摘 要 目的：采用高效液相色譜法（HPLC法）同時測定復(fù)方丹參滴丸中的7種成分。方法：應(yīng)用Diamonsil C18色譜柱，以乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，在柱溫35 ℃下使用205、270和285 nm三波長同時檢測。結(jié)果：7種成分的峰面積與濃度的線性關(guān)系良好，平均回收率在94.3%～101.3%間，加樣回收率符合要求。結(jié)論：該方法簡單、準(zhǔn)確可靠且重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞 復(fù)方丹參滴丸 HPLC法 含量測定

中圖分類號：R284; R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533(2011)08-0413-03

Quantitative determination of multi-components in Compound Danshen Dripping Pill by HPLC method

Yao Lin1*，Cheng Wei-ming2**

（1. Shanghai Food and Drug Packaging Material Control Center，Shanghai， 201203；

2. Zhejiang Institute for Food and Drug Control，Hangzhou，310004）

Abstract Objective: To establish an HPLC method for the simultaneous determination of 7 components in Compound Danshen Dripping Pill. Method: Diamonsil C18 was used as the solid phase， and acetonitrile-methanol-0.1% (v/v) phosphoric acid as the mobile phase for the gradient elution. The column temperature was 35℃，and the detective wavelengths were set as 205， 270 and 285 nm. Results: the linearities of the 7 components were all good in the range of the test concentration，and the average recoveries were between 94.3% and 101.3%. Conclusion: the method was simple，reliable and reproducible，which could be used as quality control for the determination of Compound Danshen Dripping Pill.

Key words Compound Danshen Dripping Pill；HPLC；content determination

中藥成分的含量測定是中藥現(xiàn)代化研究的重要組成部分之一，而中藥復(fù)方多成分含量的同時測定研究還可為中藥復(fù)方的質(zhì)量控制提供必要的基礎(chǔ)和方法。復(fù)方丹參滴丸系根據(jù)1995年版中國藥典一部中復(fù)方丹參片的處方、經(jīng)在現(xiàn)代高科技條件下提取丹參和三七的有效成分、再加入適量的冰片制成的新型純中藥制劑，具有活血化瘀、理氣止痛的功效，臨床上廣泛用于治療胸中憋悶、心絞痛等心血管疾病。與傳統(tǒng)的片劑相比，該滴丸劑具有起效快、用量低、不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已被定為全國中醫(yī)醫(yī)院急診必備成藥[1]。有關(guān)研究表明，丹參的活性成分主要為脂溶性的二萜醌類和水溶性的丹參酚酸類物質(zhì)：脂溶性的二萜醌類物質(zhì)具有擴(kuò)張冠狀動脈、提高冠脈血流、保護(hù)心肌及廣譜抑菌作用；丹參酚酸類物質(zhì)則具有抑制血小板聚集、抗血栓形成、抗氧化和保護(hù)心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞等作用[2，3]。三七的主要活性成分是皂苷類物質(zhì)，后者具有抗血栓形成、擴(kuò)張血管和保護(hù)心肌等作用[4]。因此，對丹參和三七中的多種活性成分進(jìn)行同時含量測定才可全面控制復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量[5～7]。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1200系列高效液相色譜儀（美國Agilent有限公司），含G1379B自動脫氣機(jī)、G1376A四元高效液相泵和G1365B多波長檢測器。

1.2 試藥

原兒茶醛、丹參素、丹酚酸B、丹參酮IIA、三七皂苷R1以及人參皂苷Rg1和Rb1（均由中國藥品生物制品檢定所提供）；復(fù)方丹參滴丸（購自天津天士力聯(lián)合制藥有限公司，批號100721、100722和100723）；乙腈、甲醇（均為色譜純，購自Merck公司）；超純水（由實(shí)驗(yàn)室Milli Q自制，美國Millipore有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，大連依利特公司）。流動相A為乙腈、B為甲醇、C為0.1%磷酸溶液，梯度洗脫：0～10 min，3% A，6% B；11～15 min，3%～7% A，6%～12% B；16～30 min，7%～9% A，12%～15% B；31～50 min，9%～32% A，15%～25% B；51～70 min，32%～35% A，25%～50% B。柱溫35 ℃；檢測波長為205、270和285 nm。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備

精密稱定各對照品適量，以75%甲醇溶液定容，制成對照品儲備液。精密量取各儲備液適量，置25 mL容量瓶中，以含0.5%醋酸的75%甲醇溶液（v/v）定容即得（各對照品最終濃度分別為：丹參素，11.50 μg/mL；原兒茶醛，1.561 μg/mL；三七皂苷R1，12.27 μg/mL；人參皂苷Rg1，11.01 μg/mL；丹酚酸B，9.770 μg/mL；人參皂苷Rb1，25.61 μg/mL；丹參酮IIA，0.017 01 μg/mL）。

2.2.2 供試品溶液制備

取復(fù)方丹參滴丸50丸，研細(xì)后精密稱取適量（約合10丸），置50 mL容量瓶中，加入甲醇20 mL，超聲波處理30 min，放冷至室溫，以甲醇定容。12 000 r/min離心機(jī)離心處理10 min后，取上清液即得。

2.3 線性范圍

按照上述色譜條件，以自動進(jìn)樣器分別進(jìn)樣對照品溶液1、2、4、8、25和50 μL，記錄色譜圖（圖1）。分別以各對照品的含量為橫坐標(biāo)、相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算線性回歸方程（表1）。

2.4 精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

按照上述色譜條件，取供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，以峰面積計(jì)算7個成分日內(nèi)精密度和重現(xiàn)性。連續(xù)分析7 d，以峰面積計(jì)算7個成分的日間精密度；分別于0、1、2、4、8、12和24 h進(jìn)行測定，計(jì)算7個成分的穩(wěn)定性（表2）。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取已知含量的復(fù)方丹參滴丸6份，分別加入7個對照品適量，按照上述色譜條件分析，得7個成分的加樣回收率（表3）。

2.6 樣品測定

取3個批號的復(fù)方丹參滴丸，按照上述色譜條件，進(jìn)樣20 μL分析，結(jié)果如下（表4）。

3 討論

丹參素和原兒茶醛的結(jié)構(gòu)中都含有鄰二酚羥基，易被氧化而造成測定含量偏低，查閱文獻(xiàn)[8， 9]發(fā)現(xiàn)不同濃度的甲醇-水溶液也會使這兩者的測定含量有所降低。作者通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，加入適量的酸能抑制丹參素和原兒茶醛氧化，故在對照品溶液配制時采用了含0.5%醋酸的75%甲醇溶液（v/v）。

復(fù)方丹參滴丸為薄膜包衣，單純利用甲醇超聲提取時，甲醇難以進(jìn)入滴丸。所以，應(yīng)事先對滴丸進(jìn)行研磨，以保證甲醇能將其中的目標(biāo)成分充分提取。

本文測定的7個活性成分，由于各自的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)不同，故特征紫外吸收波長有一定的區(qū)別，如使用單一波長測定將會造成較大的誤差。因此，本文采用了多波長檢測器，能同時進(jìn)行多個波長的含量測定。該方法簡單，精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性較好，且同時測定了復(fù)方丹參滴丸中的多個活性成分，適于全面評價復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量。

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（收稿日期：2011-06-07）