朱紅霖，韋萬興，周 敏，楊 丹，樊希望，劉建雄

廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，南寧530004

珠子草化學(xué)成分的研究

朱紅霖，韋萬興*，周 敏，楊 丹，樊希望，劉建雄

廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，南寧530004

利用大孔樹脂吸附和多種柱層析方法，從珠子草中分離得到5個化合物，根據(jù)理化數(shù)據(jù)和波譜學(xué)等方法鑒定為柯里拉京(1)、蘆丁(2)、isobubbialine(3)、丁二酸(4)和沒食子酸(5)。根據(jù)2D-NMR修正了化合物3的部分碳信號歸屬，歸屬了化合物1的碳氫譜數(shù)據(jù)。

珠子草;大孔樹脂;isobubbialine;柯里拉京;丁二酸;沒食子酸

珠子草(Phyllanthus niriru L.)為大戟科葉下珠屬植物的一種，是印度與我國的傳統(tǒng)民間草藥，一般認為其具有清肝、明目、滲濕利水等功效，臨床上用于治療肝炎，腸炎，尿路感染，糖尿病等疾病［1］。近年來，人們對珠子草化學(xué)成分的研究日益增多，我們曾經(jīng)對珠子草做了一些研究，從中分離出了一系列化合物［1-4］。珠子草主要含有黃酮和黃酮甙、生物堿、木脂素、三萜及甾醇、鞣質(zhì)和有機酸類物質(zhì)［5］。但關(guān)于其化學(xué)成分的研究尚不深入。我們繼續(xù)對其進行化學(xué)成分的研究，旨在為抗乙肝病毒藥物的研發(fā)提供相應(yīng)的依據(jù)。本實驗利用大孔吸附樹脂、硅膠柱色譜和sephadex LH-20葡聚糖凝膠色譜等分離手段對珠子草中的大極性部位進行了研究，從中分離得到了5個化合物。根據(jù)2D-NMR修正了化合物3的部分碳信號歸屬，歸屬了化合物1的碳氫譜數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Agilent 1100 MSD TRAPSL質(zhì)譜儀，SHIMADZU氣質(zhì)聯(lián)用儀，Bruker AVANCEⅢ500 MHz全數(shù)字化傅立葉超導(dǎo)核磁共振波譜儀，NEXUS470FT-IR型紅外光譜儀，Perkin Elmer P341LC型自動旋光儀，X-4熔點測定儀(北京泰克儀器有限公司)。硅膠GF254、硅膠H(青島海洋化工廠)，DM130大孔樹脂(上海摩速科學(xué)器材有限公司)。其余試劑均為分析純。

珠子草的地上部分于2006年12月采自廣西隆安縣，由西北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院倪士峰博士鑒定，標本存放于本實驗室，編號06121。

1.2 提取和分離

珠子草地上部分經(jīng)干燥粉碎后的粗粉5 kg用乙醇回流提取3 h。濾出浸提液，殘渣用乙醇繼續(xù)回流提取兩次。合并乙醇浸提液，濃縮蒸干，到珠子草乙醇浸膏413 g。浸膏分散到水中，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取。取乙酸乙酯萃取后的水溶液蒸干得極性部位浸膏A(84 g)。浸膏A分散到水中，濾去少量沉淀，用蒸餾水稀釋至13.0 mg/mL，將2000 mL處理好的DM130型大孔樹脂裝入玻璃柱中，使樣品溶液以4 BV/h(BV指柱體積)的流速流經(jīng)柱床至吸附完全，用蒸餾水沖洗至無物質(zhì)流出后再以1 BV/h的流速依次用10%、80%和100%的甲醇水溶液洗脫，分別得到浸膏B(9.1 g)、C(54.6 g)和D (6.3 g)。浸膏B用甲醇∶水=1∶1反復(fù)重結(jié)晶得到乳白色細針狀晶體1(3.8 g)，浸膏C反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析，用Sephadex-LH20凝膠柱純化和通過制備薄層板、重結(jié)晶等手段得到2(1.8 g)、3(7.5 mg)、4 (35.1 mg)和5(68.4 mg)。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 乳白色細針狀晶體(在甲醇-水(1∶1)溶劑中結(jié)晶)，mp.204～206℃(分解)。易溶于乙醇、甲醇、丙酮，稍溶于水。三氯化鐵反應(yīng)呈陽性，Molish反應(yīng)呈陽性。［α］20D-8.7°(c=1.0，Acetone)。IR(KBr)νmaxcm-1:3420，1720，1620，1530，1450。ESI-MS m/z 633［M–1］–。13C NMR譜中δ 95.07～62.50六個碳信號為葡萄糖的碳信號，其NMR數(shù)據(jù)如下:1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ: 6.71(1H，s，H-3)，6.68(1H，s，H-12)，6.38 (1H，d，J=2.0 Hz，H-20)，4.00(1H，d，J=1.5 Hz，H-19)，4.98(2H，m，H-16，H-18)，4.48(1H，m，H-17)，4.53(1H，m，H-15a)，4.17(1H，m，H-15b)，7.07(2H，s，H-23，H-27);13CNMR (CD3OD，125 MHz)δ:168.5(s，C-1)，125.5(s，C-2)，110.2(d，C-3)，145.2(s，C-4)，138.2(s，C-5)，145.3(s，C-6)，117.2(s，C-7)，116.7(s，C-8)，145.7(s，C-9)，137.7(s，C-10)，146.1(s，C-11)，108.4(d，C-12)，125.6(s，C-13)，170.1 (s，C-14)，65.0(t，C-15)，71.6(d，C-16)，62.5 (d，C-17)，76.2(d，C-18)，69.5(d，C-19)，95.1 (d，C-20)，166.7(s，C-21)，120.7(s，C-22)，111.0(d，C-23，C-27)，146.4(s，C-24，C-26)，140.4(s，C-25)。以上數(shù)據(jù)與柯里拉京(corilagin，見圖1)的波譜數(shù)據(jù)［6，7］基本一致，故化合物1鑒定為柯里拉京。

化合物2 黃色細針狀晶體(甲醇)，mp.174～177℃，易溶于熱吡啶、熱甲醇，溶于熱乙醇。不溶于乙醇、氯仿、石油醚、乙酸乙酯。與三氯化鐵反應(yīng)呈陽性，鹽酸鎂粉反應(yīng)呈陽性，Molish反應(yīng)呈陽性，說明該化合物為黃酮苷。ESI-MS m/z 611［M+ 1］+。［α+13.8°(c=1.0，EtOH)。IR(KBr) νmax cm-1:3419，1656，1600，1505，1456，1362，1296，1204。與蘆丁紅外圖譜匹配度很高，化合物2與蘆丁標準品混合熔點不下降，硅膠薄層板顯示兩者Rf值完全一致，故化合物2鑒定為蘆丁。

化合物3 無色透明長柱狀晶體(氯仿中重結(jié)晶)，mp.113～114℃，溶于氯仿、甲醇。碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性。IR(KBr)νmaxcm-1:3400(OH)，1765 (C=O，內(nèi)酯)，1696(C=C)，1410，1110，1080，981。［α］20D+11.1°(c=0.1，MeOH)。ESI-MS m/z 222［M+1］+。其 NMR數(shù)據(jù)如下:13C NMR (CD3OD，125 MHz)δ:64.8(d，C-2)，27.9(t，C-3)，26.5(t，C-4)，53.6(t，C-5)，57.5(d，C-6)，72.5(d，C-7)，33.7(t，C-8)，86.3(s，C-9)，177.3(s，C-11)，112.2(d，C-12)，175.9(s，C-13)，31.9(t，C-14)。1H NMR(CD3OD，500 MHz) δ:3.06(1H，m，H-2)，2.24(1H，m，H-3a)，1.97 (1H，m，H-3b)，1.74(1H，m，H-4a)，2.18(1H，m，H-4b)，3.02(1H，m，H-5a)，3.82(1H，m，H-5b)，3.27(1H，s，H-6)，4.20(1H，dd，J=9.5，4.0 Hz，H-7)，1.91(1H，m，H-8a)，2.35(1H，dd，J=13.5，4.5 Hz，H-8b)，5.83(1H，t，J=1.8 Hz，H-12)，2.80(1H，dt，J=19.5，2.1Hz，H-14a)，2.96(1H，dt，J=19.5，2.7 Hz，H-14b)。以上數(shù)據(jù)與isobubbialine的NMR數(shù)據(jù)［8］基本一致，故鑒定化合物3為isobubbialine。但文獻中C-3和C-4位信號歸屬有誤，由1H-1H COSY譜中可以看出δ 3.82(H-5b)除與δ 3.02(H-5a)相關(guān)外，還與1.74 ppm及2.18 ppm的氫相關(guān)，故可確定后兩者為H-4，再由HSQC譜可知，26.5 ppm處的碳與H-4直接相關(guān)，故該碳為C-4，27.9 ppm處的碳則C-3。化合物3的結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 化合物1和3的結(jié)構(gòu)式Fig.1 The structure of compounds 1 and 3

化合物4 無色透明晶體(水)，mp.183～185℃，溶于水，微溶于乙醇、丙酮，不溶于乙酸乙酯。EI-MS、IR與丁二酸標準品的譜圖一致。1H NMR (D2O，500 MHz)δ:2.50(3H，s，CH3)。13C NMR (D2O，125 MHz)δ:178.6(C=O)，30.20(CH3)。NMR數(shù)據(jù)與丁二酸的核磁數(shù)據(jù)［9］基本一致，故鑒定該化合物為丁二酸。

化合物5 無色透明針狀晶體(甲醇中重結(jié)晶)，mp.236～239℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮，幾乎不溶于苯、氯仿及石油醚。ESI-MS m/z 169［M-1］-。IR(KBr)νmaxcm-1:3496，3285，3063，1701，1614，1540，1432，1319。1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ: 7.07(2H，s，H-2，H-6)。13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:170.5(COOH)，146.4(C-3)，139.6(C-4)，122.1(C-1)，110.3(C-2)。上述數(shù)據(jù)與沒食子酸的波譜數(shù)據(jù)［10］一致，故鑒定該化合物為沒食子酸。

致謝:浙江工商大學(xué)食品與工程學(xué)院王奎武教授代測NMR，其它各種波譜由本學(xué)院測試中心和廣西大學(xué)糖業(yè)中心測試，一并感謝!

1 Wei WX(韋萬興)，Pan YJ(潘遠江)，Zhang H(張虹)，et al.The structures in crystal and in solution of friedelin isolated from Phyllanthus niruri Linn.Nat Prod Res Dev(天然產(chǎn)物研究與開發(fā))，2004，16:201-203.

2 Wei WX(韋萬興).Investigations on the chemical constituents of Phyllanthus niruri Linn and Phyllanthus urinaria Linn.Hangzhou:Zhejiang University(浙江大學(xué))，PhD.2003.

3 Wei WX(韋萬興)，Pan YJ(潘遠江).The crystal structure of one natural compound Cyclo-(1，10-Docandiamino-11，20-Docanedioic)Amide(1，12-Diazacyclodocosane-2，11-Dione).Bull Korean Chem Soc，2002，23:1527-1530.

4 Li XR(黎香榮).Investigations on the chemical constituents from Phyllanthus niruri L.Olysaccharide from Sedum sarmentosum Bunge.Nanning:Guangxi University(廣西大學(xué))，Master Dissertation.2007.

5 Li XR(黎香榮)，Zhou W(周吳)Wei WX(韋萬興).Chemical components and bioactivities of Phyllanthus niruri L..Nat Prod Res Dev(天然產(chǎn)物研究與開發(fā))，2007，19: 890-896.

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Chemical Constituents of Phyllanthus niruri L.

ZHU Hong-lin，WEI Wan-xing*，ZHOU Min，YANG Dan，F(xiàn)AN Xi-wang，LIU Jian-xiong
School of Chemistry and Chemical Engineering，Guangxi University，Nanning 530004，China

Five compounds were isolated from the aerial part whole plants of Phyllanthus niruri L.and identified as corilagin(1)，rutin(2)，isobubbialine(3)，succinic acid(4)，and gallic acid(5)on the basis of physical and chemical properties and spectra data.The assignment of NMR signals of compound 3 was revised，and the NMR signals of compound 1 were assigned with 1D and 2D-NMR spectra.

Phyllanthus niruri L.;macroporous resin;isobubbialine;corilagin;succinic acid;gallic acid

1001-6880(2011)03-0401-03

2010-01-27 接受日期:2010-06-09

國家自然科學(xué)基金項目(30660216);廣西大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新性實驗計劃項目(A0401129)

*通訊作者 Tel:86-771-3233718;E-mail:wxwei@gxu.edu.cn

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