牛欣 ，李林 ，趙艦

（1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400716；2.重慶市疾病控制中心，重慶 400042）

高效液相色譜法檢測豆干中的尼泊金酯

牛欣1，李林1，趙艦2

（1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400716；2.重慶市疾病控制中心，重慶 400042）

建立用高效液相色譜—二極管陣列檢測器進(jìn)行豆干中尼泊金酯的檢測方法。豆干樣品經(jīng)過無水乙醇提取分離后，用0.45 μm濾膜過濾進(jìn)樣，外標(biāo)法定量。

高效液相色譜；豆干；尼泊金酯

尼泊金酯是國際上公認(rèn)的三大廣譜高效食品防腐劑之一，是一類穩(wěn)定、低毒、高效、安全的防腐劑，廣泛應(yīng)用于化妝品、醫(yī)藥、調(diào)味品、腌制品、醬制品、飲料、啤酒、黃酒以及果蔬保鮮等領(lǐng)域。在成品中的濃度一般小于0.05%[1]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，尼泊金酯具有類雌激素作用，對人體存在著一些潛在的危害，其安全性有待重新進(jìn)行評價(jià)[2-3]。

在食品中的尼泊金酯檢測過程中，因食品中的基質(zhì)較為復(fù)雜，用等度洗脫常會出峰較快，不易與雜質(zhì)分開，或者分析時(shí)間過長，影響了尼泊金酯檢測的準(zhǔn)確性和時(shí)效性[4]。本文擬在現(xiàn)有檢測方法的基礎(chǔ)上，采用甲醇－乙酸銨的梯度洗脫方式，建立一種快速而精確的檢測豆干中尼泊金酯的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

美國Agilent 1100高效液相色譜儀（帶DAD檢測器）：美國安捷倫公司生產(chǎn)；KQ-500 E型超聲波清洗器:昆山市超聲儀器有限公司；LC-800低速離心機(jī):科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司。

1.1.2 試劑

尼泊金甲酯（MP）、乙酯（EP）、丙酯（PP）、丁酯（BP）標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99.0%；無水乙醇：一級色譜純；甲醇：色譜純；乙酸銨：分析純；氯化鈉：分析純；超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 儀器條件

AgilentEclipseXDB-C18色譜柱（5μm，4.6×150nm），流動相為甲醇+0.02 mol/L的乙酸銨溶液，進(jìn)樣體積為20 μL，色譜柱溫為30℃，檢測波長254 nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制

分別稱取尼泊金甲酯、乙酯、丙酯、丁酯各100 mg，用無水乙醇溶解定容至100mL，此溶液濃度為1mg/mL。

1.2.3 使用標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別移取上述4種標(biāo)準(zhǔn)儲備液10 mL于100 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，此溶液濃度為100 μg/mL。

1.2.4 樣品處理

將樣品切碎，稱取1 g于離心管中，加入2 mL無水乙醇及少量氯化鈉，振搖5 min，置于超聲水浴鍋中提取10 min，然后離心8 min（4000 r/min)。離心完畢，將上清液移入10 mL的比色管中。重復(fù)上述操作2次，合并提取液，定容至刻度。搖勻，經(jīng)0.45 μm的濾膜過濾。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

采用甲醇+0.02 mol/L乙酸銨溶液作為流動相，經(jīng)過表1的梯度洗脫方式，可使4種物質(zhì)完全分離且峰形良好，出峰時(shí)間短，達(dá)到分析要求。檢測波長通常選擇在250 nm～260 nm之間，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)檢測波長為254 nm時(shí)，檢測器信號響應(yīng)值最高。

表1 梯度洗脫方式Table 1 Gradient elution method

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限

移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋，用超純水定容，配制成尼泊金酯混合標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度為0.5、1.0、4.0、10.0、40.0、100.0、200.0 μg/mL。在選用的色譜條件下，以峰面積對其質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，4種物質(zhì)的線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限見表2，標(biāo)準(zhǔn)譜圖見圖1。

表2 4種尼泊金酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果Table 2 The determination results of standard curve for 4 kinds of parabens

圖1 4種尼泊金酯標(biāo)準(zhǔn)色譜圖Fig.1 The standard chromatograms of 4 kinds of parabens

2.3 回收率

稱取1 g切碎的豆干樣品于離心管中，添加1 mL尼泊金酯使用標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)過1.2.4方法處理樣品，用1.2.1分析條件做回收率實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表3，表3顯示，回收率為99.17%～101.36%，說明準(zhǔn)確度良好。

表3 4種尼泊金酯的準(zhǔn)確度測定結(jié)果Table 3 The determination results of accuracy for 4 kinds of parabens

2.4 精密度

稱取6份豆干樣品，按1.2.4方法進(jìn)行處理，按1.2.1分析條件進(jìn)樣測定，結(jié)果見表4。

表4 4種尼泊金酯的精密度測定結(jié)果Table 4 The determination results of precision for 4 kinds of parabens

從表4可以看出，變異系數(shù)為0.50%～1.12%，說明精密度能滿足要求。

2.5 樣品測定

隨機(jī)抽取市售豆干樣品5種，用優(yōu)化的高效液相色譜法進(jìn)行檢測，樣品在13.5 min即檢測完畢。結(jié)果顯示，所有樣品均未添加上述4種尼泊金酯防腐劑。

3 結(jié)論

采用優(yōu)化的高效液相色譜檢測方法，用甲醇－乙酸銨洗脫，直接稀釋進(jìn)樣，樣品可在13.5 min之前出峰完畢，且分離效果良好。豆干中的其他添加劑，如糖精鈉、山梨酸鉀、苯甲酸鈉等，在尼泊金酯出峰之前即流出，不會干擾目標(biāo)檢測物的測定。實(shí)驗(yàn)證明，采用此方法檢測豆干中的尼泊金酯，處理過程簡單，檢測時(shí)間短，回收率高，精密度好，檢出限低，滿足實(shí)際檢測工作需要。

[1]陳建文，厲華明，周榮榮.食品中對羥基苯甲酸酯類的應(yīng)用現(xiàn)狀與檢測方法[J].中國釀造，2008，185(8)：4-5

[2]M G Soni，I G Carabin，G A Burdock.Safety assessment of esters of p-hydroxybenzoicacid （parabens）[J].Foodandchemicaltoxicology，2005，43(1)：985-1015

[3]Renata S，Tavares，F(xiàn)átima C，et al.Parabens in male infertility-Is there a mitochondrial connection[J].Reproductive toxicology，2009，27(1)：1-7

[4]龍朝陽，許秀敏.食品中4種常用尼泊金酯的高效液相色譜法測定[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2005，15(1)：66-67

Detection of Paraben in Dried Tofu by HPLC

NIU Xin1，LI Lin1，ZHAO Jian2
（1.College of Food Science，Southwest University，Chongqing 400716，China；2.Chongqing Center for Disease Prevention and Control，Chongqing 400042，China）

The detection method of Paraben in the dried tofu by HPLC-DAD is established.The dried tofu sample is filtered through 0.45 μm filterable membrane after extracted and separated by ethanol.Then quantitative analyzed by external standard method.The experiment proved that this method is pretty simple,practical and stable.

HPLC；dried tofu；paraben

牛欣（1986—），男（漢），碩士研究生，研究方向：食品質(zhì)量與安全。

2010-09-13