候丙波, 鄭麗玲, 緒廣林, 敖桂珍, 張玉鳳

(1. 蘇州大學 藥學院,江蘇 蘇州 215123; 2. 南京師范大學 生命科學院新藥研究中心,江蘇 南京 21009)

丹皮酚(2)是牡丹皮的主要有效成分之一，具有抗炎、抗菌、抗氧化等藥理活性[1]。研究表明，牡丹皮中還有多種2的類似物，這些苯乙酮類成分顯示出較強的抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗凝血活性及增加巨噬細胞吞噬細胞的活性[2,3]。去甲丹皮酚(1,亦稱雷瑣苯乙酮)也是牡丹皮提取的丹皮酚結(jié)構(gòu)類似物，目前未見其藥理活性研究報道。非甾體抗炎藥(NSAIDs)是全世界范圍內(nèi)處方量最大的藥物之一，但長期大劑量服用NSAIDs會引起許多不良反應，特別是消化道損傷。

在前期實驗篩選中發(fā)現(xiàn)2與NSAIDs的偶聯(lián)物抗炎活性較強。本文將臨床上常用的一些NSAIDs與1或2偶聯(lián)，期望偶聯(lián)物能增強其解熱鎮(zhèn)痛抗炎的療效，減少NSAIDs的羧基對消化道的直接刺激作用，或利用1的抗氧自由基作用減少胃潰瘍的產(chǎn)生；增加脂溶性，減少藥物在消化道的停留時間。

1分別與阿司匹林( Ⅰa),布洛芬( Ⅰb)和雙氯芬酸( Ⅰc)偶聯(lián)，合成了4個新的去甲丹皮酚衍生物(3a～3c， 4b, Scheme 1)；2分別與Ⅰa和Ⅰb偶聯(lián)，合成了兩個未見文獻報道的丹皮酚衍生物(5a和5b, Scheme 1),其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR, IR和HR-MS表征。二甲苯致小鼠耳腫脹試驗結(jié)果表明，3和5均有較強的抗炎活性，與陰性對照物羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)相比，表現(xiàn)出顯著性差異(P<0.01)。

Scheme 1

1 實驗部分

1．1 儀器與試劑

XT5型顯微熔點儀(溫度未經(jīng)校正);Varian UNTIY INOVA 400 MHz型核磁共振儀(CDCl3為溶劑,TMS為內(nèi)標)；Nicolet AVATAR 360FT-TR型紅外光譜儀(KBr壓片)；Micromass TOF-MS型質(zhì)譜儀。

Ⅰa, Sigma公司;1(淡橙色片狀結(jié)晶，產(chǎn)率72.75%， m.p.143.3 ℃～144.8 ℃)和2(白色針晶，產(chǎn)率86.20%， m.p.45.2 ℃～46.2 ℃)按文獻[4]方法制備；其余所用試劑均為市售化學純或分析純。

實驗用小鼠為昆明種，清潔級，東華大學醫(yī)學實驗動物中心，動物質(zhì)量合格證號：SCXK(蘇)20070003。

1．2 合成

(1) 合成1的衍生物(以3a為例)

在反應瓶中依次加入無水CH2Cl28 mL, 1 608 mg(4.0 mmol),二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC) 825 mg(4.0 mmol)和二甲氨基吡啶(DMAP)數(shù)粒,攪拌使其完全溶解；滴加Ⅰa720 mg(4.0 mmol)的CH2Cl2(2 mL)溶液，滴畢，于室溫反應10 min。過濾，濾液濃縮后經(jīng)柱層析[洗脫劑:V(60 ℃～90 ℃石油醚) ∶V(乙酸乙酯)=12 ∶1]分離得3a。

用類似方法合成3b,3c和4b。

(2) 合成2的衍生物(以5a為例)[5]

在反應瓶中依次加入干燥氯化亞砜2.92 mL(40.0 mmol), Ⅰa1.800 g(10.0 mmol)和一滴無水吡啶，攪拌下回流反應至無酸性氣體放出為止。減壓蒸去過量的氯化亞砜得淡黃色液體阿司匹林酰氯(Ⅱa)。

在反應瓶中加入Ⅱa的無水吡啶(4 mL)溶液，于0 ℃加入11.66 g(10.0 mmol)和DMAP數(shù)粒，攪拌下于室溫反應1 h。傾入冰水(15 mL)中，攪拌后靜置，傾去上部溶液，將下層黏稠物溶于乙醇，加入活性炭回流脫色，趁熱過濾，濾液冷卻析晶，過濾，濾餅干燥得淡黃色針狀晶體5a。

用類似方法合成5b。3～5的理化數(shù)據(jù)及表征結(jié)果分別見表1和表2。

表1 3～5的理化數(shù)據(jù)

表 2 3～5的表征數(shù)據(jù)

1．3 體外抗炎活性測定[6，7]

所有藥物均用0.5%CMC-Na配制成1.59×10-3mol·L-1的混懸液。Ⅰa給藥劑量200 mg·kg-1。每組10只小鼠，雌雄兼用，體重(20 ± 2) g，隨機分組，給藥前禁食12 h，自由飲水。灌胃給藥，給藥劑量按小鼠體重的0.02 mL·g-1的質(zhì)量濃度給藥。給藥1 h后，每只小鼠右耳涂二甲苯20 μL致炎，小鼠的左耳廓為空白對照。致炎1 h后處死小鼠，用直徑7 mm打孔器在雙耳對稱處打下耳片稱重。以右耳和左耳質(zhì)量差異度為指標，將對照組與給藥組進行統(tǒng)計學處理，計算抑制率。

2 結(jié)果與討論

2.1 合成

1的2-OH易與羰基形成分子內(nèi)氫鍵，反應活性較弱，而4-OH活性較強。因此，采用滴加Ⅰ溶液的方法，可減少2-OH成酯，提高產(chǎn)率。

Ⅰ羧基的反應活性不同，對反應時間和產(chǎn)率的影響也不同。Ⅰa與1在1 min即可發(fā)生反應，反應時間延長，副產(chǎn)物的個數(shù)及產(chǎn)量也增多，如Ⅰa的乙?；鶗撊?，加到1的羥基上，生成4-乙酰氧基-2-羥基-苯乙酮。所以只能反應10 min，否則得不到3a。Ⅰb與1反應需要30 min。時間延長，二酯副產(chǎn)物增多。Ⅰc與1成酯則需要2 h，除得到少量二酯外，還有一個副產(chǎn)物生成，為雙氯芬酸羧基與氨基發(fā)生自身縮合生成的內(nèi)酰胺。所以3的產(chǎn)率稍低。

表 3 3～5的抗炎活性*

*測試方法見1.3;aP<0.05vsCMC-Na;bP<0.01vsCMC-Na

2.2 抗炎活性

3～5對小鼠耳廓二甲苯致炎的抑制作用見表3。由表3可見，3～5的抗炎活性均強于陽性對照Ⅰa組和陰性對照CMC-Na組。其中3a,3b,5a和5b與CMC-Na相比，表現(xiàn)出明顯抗炎活性(P<0.01)。Ⅰa與1(或2)偶聯(lián)后，抑制率由41.5%增加到77.6%(或78.7%)，但兩者之間無顯著性差異。同樣，Ⅰb與1(或2)偶聯(lián)后，3b和5b抗炎結(jié)果與3a和5a相似。說明1(或2)與Ⅰa或Ⅰb偶聯(lián)，具有協(xié)同效應；從Ⅰa和Ⅰb來看，3和5的抗炎活性相似。但是如果1的兩個羥基均成酯(如4b)，其抗炎活性反而不如僅在其對位的羥基成酯(3b)，說明在1的結(jié)構(gòu)上，Ⅰb的含量也不是越多抗炎活性越強。

[1] 中國藥典[M].北京:化學工業(yè)出版社，2000.

[2] 郭齊，李貽奎，王志國，等. 丹皮酚藥理研究進展[J].中醫(yī)藥信息,2009,26(1):20-22.

[3] Masayuki Y, Toshio O, Atsuhiro K,etal. Bioactive constituents of chinese natural medicines[J].Chem Pharm Bull,2000,48(9):1327-1331.

[4] 汪秋安,張春香,麻秋娟. 7,3′-二甲氧基-4′,5′-次乙二氧基黃烷酮的合成[J].合成化學,2005,13(1):67-69.

[5] 潘顯道,費勤志,朱承根,等. 5個丹皮酚酯的合成和體外抗腫瘤活性研究[J].安徽醫(yī)藥,2004,8(1):16-18.

[6] 徐叔云,卞如濂,陳修. 藥理實驗方法學(第三版)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002.

[7] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局編. 新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編(藥學藥理學毒理學)[M].1993.