秦新英,申勇

(河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,河北保定 071002)

杜鵑蘭Crem astra appendiculata化學(xué)成分的分離

秦新英,申勇

(河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,河北保定 071002)

采用硅膠、凝膠柱色譜及 HPLC對(duì)杜鵑蘭(Cremastra appendiculata)的干燥假磷莖——山慈菇進(jìn)行化學(xué)分離,根據(jù)化合物波譜數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu).結(jié)果表明,從山慈菇乙醇提取物乙酸乙酯萃取部分中分離得到4個(gè)化合物,分別為7-羥基-2,4-二甲氧基菲(7-hydroxy-2,4-dimethoxyphenanthrene,Ⅰ),24-甲基環(huán)菠蘿蜜醇(cyclolaudanol,Ⅱ),N-(N-苯甲?；?L-苯丙氨酰基)-O-乙?；?L-苯丙氨醇(aurantiamide acetate,Ⅲ),1-(4-羥芐基)-2,7-二羥基-4甲氧基菲(1-(p-hydroxybenzyl)-2,7-dihydroxy-4-methoxyphe-nanthrene,Ⅳ),4個(gè)化合物均為首次從該種植物中分離得到.

山慈菇;杜娟蘭;化學(xué)成分

杜娟蘭屬于蘭科,分布于我國(guó)陜西、四川、甘肅、云南等省.山慈菇系蘭科植物獨(dú)蒜蘭Pleione bu lbocodiodes(Franch.)Rofe、云南獨(dú)蒜蘭P.yunnanensisRolfe、杜鵑蘭Crem astra appendiculata(D.Don)Makino的干燥假磷莖,被中華人民共和國(guó)藥典目錄收載為常用中藥.據(jù)史料記載山慈菇化學(xué)成分臨床上具有清熱解毒,化痰散結(jié)等功效,可用來(lái)治療肝病、乳腺癌、食道癌等多種腫瘤疾病.最近十幾年,國(guó)內(nèi)外對(duì)獨(dú)蒜蘭P.bu lbocodiodes的化學(xué)成分研究報(bào)道逐漸增多,報(bào)道了從中分離得到的包括木脂素類、黃烷醇類、二氫菲類、聯(lián)芐類、二芐醚衍生物等近30個(gè)化合物[1-8].但對(duì)杜鵑蘭C.appendiculata的化學(xué)成分及生物活性的研究報(bào)道較少,僅有一項(xiàng)日本專利中報(bào)道了2個(gè)化合物,具有顯著降壓活性,分別命名為cremastosineⅠ和Ⅱ[9];此外還有從該植物中分離得到一個(gè)生物堿cremastrine,實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有抑制氘代N-甲基東莨菪堿對(duì)毒蕈堿 M3受體的鍵合作用[10].張金超等[11]首次從山慈菇乙醇提取物乙酸乙酯萃取部分中分離得到4個(gè)化合物 ,5-hydroxymethylfurfural,3′,5′,3″-trihy-droxybibenzyl,3,3′-dihydroxy-2(p-hydroxybenzyl)-5-methoxybibenzyl,3′,5-dihydroxy-2-(p-hydroxybenzyl)-3-methoxybibenzyl.迄今為止,從杜鵑蘭中已分離得到包括菲類[12,15]、苷元[13]、生物堿[10]和黃烷酮類[14]在內(nèi)的20余個(gè)化合物,研究的空間還很廣泛.為了更加深入地探索和應(yīng)用中藥資源,尋找與其功能主治相對(duì)應(yīng)的化學(xué)有效成分,為其應(yīng)用提供科學(xué)準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù),作者對(duì)杜鵑蘭C.appendicu lata的干燥假磷莖進(jìn)行了分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定,從乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分分離得到4個(gè)化合物,分別為7-羥基-2,4-二甲氧基菲(7-hydroxy-2,4-dimethoxyphenanthrene,Ⅰ),24-甲基環(huán)菠蘿蜜醇(cyclolaudanol,Ⅱ),N-(N-苯甲?；?L-苯丙氨?；?-O-乙?；?L-苯丙氨醇(aurantiamide acetate,Ⅲ),1-(4-羥芐基)-2,7-二羥基-4甲氧基菲(1-(p-hydroxybenzyl)-2,7-dihydroxy-4-methoxyphe-nanthrene,Ⅳ),其結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1.4個(gè)化合物均為首次從該種植物中分離得到.

圖1 化合物結(jié)構(gòu)Fig.1 Structure of compounds

1 儀器與材料

Bruker AV-400 NM R型核磁共振儀;Thermo Finnigan-LCQ型質(zhì)譜儀;FTIR 8400型紅外光譜儀(KBr壓片);H ITACH IU-2800型紫外光譜儀;X-5A型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(溫度未校正);日本 YMC公司YMC-Pack C18柱(250 mm×10 mm,5μm).

杜娟蘭塊莖,2008年購(gòu)自廣東省廣州市中藥材市場(chǎng);葡聚糖凝膠 (Sephadex LH-20)購(gòu)自保定市華欣試劑儀器有限公司,為Pharmacia公司產(chǎn)品;層析用硅膠(41.5～75μm),購(gòu)自保定市華欣試劑儀器有限公司,為青島海洋化工廠產(chǎn)品.化學(xué)試劑為分析純.

2 化合物的提取與分離

取杜娟蘭C.appendicu lata的干燥假磷莖9.5 kg,研磨粉碎后用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇回流提取1 h.回收合并提取液,60℃減壓濃縮得深棕色干浸膏(300 g),在水中懸浮規(guī)定時(shí)間后,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到各部位的萃取物.石油醚、乙酸乙酯萃取物(82.4 g)與柱層析硅膠(41.5～75μm)拌樣進(jìn)行硅膠柱層析,用石油醚-乙酸乙酯(0～100%)梯度洗脫,經(jīng)硅膠 TLC分析合并相同組分,共合并15個(gè)部分.第6部分經(jīng)硅膠柱層析,V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=5∶1進(jìn)行洗脫得Ⅰ的粗品,再經(jīng) Sephadex LH-20層析(甲醇洗脫)純化得到化合物Ⅰ,第3部分經(jīng)過(guò) TLC(V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=10∶1)洗脫后經(jīng)Sephadex LH-20反復(fù)柱層析得Ⅱ的粗品,再經(jīng)V(氯仿)∶V(甲醇)=1∶1洗脫得到化合物Ⅱ.第9部分經(jīng)過(guò)硅膠柱層析,V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=4∶1洗脫后得到a1,a2,a3 3個(gè)成分,成分a3經(jīng)過(guò)Sephadex LH-20層析(甲醇洗脫)純化得到Ⅲ.第11部分經(jīng)硅膠柱層析,V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=3∶1洗脫得粗品,經(jīng)Sephadex L H-20柱純化(甲醇洗脫)得化合物Ⅳ,通過(guò)1H NM R,13C NM R,H MQC,H MBC確證其結(jié)構(gòu),并對(duì)文獻(xiàn)中未歸屬的13C NMR數(shù)據(jù)進(jìn)行準(zhǔn)確歸屬.

3 化合物的鑒定

[1]L IB,YAMA KIM,TA KAGIS.Stilbenoids fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1996,42：853-856.

[2]L IB,YAMA KIM,TA KAGIS.Flavan-3-ols and Dihydrophenanthropyrans fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1998,47：1125-1129.

[3]L IB,YAMA KIM,TA KAGIS.Stilbenoids fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1996,42：853-856.

[4]L IB,YAMA KIM,TA KAGIS.Lignans and a bichroman fromPleione Bu lbocodioides[J].Phy tochem istry,1997,44：341-343

[5]L IB,MASU KAWA N,YAMA KIM,et al.Two bibenzyl glucosides fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1997,44：1565-1567.

[6]L IB,YAMA KIM,TA KAGIS.Flavan-3-ols and Dihydrophenanthropyrans fromPleione Bu lbocodioides[J].Phy tochem istry,1998,47：1125-1129.

[7]L IB,MASUKAWA N,YAMAKIM,et al.A polyphenol and two bibenzyls fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1998,47：1637-1640.

[8]L IB,MASUKAWA N,YAMA KIM,et al.Four stilbenoids fromPleione Bulbocodioides[J].Phytochem istry,1998,48：327-331.

[9]Fujisawa Pharmaceutical Co.,L td.Antihypertensive cremastosineⅠandⅡisolation.Jpn.Kokai Tokkyo Koho JP 82 35,518(Cl.A 61K35/78),26 Feb 1982

[10]YOSH ITA KA I,H IKARU N,TAMOTSU F,et al.Cremastrine,a Pyrrolizidine Alkaloid fromCremastra appendiculata[J].Journal of Natural Products,2005,68：572-573.

[11]張金超,申勇,朱國(guó)元,等.杜鵑蘭Cremastra appendiculata化學(xué)成分研究[J],河北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2007,27(3)：262-264

[12]薛震,李帥,王素娟,等.山慈菇Cremastra appendiculata化學(xué)成分[J].中國(guó)中藥雜志,2005,30(7)：511-513.

[13]夏文賓,薛震,李帥,等.杜鵑蘭化學(xué)成分及腫瘤細(xì)胞毒活性研究[J].中國(guó)中藥雜志,2005,30(23)：1827-1830.

[14]SH IM J S,KIM J H,LEEJ Y,et al.Anti-angiogenic activity of a homoisoflavanone fromcrem astra appendiculata[J].Planta Medica,2004,70(2)：171-173.

[15]XUE Zhen,L IShuai,WANG Sujuan,et al.Mono-,Bi-,Triphenanthrenes from the TubersofCrem astra appendiculata[J].Journal of Natural Products,2006,69：907-91

[16]何菱,周文,W DAV ID NES,等.甾體甲基化轉(zhuǎn)移酶的研究 [J].華西藥學(xué)雜志,2000,15(5)：331-334.

[17]梁僑麗,閔知大,成亮.地膽草中的兩個(gè)寡肽 [J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2002,33(3)：178-180.

[18]MASAE Y,L IB,KEIKO I,et al.Benzylphenanthrenes from Bletilla striata[J].Phytochemistry,1990,29：2285-2287.

Separation of Chem ical Constituents from Cremastra appendiculata

QIN Xin-ying,SHEN Yong
(College of Chem istry and Environmental Science,Hebei University,Baoding 071002,China)

Compoundswere separated by HPLC or column chromatography w ith silica gel,and Sephadex LH-20,and identified by spectral analysis respectively.The results showed that four compoundswere isolated from the ethanol extract of the tubers ofCrem astra appendiculata.Their structures w ere determined as 7-hydroxy-2,4-dimethoxyphenanthrene(Ⅰ),cyclolaudanol(Ⅱ),aurantiamide acetate(Ⅲ)and 1-(p-hydroxybenzyl)-2,7-dihydroxy-4-methoxyphe-nanthrene(Ⅳ).Four compounds w ere isolated from tubers ofCrem astra append iculatafor the first time.

Shancigu;Cremastra appendiculata;chem ical constituents

O 621.4

A

1000-1565(2011)04-0393-04

2010-10-15

河北省科技廳資助項(xiàng)目(10967126D);河北省教育廳基金資助項(xiàng)目(2008307)

秦新英(1978-),男,河北邯鄲人,河北大學(xué)講師,主要從事化學(xué)分析研究.

E-mail：qinxy@hbu.edu.cn

梁俊紅)