。對(duì)照品溶液色譜峰面積的相對(duì)不確定度：urel（AO）= ■=1.327×10-4。

2.2.7 樣品峰面積的相對(duì)不準(zhǔn)確度 樣品1峰面積：1048989.68、1059992.96、1048835.30；樣品2峰面積：044787.33、1049553.47、1048858.12，可以得出相對(duì)偏差SDX1=6397.778，urel（AX1）=6.078×10-3SDX2=2574585，urel（AX2）=2.457×10-3。所以供試品峰面積的合成相對(duì)不確定度：urel（AX）=■=5.691×10-4。

2.3 不確定分量

各因素引起的不確定量進(jìn)行匯總。見(jiàn)表1。

3 討論

筆者通過(guò)對(duì)HPLC法測(cè)定克霉唑乳膏含量中不確定度的逐一分析和量化，評(píng)定出測(cè)量結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度。從結(jié)果可以看出不確定度主要來(lái)自對(duì)照品的稱量，本實(shí)驗(yàn)對(duì)照品取樣量相對(duì)供試品較小，容易引起誤差也是必然，為了減少誤差，稱量過(guò)程中要多注意環(huán)境的影響，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)校正天平，在試驗(yàn)過(guò)程中要遵循SOP嚴(yán)格操作，盡量排除偶然誤差，減小系統(tǒng)誤差，把實(shí)驗(yàn)做好做準(zhǔn)。由于本品為乳膏劑，故在取樣時(shí)應(yīng)特別注意，應(yīng)準(zhǔn)確稱量，避免因稱量不準(zhǔn)所引起的含量值不準(zhǔn)。

不確定度的分析，有助于我們發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的偏差，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題、解決問(wèn)題，最終能提高試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，提高實(shí)驗(yàn)者的試驗(yàn)技能[5]。因此，日常檢驗(yàn)工作中，不確定度的評(píng)估工作應(yīng)定期開(kāi)展。

[參考文獻(xiàn)]

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[3] 黃諾嘉，楊文紅，黃奕濱，等. HPLC法測(cè)定蘆薈膠囊中蘆薈苷含量的不確定度評(píng)定[J]. 中國(guó)藥業(yè)，2009，12（9）：1318-1320.

[4] 李金海. 誤差理論與測(cè)量不確定度評(píng)定[M]. 北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2003：148.

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（收稿日期：2011-11-04）