呂承哲，張全英，王蒙（1.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院，蘇州市15003；.蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院，蘇州市15004）

聚氯乙烯輸液器對左旋丁苯酞的吸附作用考察

呂承哲1＊，張全英2#，王蒙2（1.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院，蘇州市215003；2.蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院，蘇州市215004）

目的：考察左旋丁苯酞在聚氯乙烯（PVC）輸液器中的吸附情況。方法：用0.9%氯化鈉注射液與左旋丁苯酞注射液混合，制備成低、高濃度的左旋丁苯酞/氯化鈉注射液，模擬臨床靜脈滴注，流經(jīng)PVC輸液器，在120min內(nèi)不同時(shí)間段收集流出的樣品，用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法測定左旋丁苯酞濃度，并分別與流經(jīng)輸液器前（0min）的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：低、高濃度左旋丁苯酞/氯化鈉注射液流經(jīng)輸液器前、后濃度有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論：PVC輸液器對左旋丁苯酞有吸附作用，臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)考慮配備合適的輸液器。

左旋丁苯酞；聚氯乙烯輸液器；吸附；高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

丁苯酞又名芹菜甲素，是一種治療腦卒中的新藥，其通過影響花生四烯酸的代謝，減少后者誘導(dǎo)的血小板聚集作用，從而改善腦部缺血的癥狀[1]。其有左旋和右旋對映異構(gòu)體，其中左旋丁苯酞臨床應(yīng)用前景更好。

石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)（石家莊）有限公司首次研制開發(fā)了左旋丁苯酞注射液，目前該制劑在國內(nèi)外尚未見其臨床應(yīng)用文獻(xiàn)報(bào)道，為國家一類新藥，其規(guī)格為50mg∶100mL，處方工藝中選擇氯化鈉溶液為溶劑。聚氯乙烯（PVC）為常用輸液器材料，有文獻(xiàn)[2～5]報(bào)道PVC對部分藥物具有吸附作用。因此，筆者設(shè)計(jì)了相關(guān)試驗(yàn)，初步考察PVC輸液器對左旋丁苯酞的吸附作用，為臨床安全、有效、合理用藥提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

API-4000型液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（LC-MS/MS）聯(lián)用儀、Agilent 1200高效液相色譜（HPLC）儀、電噴霧源、Analyst 1.4.2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國Applied Biosystem Sciex公司）；PVC輸液器（浙江康康醫(yī)療器械有限公司，批號：060401）；聚丙烯（PP）250mL塑料瓶（廣東大冢制藥有限公司，批號：080203）。

左旋丁苯酞對照品（批號：040708，純度：99.7%）、左旋丁苯酞氯化鈉注射液（批號：20080309，規(guī)格：50mg∶100mL）均由石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)（石家莊）有限公司提供；地西泮（內(nèi)標(biāo)）對照品（國家麻醉品實(shí)驗(yàn)室，批號：1230-9601，純度：100.0%）；0.9%氯化鈉注射液（NS）250mL（廣東大冢制藥有限公司，批號：080420）；甲醇和甲酸為色譜純，醋酸銨為分析純，水為滅菌注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[6]

色譜柱：XTerra?RP-18（150mm×4.6mm，5μm）；預(yù)柱：Phenomenex Security GuardTMC18；流動(dòng)相：甲醇-2.5mmol·L－1醋酸銨緩沖液（含0.1%甲酸）＝85∶15（V/V）；流速：1mL·min－1；進(jìn)樣體積：10μL；每個(gè)樣品的分析時(shí)間為 3min；左旋丁苯酞和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間為2.20min左右。

2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源，在正離子電離模式下，采用多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）的質(zhì)譜掃描方式，測定左旋丁苯酞和內(nèi)標(biāo)的母/子離子對分別為：m/z 191.1→145.1和m/z 285.1→193.1。參數(shù)：碰撞氣（CAD）流速：6psi，簾氣（CUR）流速：20psi，霧化氣（Gas1）流速：70psi，輔助氣（Gas2）流速：55psi，噴霧電壓（IS）：5500V，霧化溫度（TEM）：450℃。在此質(zhì)譜條件下，左旋丁苯酞和內(nèi)標(biāo)的準(zhǔn)分子離子的二級全掃描MS圖見圖1。

圖1 質(zhì)譜圖A.左旋丁苯酞；B.內(nèi)標(biāo)Fig 1 MS chromatogramsA.levobutylphthalide；B.inner standard

2.3 溶液制備及系統(tǒng)分離

2.3.1 左旋丁苯酞標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液制備。精密稱取20.0mg左旋丁苯酞，以甲醇定容至10mL容量瓶中，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線貯備液。取適量上述標(biāo)準(zhǔn)曲線貯備液以甲醇-水＝1∶1為溶劑，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，濃度分別為50、100、200、500、1000、2000、5000ng·mL－1。

2.3.2 內(nèi)標(biāo)工作液制備。精確稱取10.0mg內(nèi)標(biāo)，以甲醇定容至10mL容量瓶中，得內(nèi)標(biāo)貯備液。取內(nèi)標(biāo)貯備液（1.00mg·mL－1）250μL至250mL容量瓶中，加入水定容至刻度，得到濃度為1.00μg·mL－1的內(nèi)標(biāo)工作液。

2.3.3 樣品處理。精密吸取注射用水180μL，分別加入7種濃度左旋丁苯酞標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液各20μL，得左旋丁苯酞濃度為5、10、20、50、100、200、500ng·mL－1的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，加入1.00μg·mL－1內(nèi)標(biāo)工作液50μL，混勻后分別進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖。以左旋丁苯酞與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比為Y，左旋丁苯酞濃度為c，進(jìn)行線性回歸，得線性方程為Y＝0.02c+0.00104（r＝0.9989，n＝6）。

2.3.4 系統(tǒng)分離。取空白（注射用水）、空白+左旋丁苯酞對照品（5ng·mL－1）+內(nèi)標(biāo)（1.00μg·mL－1）及供試液（“2.7.2”項(xiàng)下 H組注射液流經(jīng)PVC輸液器60min后注射液）的LC-MS/MS圖譜見圖2。

圖2 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜圖A.空白；B.空白+左旋丁苯酞對照品+內(nèi)標(biāo)；C.供試液；Ⅰ.左旋丁苯酞；Ⅱ.內(nèi)標(biāo)Fig 2 LC-MS/MS chromatogramsA.blank；B.blank+levobutylphthalide+inner standard；C.sample；Ⅰ.levobutylphthalide；Ⅱ.inner standard

2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱取20.0mg左旋丁苯酞對照品，以甲醇定容至10mL容量瓶中，作為質(zhì)控貯備液，取適量質(zhì)控貯備液以甲醇-水＝1∶1為溶劑，制備質(zhì)控工作液濃度分別為120、1200、4000ng·mL－1。精密吸取注射用水180μL，分別加入上述3種濃度質(zhì)控工作液各20μL，制備成左旋丁苯酞濃度為12、120、400ng·mL－1的質(zhì)控溶液，加入1.00μg·mL－1內(nèi)標(biāo)工作液50μL，混勻后分別進(jìn)樣10μL，按精密度試驗(yàn)方法操作，每個(gè)濃度進(jìn)行5個(gè)樣本分析，測定3批，求得日內(nèi)RSD分別為5.1%、1.6%、1.5%，日間RSD分別為8.9%、8.2%、11.8%（n＝5）。

2.5 回收率試驗(yàn)

精密吸取左旋丁苯酞氯化鈉注射液1mL，以水定容至250mL容量瓶中。吸取上述溶液1mL至3個(gè)具塞試管中，分別加入適量質(zhì)控工作液至上述溶液中，使左旋丁苯酞濃度為26、80、400ng·mL－1。每個(gè)濃度吸取 200μL，加入1.00μg·mL－1內(nèi)標(biāo)溶液50μL，混勻后分別進(jìn)樣10μL，每個(gè)濃度進(jìn)行5個(gè)樣本分析，測得低、中、高濃度回收率分別為（97.8±6.2）%、（96.3±1.4）%、（97.5±1.9）%（n＝5）。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

參照“2.4”項(xiàng)下方法制備左旋丁苯酞濃度為12、120、400ng·mL－1的質(zhì)控溶液，每個(gè)濃度選3個(gè)樣本進(jìn)行分析，考察樣品溶液于室溫放置6h的穩(wěn)定性。結(jié)果，RSD均小于15%，表明樣品溶液于室溫放置6h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 吸附試驗(yàn)

2.7.1 PP塑料瓶吸附試驗(yàn)。左旋丁苯酞注射液規(guī)格為50mg∶100mL，臨床擬使用劑量范圍為40mg∶240mL～120mg∶240mL，一次輸液時(shí)間是60min。左旋丁苯酞注射液使用100mL玻璃瓶，容量較小，考慮到醫(yī)院臨床采用的輸液容器均為PP材質(zhì)，因此選用PP 250mL塑料瓶作為容器，以NS稀釋，得到含左旋丁苯酞40mg∶240mL和120mg∶240mL的左旋丁苯酞/氯化鈉注射液，分別記為L組和H組注射液，每組制備3份，靜置120min。在0、120min時(shí)分別精密取樣1mL經(jīng)稀釋后測定含量。以0min的左旋丁苯酞濃度為100%，計(jì)算120min時(shí)的左旋丁苯酞的相對含量，各取3份注射液計(jì)算平均值。使用SPSS17.0軟件，以靜置后（120min）數(shù)據(jù)與靜置前（0min）數(shù)據(jù)分組進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示2組比較無顯著性差異（P＞0.05），說明左旋丁苯酞氯化鈉注射液在PP塑料瓶中120min內(nèi)含量是穩(wěn)定的，詳見表1。

表1 2組注射液在PP塑料瓶中的平均含量變化（%%，n＝3）Tab 1 Average content of samples of 2groups in PP plastic bottle（%%，n＝3）

2.7.2 PVC輸液器吸附試驗(yàn)。根據(jù)臨床擬使用劑量，以NS稀釋，得到含左旋丁苯酞40mg∶240mL和120mg∶240mL的左旋丁苯酞/氯化鈉注射液，分別記為L組和H組注射液，每組制備3份。2組注射液分別流經(jīng)PVC輸液器，模擬臨床靜脈滴注，60min滴注完畢。按時(shí)從輸液器末端取樣，在0、10、20、40、60min時(shí)各精密取樣1mL稀釋后測定。以0min的左旋丁苯酞濃度為100%，計(jì)算其他時(shí)間點(diǎn)的左旋丁苯酞的相對含量，各取3份注射液計(jì)算平均值。使用SPSS17.0軟件以流經(jīng)輸液器后含量數(shù)據(jù)與流經(jīng)輸液器前含量數(shù)據(jù)依次分組進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示2組結(jié)果均存在顯著性差異（P＜0.05），詳見表2。

表22 組注射液在PVC輸液器中的平均含量變化（%%，n＝3）Tab 2 Average content of samples of 2groups in PVC infusion（%%，n＝3）

3 討論

醫(yī)用高分子聚合物包裝材料應(yīng)用十分普遍，藥物在其中的穩(wěn)定性亦引起了廣泛關(guān)注。輸液容器及輸液器對某些藥物可能會有吸附作用，使藥物濃度降低。目前臨床常用PP材質(zhì)的輸液容器和PVC材質(zhì)的輸液器，因此本試驗(yàn)中選擇了PP塑料瓶及PVC輸液器考察其對左旋丁苯酞的吸附作用。

采用LC-MS/MS法測定左旋丁苯酞/氯化鈉注射液中左旋丁苯酞的含量，其方法簡便、快捷、專屬性強(qiáng)。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，PP塑料瓶對左旋丁苯酞/氯化鈉注射液未見明顯的吸附作用，PVC輸液器對左旋丁苯酞/氯化鈉注射液有明顯的吸附作用。主要原因在于：PVC材料在生產(chǎn)過程中為改變其性能加入了增塑劑鄰苯二甲酸二異辛酯（DEHP），在使用過程中可能有DEHP溶出，與藥液可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；在輸液輸入的初期，輸液管壁表面處于空白狀態(tài)，DEHP易與藥物發(fā)生結(jié)構(gòu)配位，吸附作用大；隨著輸液管壁表面被吸附的藥物分子不斷增多，結(jié)構(gòu)配位空間減少，藥物發(fā)生可逆性吸附的部分吸附速度減慢，此時(shí)解吸附較易發(fā)生。從表2看出，在10min時(shí)吸附率最大，以后的輸液過程中吸附率逐漸減少。PP輸液瓶由于不存在增塑劑，因此，與藥液不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，穩(wěn)定性好，與文獻(xiàn)[3，7～9]報(bào)道結(jié)果一致。

因此，筆者認(rèn)為在下一步試驗(yàn)中，有必要對輸液過程中可能用到的其他材料的輸液器對該藥是否也存在吸附作用進(jìn)行研究，以減少因吸附所致藥物的損失，并尋找臨床應(yīng)用時(shí)適合的配套輸液器，從而保證臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和藥物的療效。

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Study on Absorption Effect of Infusion Systems of Polyvinyl Chloride on Levobutylphthalide

LV Cheng-zhe（The Affiliated Children’s Hospital of Soochow University，Suzhou 215003，China）
ZHANG Quan-ying，WANG Meng（The Second Affiliated Hospital of Soochow University，Suzhou 215004，China）

OBJECTIVE：To investigate the absorption of levobutylphthalide onto infusion system of polyvinyl chloride（PVC）.METHODS：0.9%sodium chloride injection was mixed with levobutylphthalide injection.The high-concentration and low-concentration mixtures were injected intravenously using PVC infusion systems.Samples were collected at different time points within 120min.The content of samples were determined by LC-MS/MS and compared with the result before infusion.RESULTS：There was significant difference in content of high-concentration and low-concentration mixtures between before and after infusion（P＜0.05）.CONCLUSION：In the study，PVC infusion system has adsorption effect on levobutylphthalide.We should adopt suitable infusion system in the clinic.

Levobutylphthalide；Infusion system of polyvinyl chloride；Absorption；LC-MS/MS

R972；R927.2

A

1001-0408（2011）29-2764-03

2011-02-24

2011-03-21）