梁金鐘， 王風(fēng)青

(哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院/黑龍江省普通高等學(xué)校食品科學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱 150076)

微生物發(fā)酵法合成高分子聚合物γ－PGA的研究

梁金鐘， 王風(fēng)青

(哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院/黑龍江省普通高等學(xué)校食品科學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱 150076)

以一株γ－聚谷氨酸高產(chǎn)菌枯草芽孢桿菌B－115為實(shí)驗(yàn)菌株，分別考察碳源、氮源種類及濃度、前體物添加量、生長(zhǎng)因子和發(fā)酵條件對(duì)γ－聚谷氨酸產(chǎn)率的影響.優(yōu)化結(jié)果顯示:碳源是6.5%的玉米糖化液，氮源是0.4%的普通蛋白胨，前體物谷氨酸鈉的添加量為4%，生長(zhǎng)因子種類及添加量分別為0.15%硫酸鎂、0.006%硫酸錳、0.8%磷酸二氫鉀、1.0%氯化鈉、0.03%氯化鈣;發(fā)酵條件為初始pH值6.5，接種量2%，裝液量50 mL/250 mL，150 r/min，37℃培養(yǎng)84 h;γ－聚谷氨酸的產(chǎn)率可從57.85 g/L提高到68.30 g/L.

γ－聚谷氨酸;培養(yǎng)基;培養(yǎng)條件;高分子聚合物

γ－聚谷氨酸［poly γ-glutamic acid，γ-PGA］是由微生物代謝合成并分泌到細(xì)胞外的一種水溶性高分子物質(zhì)，這種陰離子物質(zhì)是由L－谷氨酸和D－谷氨酸單體之間通過(guò)酰胺鍵結(jié)合而成的同聚酰胺［1］.γ－PGA具有增稠、乳化、保濕、絮凝、粘合，極佳的成膜性、成纖維性、阻氧性、可塑性和可降解性等獨(dú)特的理化和生物學(xué)特性，因此可廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域［2］，例如:藥物緩釋劑［3］、沙地的保水劑［4－5］、高吸水劑［6－7］、食品用水凝膠［8］、粘稠劑［9］以及高強(qiáng)纖維等［10］，特別是近年來(lái)隨著對(duì)γ－PGA的深入研究，γ－PGA作為一種高分子生物制品，愈來(lái)愈顯現(xiàn)出廣闊的研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景.

1 材料與方法

1.1 菌種

枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)B－115(哈爾濱商業(yè)大學(xué)發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)室保藏).

1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

1.2.1 斜面培養(yǎng)基

蛋白胨10 g/L，牛肉膏 3 g/L，NaCl 5 g/L，瓊脂20 g/L，pH值7.2～7.4.將現(xiàn)有斜面菌種活化，37℃培養(yǎng)24 h.

1.2.2 種子培養(yǎng)基

斜面培養(yǎng)基加2%葡萄糖，不加瓊脂.種子培養(yǎng):250 mL三角瓶裝液量50 mL，溫度37℃，轉(zhuǎn)速150 r/min，置于搖床上培養(yǎng)18 h.

1.2.3 基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基

還原糖 5.655%(玉米糖化液)，谷氨酸鈉5.800%，蛋白胨0.500%，KH2PO40.400%，MgSO40.125%，NaCl1.200%，MnSO40.008%，CaCl20.042%.搖瓶培養(yǎng):接種量2%，250 mL三角瓶裝液量為50 mL，轉(zhuǎn)速150 r/min，溫度37℃，培養(yǎng)48 h.

1.3 玉米糖化液的制備

300 g市售玉米粉加水1 000 mL，加入1.05 g無(wú)水CaCl2煮沸，調(diào)節(jié)pH值為6.7～7.0，再加入α－耐高溫淀粉酶(120 U/g原料)，迅速降溫80～85℃，保溫15～20 min，繼續(xù)降溫至58～60℃，調(diào)節(jié)pH值為4.5，加糖化酶(150 U/g原料)，60℃保溫4 h后，再加熱煮沸10 min，過(guò)濾除渣，測(cè)定糖化液還原糖濃度，低溫保存?zhèn)溆?

1.4 分析方法

1.4.1 γ－PGA產(chǎn)率的測(cè)定

將發(fā)酵液稀釋后(發(fā)酵液∶水=1∶1)于9 000 r/min離心15 min除去菌體，取上清液10 mL，加入25 mL的無(wú)水乙醇，劇烈搖晃得到團(tuán)狀物，將其轉(zhuǎn)入稱量瓶，置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中105～110℃下烘2～2.5 h，得到黃色塊狀粗樣品，并稱重.

1.4.2 pH值的測(cè)定

PHS－3C型pH計(jì).

1.4.3 粘度的測(cè)定

采用DNJ－5S型數(shù)字式粘度計(jì)，25℃時(shí)二號(hào)轉(zhuǎn)子測(cè)定.

1.4.4 還原糖的測(cè)定

直接滴定法［11］.

1.4.5 谷氨酸及葡萄糖的測(cè)定

采用SBA－40D型生物傳感分析儀(山東省科學(xué)院生物研究所)測(cè)定.

2 結(jié)果與討論

2.1 培養(yǎng)基優(yōu)化

2.1.1 碳源及其濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響

圖1為碳源種類和濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響結(jié)果.分別以1%的蔗糖、葡萄糖、麥芽糖、乳糖、果糖、玉米糖化液、糊精、檸檬糖為碳源，在培養(yǎng)基的其他組分固定情況下進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖1(a).由圖1(a)可知，碳源中以玉米糖化液的發(fā)酵效果最好，產(chǎn)率最高.玉米糖化液中除了葡萄糖，還有木糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、乙酸及少量糠醛等物質(zhì)，它優(yōu)于其它單一的碳源，可能就是因?yàn)樗撕芯N生長(zhǎng)所必需的碳源外還有其他微量元素和生長(zhǎng)因子，其有利于菌種生長(zhǎng)或?qū)酃劝彼岷铣擅傅幕钚杂兴岣?

圖1 碳源種類和濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.1 Effect of carbon source on γ-PGA synthesis

以玉米糖化液為碳源發(fā)酵，如圖1(b)，由圖1(b)可知，玉米糖化液濃度為6.5%時(shí)γ－PGA的產(chǎn)率最高.

2.1.2 氮源及其濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響

氮源對(duì)微生物的生長(zhǎng)和目標(biāo)產(chǎn)物的積累有重要的影響，因此合適的氮源對(duì)于γ－PGA的發(fā)酵生產(chǎn)具有重要作用.分別選取硫酸銨、氯化銨、酵母粉、牛肉粉及各種蛋白胨作為氮源，在其他條件不變情況下進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖2.由圖2可知，以蛋白胨作為氮源發(fā)酵效果最好，產(chǎn)率最高，說(shuō)明本菌種能很好地利用有機(jī)氮源蛋白胨作為優(yōu)化氮源.

以普通蛋白胨為氮源，選擇不同濃度的普通蛋白胨進(jìn)行發(fā)酵，結(jié)果如圖3.由圖3可知，當(dāng)普通蛋白胨濃度為0.4%時(shí)產(chǎn)率最高，而且過(guò)多的氮源不利于聚谷氨酸的合成.此外，當(dāng)普通蛋白胨濃度為0時(shí)，也有產(chǎn)物合成，說(shuō)明普通蛋白胨不是發(fā)酵過(guò)程中唯一所需的氮源，綜合考慮，選擇氮源的添加量是0.4%的普通蛋白胨.

圖2 氮源對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.2 Effect of nitrogen source on γ-PGA syntheis

圖3 普通蛋白胨濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.3 Effect of concentration of nitrogen source on γ-PGA synthesis

2.1.3 前體物對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響

其他條件不變的情況下，令谷氨酸鈉濃度為:0%，2%，4%，6%，8%，10%，結(jié)果如圖4.由圖4可知，當(dāng)谷氨酸鈉濃度為4%時(shí)發(fā)酵液黏度最大，當(dāng)不添加前體物時(shí)沒(méi)有聚谷氨酸形成，說(shuō)明谷氨酸鈉是此菌發(fā)酵合成聚谷氨酸的必須物質(zhì).隨著谷氨酸鈉濃度的增大，粘度有所降低，但產(chǎn)率隨之上升，說(shuō)明過(guò)多的前體物使γ－PGA的分子量有所下降，要取得的高分子γ－PGA同時(shí)又比較經(jīng)濟(jì)，選擇添加4%的前體物.

圖4 前體物濃度對(duì)發(fā)酵效果的影響Fig.4 Effect of concentration of sodium glutamate on γ-PGA synthesis

2.1.4 鎂離子對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響

鎂離子能促進(jìn)碳源的分解，加速菌體能量代謝，有助于細(xì)胞有氧氧化，且適量的鎂離子有助于減少發(fā)酵后期產(chǎn)生的乳酸;同時(shí)鎂離子又是鈣離子和鉀離子進(jìn)出細(xì)胞所必須的，又是許多重要酶的激活劑［12］.

其他條件不變的情況下，改變MgSO4濃度，結(jié)果如圖5.由圖5可知，硫酸鎂濃度為0.15%時(shí)γ－PGA產(chǎn)率最大，其濃度小于或大于0.15%時(shí)，γ－PGA產(chǎn)率都有所下降，前者可能是由于鎂離子對(duì)γ－PGA合成酶激活不充分而使產(chǎn)率較低，后者則可能是高濃度的鎂離子對(duì)γ－PGA合成酶起到一定程度的抑制作用致使產(chǎn)率下降，因此選擇0.15%為硫酸鎂的優(yōu)化添加濃度.

圖5 鎂離子濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.5 Effect of concentration of Mg2+on γ-PGA synthesis

2.1.5 鈉離子對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響

其他條件不變的情況下，改變NaCl濃度，結(jié)果如圖6.由圖6可知，當(dāng)氯化鈉濃度為1.0%時(shí)產(chǎn)率最大，隨著濃度的繼續(xù)增大或降低，產(chǎn)率都有不同幅度的降低，考慮到實(shí)際生產(chǎn)的費(fèi)用問(wèn)題，因此選擇1.0%的氯化鈉為培養(yǎng)基的優(yōu)化添加量.

圖6 鈉離子濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.6 Effect of concentration of Na+on γ-PGA synthesis

2.1.6 錳離子對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響

微生物細(xì)胞內(nèi)的許多酶反應(yīng)中，二價(jià)錳離子都是激活劑，其激活作用可部分的替代鎂離子，錳離子和鎂離子共同促進(jìn)激活酶的反應(yīng)，以彌補(bǔ)鎂離子的不足［13］.錳離子的濃度還控制著γ－PGA內(nèi)L－型谷氨酸和D－型谷氨酸的比例.錳離子濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響結(jié)果見(jiàn)圖7.由圖7可知，當(dāng)錳離子濃度為0.006%時(shí)，γ－PGA的產(chǎn)率最高，因此以0.006%的錳為優(yōu)選濃度.

2.1.7 鈣離子對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響

Ca2+存在于細(xì)胞中控制細(xì)胞的生理狀態(tài)，調(diào)節(jié)質(zhì)膜的通透性，維持細(xì)胞體內(nèi)的滲透壓.Ca2+也是一些酶的激活劑和部分酶系構(gòu)成的必要因子，并對(duì)一些陽(yáng)離子的毒性有拮抗作用［14］.Ca2+對(duì)聚谷氨酸產(chǎn)率的影響如圖8.由圖8可知，Ca2+濃度為0.03%時(shí)γ－PGA的產(chǎn)率最高.

圖7 錳離子濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.7 Effect of concentration of Mn2+on γ-PGA synthesis

圖8 鈣離子濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.8 Effect of concentration of Ca2+on γ-PGA synthesis

2.1.8 鉀離子對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響

鉀離子濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響結(jié)果見(jiàn)圖9.由圖9可知，γ－PGA的產(chǎn)率隨著鉀離子濃度的上升而上升，但發(fā)酵液的粘度在鉀離子的濃度為0.8%時(shí)達(dá)到最大，隨著濃度的增加產(chǎn)量繼續(xù)上升，但是黏度有所下降，可能是高濃度的磷酸鹽抑制了聚谷氨酸合成酶的活性，影響了產(chǎn)物的聚合度，即表現(xiàn)為粘度下降，因此選擇磷酸鹽濃度為0.8%.

圖9 鉀離子濃度對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.9 Effect of concentration of K+on γ-PGA synthesis

2.2 培養(yǎng)條件優(yōu)化

2.2.1 初始pH值對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響

考察初始 pH 值為 5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0和8.5時(shí)發(fā)酵產(chǎn)γ－PGA的情況，結(jié)果如圖10.培養(yǎng)基的PH值不同，將影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的離子化程度，繼而影響微生物細(xì)胞的運(yùn)輸機(jī)制，促進(jìn)或妨礙一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收;另外，pH值過(guò)高或過(guò)低常常影響微生物細(xì)胞中諸多與代謝有關(guān)的酶的活性，進(jìn)一步對(duì)微生物的生長(zhǎng)和物質(zhì)代謝產(chǎn)生較大的影響.由圖10可知，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值為6.5時(shí)，γ－PGA的產(chǎn)率最高，因此在發(fā)酵前調(diào)pH值到6.5有利于產(chǎn)物的合成.

圖10 初始pH對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.10 Effect of initial pH on γ-PGA synthesis

2.2.2 接種量對(duì)γ－PGA合成的影響

培養(yǎng)了16～24 h的種子液，分別以1%，2%，3%，4%，5%，6%，7%，8%的接種量接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在發(fā)酵48 h后檢測(cè)γ－PGA的產(chǎn)量，結(jié)果如圖11所示:當(dāng)接種量為2%時(shí)，產(chǎn)量最高，隨著接種量的增加，產(chǎn)率隨之下降.不同接種量意味著不同的初始菌體濃度，它影響發(fā)酵結(jié)束的時(shí)間和γ－PGA的產(chǎn)量，它的大小影響細(xì)胞生長(zhǎng)遲滯期的長(zhǎng)短以及細(xì)胞倍增繁殖的速度.對(duì)發(fā)酵生產(chǎn)γ－PGA的過(guò)程來(lái)說(shuō)，菌體只有在一定濃度范圍內(nèi)才能使γ－PGA維持比較滿意的產(chǎn)量，太低或太高的菌體濃度都不利于γ－PGA產(chǎn)量的提高.因此優(yōu)化接種量可認(rèn)定為2%.

圖11 接種量對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.11 Effect of inoculation amount on γ-PGA synthesis

2.2.3 溫度對(duì)γ－PGA合成的影響

培養(yǎng)溫度直接影響菌體的生長(zhǎng)速率和代謝途徑，以及菌種內(nèi)合成聚合物的酶活性，從而影響產(chǎn)物的合成.在轉(zhuǎn)速為150 r/min，發(fā)酵時(shí)間為48 h，裝液量50 mL的條件下，通過(guò)控制不同的培養(yǎng)溫度:31，33，35，37，39 ℃，γ－PGA 的產(chǎn)量隨溫度的變化如圖12所示:γ－PGA產(chǎn)率在37℃最大.

圖12 溫度對(duì)發(fā)酵效果的影響Fig.12 Effect of temperature on γ-PGA synthesis

2.2.4 溶氧對(duì)γ－PGA合成的影響

溶氧在好氧微生物發(fā)酵過(guò)程中是一個(gè)重要因素，產(chǎn)γ－PGA的枯草芽孢桿菌是好氧菌，而在γ－PGA這種高黏度發(fā)酵體系中尤為突出.聚谷氨酸在發(fā)酵的初始階段，體系的黏度很低，表現(xiàn)為低黏度牛頓體系，隨著聚合物的不斷積累，發(fā)酵體系的黏度不斷增加，特別在發(fā)酵后期，發(fā)酵體系成為高黏度非牛頓體系，影響了氧的傳遞和料液的氧密度，從而影響了菌體產(chǎn)γ－PGA的量.分別以搖瓶裝液量和搖床轉(zhuǎn)速來(lái)考察溶氧對(duì)枯草芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)γ－PGA的影響.用 250 mL的三角瓶，分別以 30，50，70，90，110 mL的裝液量進(jìn)行發(fā)酵，結(jié)果如圖13所示:當(dāng)裝液量為50 mL/250 mL時(shí)發(fā)酵產(chǎn)率最高.

圖13 裝液量對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.13 Effect of volume on γ-PGA synthesis

再以 50 mL 的裝液量，以 100，150，200，250 r/min的不同轉(zhuǎn)速進(jìn)行發(fā)酵，結(jié)果如圖14所示:當(dāng)轉(zhuǎn)速在150 r/min較好，因其他轉(zhuǎn)速下發(fā)酵產(chǎn)率相對(duì)較低，但其發(fā)酵液粘度最高且提取產(chǎn)物彈性較好，在較低耗能下獲得較高分子量產(chǎn)物，因此綜合考慮選150 r/min為佳.

2.2.5 時(shí)間對(duì)γ－PGA合成的影響

γ－PGA是非生長(zhǎng)偶聯(lián)型產(chǎn)物，并不隨菌體量同步增加，而是在細(xì)胞進(jìn)入穩(wěn)定期后聚合物才大量合成.圖15為發(fā)酵時(shí)間對(duì)γ－PGA產(chǎn)率影響結(jié)果.由圖15可知，隨著發(fā)酵時(shí)間的增加，γ－PGA的產(chǎn)量也隨之增加，特別是當(dāng)發(fā)酵時(shí)間由84 h延長(zhǎng)到96 h時(shí)，其產(chǎn)量也增加很多，但同時(shí)發(fā)酵液的顏色也加深很多，可能是菌體自溶產(chǎn)生某些物質(zhì)造成的，這樣不利于γ－PGA的提取純化，經(jīng)綜合考慮，發(fā)酵時(shí)間以選取84 h為宜.

圖14 轉(zhuǎn)速對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.14 Effect of rotational speed on γ-PGA synthesis

圖15 發(fā)酵時(shí)間對(duì)γ－PGA產(chǎn)率的影響Fig.15 Effect of fermentation time on γ-PGA synthesis

2.3 優(yōu)化前后發(fā)酵規(guī)律曲線

圖16為優(yōu)化前后γ－PGA產(chǎn)率對(duì)比結(jié)果.由圖16可知，優(yōu)化后γ－PGA的產(chǎn)率可高達(dá)68.30 g/L，比優(yōu)化前提高了10.45 g/L.

圖16 優(yōu)化前后γ－PGA代謝合成曲線Fig.16 Metabolism synthesis curve of γ-PGA optimize and optimized

3 結(jié)論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)，確定了枯草芽孢桿菌發(fā)酵合成γ－PGA的優(yōu)化培養(yǎng)基組成及培養(yǎng)條件:6.5%玉米糖化液、0.4%的普通蛋白胨、4%的前體物谷氨酸鈉、0.15%的硫酸鎂、0.006%硫酸錳、0.8%的磷酸二氫鉀、1.0%的氯化鈉、0.03%氯化鈣、初始pH值6.5、接種量2%、裝液量50 mL/250 mL、150 r/min、37 ℃培養(yǎng)84 h;優(yōu)化后γ－PGA的產(chǎn)率從57.85 g/L升高到68.30 g/L.

［1］Shih I L，Van Y T .The production of poly(γ-GlutamicAcid)from microorganism and its various applications［J］.Bioresource Technology，2001，79:207-225.

［2］施慶珊.γ－聚谷氨酸的微生物合成與應(yīng)用［J］.精細(xì)與專用化學(xué)品，2004，12(11):20-23.

［3］Kim K S，Kim T K，Graham N B .Contrilled releasebefabior of prodrugs based on the biodegradable poly(γglutamic acid)microspheres ［J］.Polymer Journal，1999，31:813-816.

［4］Choi H J，Kunioka M.Preparation conditions and swellinge-quilibria of hydrogel prepared by(γ-irradiation frommicrobial poly γ-glutamic acid) ［J］.Radiat Phys Chem，1995，46(2):175-179.

［5］Li C，Ke S，Wn Q P.Tumor irradiation enhances the tumor-specific distribution of poly(L-glutamic acid)-conjuga-tionpaclitaxel and its antitumor efficacy［J］.Clin Cancer Res，2000，16(7):2829-2834.

［6］Chio H J，Yang R，Kunioka M.Preparation conditions andswelling equilibria of hydrogel prepared by-irradiation from microbial poly(glutamic acid) ［J］.J Appl Polym Sci，1995，58:807-814.

［7］Kunioka M，F(xiàn)urusawa K.Poly(γ-glutamic acid)hydrog prepared from microbial poly(γ-glutamic acid) acd alkaced amine with water-soluble carnodiimide［J］.J Appl Polym Sci，1997，65:1889-1896 .

［8］Yasuyoshi A，Yuji F，Shuichi K.Health food with poly(γ-glutamic acid) as the chief ingredient:日 本，5095767A2［P］.1993-04-20.

［9］Konno A，Taguchi T，Yamaguchi T.Bakery products an noodles containing polyglutamic acid:US ，4888193［P］.1989.

［10］Yahata K，Sadanobu J，Endo T.Preparation of polybenz-γ-glutamic acid fiber［J］.Polym Prepr Jpn，1992，42:77.

［11］叢峰松.生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)［M］.上海:上海交通大學(xué)出版社，2005.

［12］陳三鳳，劉德虎.現(xiàn)代微生物遺傳學(xué)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2003:312.

［13］Ing-Lung Shih，Yi-TsongVan.The production of poly(γ-glutamic acid)from microorganisms and its various［J］.Bioresource Technology，2001，79(3):207-225.

［14］周德慶.微生物學(xué)教程［M］.北京:高等教育出版社，1996:104-106.

(責(zé)任編輯:葉紅波)

Biosynthesis of Macromolecular Polymers γ-PGA by Fermentation

LIANG Jin-zhong，WANG Feng-qing
(School of Food Engineering/Key Laboratory of Food Science and Engineering，Harbin University of Commerce，150076，China)

The fermentation media and culture conditions of Bacillus subtilis B-115 were optimized for producing poly γ-glutamic acid.The optimal fermentation conditions for poly γ-glutamic acid production were as follows:corn saccharification liquid 6.5%，peptone 0.4%，L-glutamate 4%，MgSO40.15%，MnSO40.006%，KH2PO40.8%，CaCl20.003%，NaCl 1%，inoculums level 2%，flask content 50 mL/250 mL，pH 6.5，temperatuer 37 ℃，rotation speed 150r·min－1，and fermentation time 84 h.Under the optimal conditions，the yield of γ-PGA was increased from 57.85 g/L to 68.3 g/L.

poly-γ-glutamic acid;media;culture conditions;macromolecular polymers

TS201.3

A

1671-1513(2011)01-0024-06

2010-09-23

黑龍江省“十一五”重大科技攻關(guān)項(xiàng)目(GA06B401－2).

梁金鐘，男，教授，主要從事微生物發(fā)酵方面的研究.