張春芳

(丹陽(yáng)市第二人民醫(yī)院,江蘇丹陽(yáng) 212300)

血液當(dāng)中的葉酸水平比較低的原因很多,與葉酸缺乏巨幼細(xì)胞貧血有關(guān)系,與胎兒神經(jīng)管的缺陷有關(guān)系,可以影響血管的功能,增加卒中的危險(xiǎn),所以血液當(dāng)中葉酸水平的檢測(cè)應(yīng)受到高度重視。本文主要用微生物改良法來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞葉酸。

1 資料與方法

1.1 一般資料

測(cè)量液:2.40g培養(yǎng)基,0.02g氯霉素,0.11gVC,0.11mL Tween-80,100mL去離子水進(jìn)行配置,每單位5mL進(jìn)行分裝。

保養(yǎng)液:在每升測(cè)量液當(dāng)中添加10mL的標(biāo)準(zhǔn)葉酸,然后每單位5mL分裝保存到無(wú)菌帶塞試管中,在-20℃的環(huán)境中可以保存1年(標(biāo)準(zhǔn)的葉酸濃度為10ng/mL)。

菌株的制備:耐氯霉素乳酸菌凍干菌株。把凍干的菌株懸浮在5mL保養(yǎng)液上面,在溫度為36℃的環(huán)境下孵育18h,然后取一滴混勻的液體當(dāng)中加入5mL保養(yǎng)液,在36℃的環(huán)境當(dāng)中孵育18h以后,取0.5mL加入 5mL的保養(yǎng)液,在36℃的環(huán)境下孵育6h后用生理鹽水清洗5次,然后用5mL生理鹽水懸浮。

經(jīng)過(guò)測(cè)定樣本得到:高值質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)為2.3ng/mL,低值質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)為1.8ng/mL。分裝以后保存在-70℃的環(huán)境當(dāng)中,要保證質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)只凍融一次?；加胁煌膊〉幕颊?0例以及健康人員25例,年齡2～39歲。所有的患者都需要空腹,采取3～4mL的肘靜脈血,放在干燥管內(nèi),按照1∶10的比例在1%的VC液當(dāng)中稀釋,然后貯存在-20℃的環(huán)境當(dāng)中。

1.2 方法

把試管放在36℃的環(huán)境下孵育18h后,用721分光光度計(jì)比濁。以葉酸濃度為橫軸,光密度值為縱軸作曲線。試管1以及2的OD值要先減去相同濃度空白對(duì)照管的OD值,然后查這個(gè)試管的葉酸值,所以標(biāo)本的VC血RCF(ng/mL)就是(試管1葉酸值×0.04+試管2葉酸值×0.02)/2。標(biāo)本的紅細(xì)胞葉酸值=[(VC血RCF×10)/紅細(xì)胞壓積]ng/mL。

2 結(jié)果

取高值以及低值的質(zhì)控血清,進(jìn)行20次的平行測(cè)定,可以得到高值血清的批內(nèi)CV=3.5%,低值血清的批內(nèi)CV=2.3%。連續(xù)測(cè)定20天,然后可以得到高值血清的批間CV=7.4%,低值血清的批間CV=5.2%。健康人員的測(cè)定結(jié)果表明紅細(xì)胞葉酸的正常參考值為(585±70)ng/mL。

3 討論

有兩種方法可以測(cè)定葉酸,分別是微生物改良法以及競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合方法。后者的操作很簡(jiǎn)單,但是價(jià)格很昂貴,我國(guó)目前大部分用它來(lái)測(cè)定血清的葉酸。當(dāng)肝功能以及腎功能受到損害的時(shí)候,葉酸是可以聚合的,這種聚合體用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的方法不能測(cè)定,但是微生物改良法可以測(cè)定,所以用微生物改良法能夠滿足測(cè)定肝功能以及腎功能受損患者的葉酸值。這種測(cè)定方法是很經(jīng)典的方法,而且用保養(yǎng)液可以讓菌株長(zhǎng)期保存下去,如果保存過(guò)程當(dāng)中菌株死亡,還可以購(gòu)買(mǎi)新的材料重建該實(shí)驗(yàn),不需要購(gòu)買(mǎi)特殊的儀器,適用于大批量的測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性很好,適合在臨床上推廣使用。

[1]皇甫照,王毓明,鄭家駒.96孔板微生物法微量測(cè)定血漿和紅細(xì)胞內(nèi)葉酸含量[J].衛(wèi)生研究,2003(01):83-85.

[2]郝玲,鄭俊池,田熠華,等.血漿葉酸兩種常用檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果的比較[J].北京大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2004(02):45-46.

[3]楊波,冉家彥.應(yīng)用微生物改良法測(cè)定紅細(xì)胞葉酸的研究[J].長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005(04):63-64.

[4]周林峰,賀愛(ài)軍,周英.宜昌市2005—2007年出生缺陷監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué),2009(06):25-26.