廖銀根，丁志軍，羅美蘭，許時(shí)貴（江西省皮膚病專科醫(yī)院，南昌市 330001）

正交試驗(yàn)優(yōu)選荊防止癢顆粒提取工藝Δ

廖銀根＊，丁志軍，羅美蘭，許時(shí)貴（江西省皮膚病?？漆t(yī)院，南昌市 330001）

目的：研究荊防止癢顆粒的提取工藝。方法：采用正交試驗(yàn)法，以干膏率及苦參堿、氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，考察加水量、提取次數(shù)、提取時(shí)間對(duì)提取工藝的影響。結(jié)果：以飲片投料，加12倍量的水，煎煮2次，每次2h為最佳工藝。結(jié)論：該工藝穩(wěn)定、可靠，可為工業(yè)生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

荊防止癢顆粒；苦參堿；氧化苦參堿；正交試驗(yàn)；高效液相色譜法

荊防止癢顆粒系江西省皮膚病?？漆t(yī)院中醫(yī)科專家經(jīng)十幾年臨床總結(jié)，擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)（專利號(hào)：ZL200410033921.4）的經(jīng)驗(yàn)方。其由荊芥、防風(fēng)、苦參等13味中藥組成，具有疏風(fēng)養(yǎng)血、清熱除濕的功效。臨床上主要用于治療濕疹、蕁麻疹、瘙癢等風(fēng)熱、濕熱之皮膚病。為了將荊防止癢煎劑更好地應(yīng)用于臨床，我院研究開發(fā)出服用、攜帶方便的荊防止癢顆粒劑，并對(duì)其制備工藝進(jìn)行了研究。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)（美國安捷倫科技有限公司）；CP225D微量天平（德國Sartorius公司）；KQ-500E醫(yī)用超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司）。

苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為110753-200512、110786-200603）；苦參飲片（安徽致和堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)：100118）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)的確定

荊防止癢顆粒處方中有多味藥材，有效成分眾多，因此以干膏率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)之一較合理；苦參主要有效成分為苦參堿和氧化苦參堿，故以苦參堿、氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2.2 干膏率的測(cè)定方法

精密移取正交試驗(yàn)下提取濃縮液50mL，平行3份，分別置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，并于105℃干燥3h，迅速取出，置于干燥器中放置30min，迅速精密稱定干膏重量。按下式計(jì)算干膏率：干膏率（%）＝干膏重（mg）×濃縮液總量（mL）/取樣量（mL）/生藥總量（mg）×100%

2.3 苦參堿和氧化苦參堿的含量測(cè)定[1]

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：NUCLEOSIL-NH2氨基鍵合硅膠柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（82∶10∶8）；檢測(cè)波長：220nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：5μL。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解，制成苦參堿、氧化苦參堿濃度分別為0.182、0.058mg·mL-1的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密量取提取濃縮液15mL，水浴蒸干，轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，加濃氨試液0.5mL，精密加入三氯甲烷20mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率：250W，頻率：33kHz）30min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足失重，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，通過中性氧化鋁柱（100～200目，5g，內(nèi)徑1cm），依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（7∶3）各20mL洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)訜o水乙醇使溶解，并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.3.4 苦參堿和氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率的計(jì)算公式 轉(zhuǎn)移率（%）＝濃縮液中苦參堿和氧化苦參堿的含量（mg·mL-1）×濃縮液的體積（mL）/苦參飲片中苦參堿和氧化苦參堿的含量（%）/苦參飲片量（g）×1000×100%。

2.4 苦參飲片中苦參堿和氧化苦參堿的含量測(cè)定

稱取苦參飲片粉末（過三號(hào)篩）約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液0.5mL，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液5μL進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得苦參飲片中苦參堿和氧化苦參堿含量之和為2.34%。

2.5 正交試驗(yàn)優(yōu)選提取工藝

2.5.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 通過預(yù)試驗(yàn)對(duì)影響水煎煮的各因素進(jìn)行考察，選擇加水量（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）為影響水煎煮的主要因素，每個(gè)因素選取3個(gè)水平。因素水平見表1。

2.5.2 正交試驗(yàn)安排及結(jié)果 按處方比例稱取荊芥、防風(fēng)、苦參等藥材234g，共9份，根據(jù)L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表，將藥材浸泡0.5h后提取。提取完畢后，將不同條件下的水提液分別濃縮至適量，定容至3000mL，稱定重量，備用。以干膏率及苦參堿、氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)。正交試驗(yàn)結(jié)果見表2；方差分析結(jié)果見表3。

表1 因素水平Tab 1 Factors and levels

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Results of orthogonal test

表3 方差分析結(jié)果Tab 3 Results of variance analysis

由表2、表3可知，以干膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，A因素有顯著性影響，各因素的影響順序?yàn)锳＞C＞B，以A3B3C2最佳；以苦參堿、氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，A因素有顯著性影響，各因素影響順序?yàn)锳＞B＞C，以A3B3C2最佳。所以，最佳工藝為A3B3C2，即加12倍量水，提取2次，每次2h。

2.6 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

為了驗(yàn)證正交試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，以確保提取工藝合理可行，按上述工藝條件A3B3C2，重復(fù)安排3批試驗(yàn)。結(jié)果，平均干膏率為29.2%，苦參堿、氧化苦參堿平均轉(zhuǎn)移率為47.5%，與正交試驗(yàn)較好的結(jié)果相近，表明優(yōu)選的工藝合理、可行。

3 討論

本試驗(yàn)曾參考文獻(xiàn)[2]采用乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液不同比例（80∶10∶10、82∶10∶8、84∶8∶8）進(jìn)行洗脫。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈-無水乙醇-3%磷酸（82∶10∶8）溶液即能將指標(biāo)成分與雜質(zhì)峰徹底分開，且陰性試驗(yàn)無干擾，故采用此流動(dòng)相進(jìn)行洗脫。

采用正交設(shè)計(jì)，并根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，確定了水提工藝的最佳條件，即稱取水提取部分藥材，加入藥材量12倍體積的水，加熱提取2次，每次2h，其中第1次提取前先將藥材浸泡0.5h。

由于苦參藥材入藥后苦參堿與氧化苦參堿存在著相互轉(zhuǎn)化[3～5]，故以苦參堿、氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，比單獨(dú)測(cè)定苦參堿或氧化苦參堿的轉(zhuǎn)移率更合理。

[1] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：188.

[2] 王 穎，王秋香.高效液相色譜法測(cè)定婦炎康濃縮丸中苦參堿的含量[J].中國藥房，2005，16（24）：1901.

[3] 賈敏鴿，孫文基.苦參及其復(fù)方中苦參堿與氧化苦參堿的轉(zhuǎn)化研究[J].藥物分析雜志，2003，23（2）：90.

[4] 陸蘊(yùn)如，楊鐘柯，董育妹.苦參在復(fù)方中化學(xué)成分變化的研究[J].中國中藥雜志，1996，21（7）：412.

[5] 宋小妹，考玉萍.潔身洗劑中苦參化學(xué)成分轉(zhuǎn)化研究[J].西北藥學(xué)雜志，2000，15（6）：257.

Optimization of the Extraction Technology of Jingfang Zhiyang Granules by Orthogonal Test

LIAO Yin-gen，DING Zhi-jun，LUO Mei-lan，XU Shi-gui（Jiangxi Provincial Special Hospital of Skin，Nanchang 330001，China）

OBJECTIVE：To study the extraction procedure for Jingfang zhiyang granules.METHODS：With extract yield and the content of matrine and oxymatrine as indexes，orthogonal test was used to investigate the effect of water amount，extraction times and the time of extraction on extraction technology.RESULTS：The optimum process was as follows：decoction pieces as sample，adding 12times amount of water，extracting 2times，2hours for each time.CONCLUSION：The extraction process is stable and reliable for industrial production.

Jingfang zhiyang granules；Matrine；Oxymatrine；Orthogonal test；HPLC

R283.624；R284.2

A

1001-0408（2011）39-3673-03

2011-03-15

2011-04-11）