邵江娟，鐘潔雯，陳建偉，2#，李祥，2，蔡寶昌，2（.南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京市20046；2.江蘇省中藥炮制重點實驗室，南京市 20029）

生牡蠣X射線衍射分析及指紋圖譜的建立Δ

邵江娟1＊，鐘潔雯1，陳建偉1，2#，李祥1，2，蔡寶昌1，2（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京市210046；2.江蘇省中藥炮制重點實驗室，南京市 210029）

目的：建立生牡蠣的X射線衍射指紋圖譜，考察X射線衍射分析在生牡蠣質(zhì)量檢測與鑒別中的應(yīng)用價值。方法：應(yīng)用X射線衍射法對11批生牡蠣樣品進(jìn)行定性分析，比較其共有峰的夾角余弦和相關(guān)系數(shù)的相似度。結(jié)果：各生牡蠣樣品X射線衍射共有峰的相似度均達(dá)到95%以上。結(jié)論：生牡蠣的X射線衍射分析方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確可靠，能全面、客觀地反映其內(nèi)在質(zhì)量特征。

生牡蠣；X射線衍射法；指紋圖譜

牡蠣為牡蠣科動物長牡蠣Ostrea gigas Thunberg、大連灣牡蠣O.talienwhanensis Crosse或近江牡蠣O.rivularis Gould的貝殼，是中醫(yī)臨床常用藥?！吨袊幍洹穼ζ渖返馁|(zhì)量控制是以乙二胺四乙酸（EDTA）法測定碳酸鈣（CaCO3）的含量[1]，但該方法無法對生牡蠣與其他主要含CaCO3的中藥或化學(xué)試劑CaCO3進(jìn)行區(qū)別。指紋圖譜是近年來對含復(fù)雜化學(xué)成分的中藥質(zhì)量進(jìn)行較為全面控制的一種分析手段，能避免對中藥某一種或幾種成分鑒別的缺陷[2]。X射線衍射技術(shù)是一項利用初級X射線光子或其他微觀離子激發(fā)待測物質(zhì)中的原子，使之產(chǎn)生熒光（次級X射線）而進(jìn)行物質(zhì)成分分析和化學(xué)態(tài)研究的技術(shù)[3]。本試驗對11批生牡蠣樣品進(jìn)行X射線衍射分析，以它們的衍射峰的平均數(shù)值和中位數(shù)值作為共有模式，用最強(qiáng)峰進(jìn)行匹配，建立生牡蠣的X射線衍射指紋圖譜，并以相關(guān)系數(shù)和夾角余弦為參數(shù)，計算各產(chǎn)地生牡蠣樣品指紋圖譜的相似度。

1 儀器與材料

XD-3A型X射線衍射儀（Cu./Mono.Graph，日本Shimadzu公司）。

采集8個產(chǎn)地（分別為河北、山東、浙江、廣東、福建、江蘇、天津、遼寧）11個批次的生牡蠣樣品，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院陳建偉教授鑒定為真品；CaCO3（化學(xué)純，上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站經(jīng)銷，批號：00117）。

2 方法與結(jié)果

2.1 測試條件與方法

2.1.1 試驗條件 電壓（V）：40kV；電流（I）：30mA。

2.1.2 試驗方法 對11批樣品（洗凈，晾干，粉碎過六號篩）與化學(xué)試劑CaCO3進(jìn)行X射線衍射分析，應(yīng)用Origin7.5軟件分析數(shù)據(jù)并繪圖。

2.2 測試結(jié)果

2.2.1 生牡蠣與CaCO3的X射線衍射圖譜 11批生牡蠣樣品與CaCO3的X射線衍射圖譜分別見圖l、圖2（衍射峰強(qiáng)度單位用CPS表示）。

2.2.2 平均數(shù)圖與中位數(shù)圖 取11批生牡蠣樣品圖譜中的峰的平均值繪圖，得平均數(shù)圖，詳見圖3。取11批生牡蠣樣品圖譜中的峰的中位數(shù)值繪圖，得中位數(shù)圖，詳見圖4。

2.2.3 共有峰 在平均數(shù)圖中應(yīng)用Origin7.5軟件，在相同條件下找尋強(qiáng)度最大的共有峰，得平均數(shù)共有峰參數(shù)，詳見表1。在中位數(shù)圖中應(yīng)用Origin7.5軟件，在相同條件下找尋強(qiáng)度最大的共有峰，得中位數(shù)共有峰參數(shù)，詳見表2。

2.2.4 相似度 在Excel表格中，用夾角余弦法和相關(guān)系數(shù)法計算各樣品相似度，結(jié)果見表3。

由表3可知，生牡蠣X射線衍射圖譜相似度達(dá)95%以上。

2.2.5 生牡蠣晶型結(jié)構(gòu)解析 根據(jù)所得生牡蠣的X射線衍射圖譜，在Pcpdfwin分析軟件中進(jìn)行卡片匹配，最終得到與生牡蠣晶型結(jié)構(gòu)最相似卡片的數(shù)據(jù)，詳見表4。

圖1 11批生牡蠣樣品共有圖譜Fig 1 Common spectrum of 11batches of Ostreae Concha

圖2 CaCO3的X射線衍射圖Fig 2 X-ray diffraction spectrum of CaCO3

圖3 生牡蠣的平均數(shù)圖Fig 3 Mean spectrum of Ostreae Concha

圖4 生牡蠣的中位數(shù)圖Fig 4 Median spectrum of Ostreae Concha

3 討論

表1 11批生牡蠣的平均數(shù)共有峰Tab 1 Common peaks of mean value of 11batches of Ostreae Concha

表2 11批生牡蠣的中位數(shù)共有峰Tab 2 Common peaks of median value of 11batches of Ostreae Concha

表3 11批生牡蠣的相似度比較結(jié)果Tab 3 Similarity comparison of 11batches of Ostreae Concha

生牡蠣含有90%以上的CaCO3，用一般的化學(xué)檢查方法或儀器分析方法都不能有效地保證生牡蠣的質(zhì)量。外觀檢查對于原藥材尚可區(qū)分，而臨床用藥需粉碎，外觀也就混淆了。紅外光譜法能夠區(qū)別牡蠣的生、煅品，但對生牡蠣與其他主要含CaCO3的中藥或化學(xué)試劑CaCO3等無法加以區(qū)別。高效液相色譜法和氣相色譜法對主要成分為無機(jī)物的中藥材就更加無能為力了。

X射線衍射分析方法是分析和研究結(jié)晶物質(zhì)的重要手段之一。當(dāng)某物質(zhì)進(jìn)行衍射分析時，該物質(zhì)被射線照射產(chǎn)生不同程度的衍射現(xiàn)象，由圖譜中得到的掠射角與衍射強(qiáng)度，再算出晶面間距與相對強(qiáng)度，在X射線中衍射晶面間距與相對強(qiáng)度是物質(zhì)的固有值，從而使物質(zhì)結(jié)構(gòu)特征具有指紋性[4]。牡蠣的主要成分為CaCO3，具有明顯的衍射現(xiàn)象，因此采用X射線衍射分析方法研究，可獲得十分精確的鑒定結(jié)果，具有較高的應(yīng)用價值。

本試驗選取8個產(chǎn)地11個批次的生牡蠣藥材，以其X射線衍射峰的平均數(shù)和中位數(shù)作為共有模式，以最強(qiáng)峰進(jìn)行譜峰匹配，采用相關(guān)系數(shù)法和夾角余弦法對每批樣品進(jìn)行整體相似度計算，相似度均達(dá)到95%以上，表明生牡蠣的X射線衍射指紋圖譜具有很好的專屬性，這是化學(xué)方法及其他儀器分析方法所不及的。生牡蠣X射線衍射指紋圖譜的建立對保證其質(zhì)量可提供可靠的科學(xué)依據(jù)。

表4 PDF卡片數(shù)據(jù)表Tab 4 The date of PDF card

[1] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：161.

[2] 孫 磊，喬善義，趙毅民.中藥指紋圖譜應(yīng)用研究進(jìn)展[J].國際藥學(xué)研究雜志，2009，36（3）：194.

[3] 周靈君，張 麗，路長珍，等.市售生、煅爐甘石的成分分析及質(zhì)量評價[J].中國藥房，2010，21（27）：2534.

[4] 李 樣，李 凡，劉元芬，等.中藥石膏X射線衍射分析及指紋圖譜的確定[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，1（2）：91.

X-ray Diffraction Analysis and Establishment of Fingerprints of Ostreae Concha

SHAO Jiang-juan，ZHONG Jie-wen，CHEN Jian-wei，LI Xiang，CAI Bao-chang（Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210046，China）
CHEN Jian-wei，LI Xiang，CAI Bao-chang（Jiangsu Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Processing，Nanjing 210029，China）

OBJECTIVE：To establish the X-ray diffraction fingerprint of Ostreae Concha，and to investigate the application value of X-ray diffraction analysis in qualitative determination and identification for Ostreae Concha.METHODS：11batches of Ostreae Concha was qualitatively analyzed by X-ray diffraction，and semblance degree of the public peaks including angle cosine and correlation coefficient was compared.RESULTS：The semblance degree of the public peaks of Ostreae Concha was exceeded 95%.CONCLUSION：X-ray diffraction analysis of Ostreae Concha is specific，accurate and reliable，and it can reflect internal quality feature of Ostreae Concha comprehensively and objectively.

Ostreae Concha；X-ray diffraction；Fingerprint

R282.74；R927

A

1001-0408（2011）39-3697-03

Δ國家科技支撐計劃子課題（2006BAI09B06-04）

＊講師。研究方向：中藥品質(zhì)評價。電話：025-85811520。E-mail：sjj767473@sohu.com

#通訊作者：教授，博士研究生導(dǎo)師。研究方向：中藥品質(zhì)評價與中藥生物技術(shù)。電話：025-85811695。E-mail：chenjw695@126.com

2010-10-06

2010-11-22）