冶平

（青海省九康醫(yī)藥保健品有限公司，青海 西寧810001）

藏藥五味麝香片是由麝香、訶子（去核）、黑草烏、木香、藏菖蒲等5 味中藥制成的片劑，具有消炎，止痛，祛風(fēng)的功效。用于扁桃體炎、咽峽炎、流行型感冒、炭疽病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)痛、胃痛，牙痛。方中訶子為君藥，為控制其質(zhì)量，我們?cè)趨⒖加嘘P(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上[1-4]，采用高效液相色譜法測(cè)定五味麝香片中沒(méi)食子酸的含量，該方法準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、專(zhuān)屬性強(qiáng)、適用面廣，可為產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

LC-10ATVP 二元泵（島津公司）；Rheodyne 7725 進(jìn)樣器（美國(guó)）；SPD-M10AVP 二極管陣列檢測(cè)器（島津公司）；Class-VP 液相色譜工作站（島津公司）；Milli-Q 超純水裝置。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。水為重蒸水并經(jīng)0.45 μm 濾膜過(guò)濾。對(duì)照品沒(méi)食子酸(C7H6O5，S1)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為749-200008。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.60 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇－水－磷酸 (8∶92∶0.01)，流速：1 mL/min; 檢測(cè)波長(zhǎng)為273 nm，AUFS：0.01；柱溫30℃，理論塔板數(shù)按沒(méi)食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于1 000，見(jiàn)圖1。

圖1 色譜分離圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品1.2 mg置10 mL 容量瓶中，甲醇定容，即得。

2.2.2 供試品溶液 取五味麝香片10 片，研細(xì)，混勻，精密稱(chēng)定1 g，置具塞錐形瓶中，加CH3OH 20 mL，放置在80℃水浴加熱回流30 min，取出，冷卻，過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，殘?jiān)蛹状枷磾?shù)次，用CH3OH 定容至25 mL 量瓶中，搖勻，過(guò)0.45 μm 的微孔濾膜，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線 性 關(guān) 系 分別精密吸取對(duì)照品溶液4.0，8.0，12.0，16.0，20.0 μL，依次進(jìn)樣。測(cè)定沒(méi)食子酸峰面積積分值，以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程Y=280 504.7X+67 752.6，r=0.999 4，表明沒(méi)食子酸在0.48 ～2.4 μg 呈良好線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μL 連續(xù)進(jìn)樣5 次，分別測(cè)定沒(méi)食子酸峰面積值為2 945 096，2 936 560，2 929 019，3 016 840，3 019 795，得RSD為1.20%。

2.3.3 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)五味麝香片，分別按“供試品溶液”項(xiàng)下操作，制備5 份供試液，進(jìn)樣測(cè)定沒(méi)食子酸含量分別為2.40，2.36，2.32，2.41，2.40 mg/g，RSD為1.52%。

2.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取五味麝香片樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，在12 h 內(nèi)，每隔1 h進(jìn)樣10 μL，測(cè)定沒(méi)食子酸的峰面積積分值分別為3 409 867，3 376 158，3 367 430，3 343 466，3 306 149。RSD為1.51%，說(shuō)明沒(méi)食子酸在12 h 內(nèi)穩(wěn)定，符合樣品測(cè)定條件。

2.3.5 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，即取已知含量的樣品，分別加入一定量的沒(méi)食子酸對(duì)照品，按樣品測(cè)定方法測(cè)定沒(méi)食子酸含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。2.4 樣品含量測(cè)定 精密吸取對(duì)照品和供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣3 次，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中沒(méi)食子酸含量，其結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 沒(méi)食子酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 三批供試品中沒(méi)食子酸的測(cè)定結(jié)果

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)采用HPLC 測(cè)定藏藥五味麝香片中沒(méi)食子酸的含量方法，該法精確、重現(xiàn)性好，可作為藏藥五味麝香片中沒(méi)食子酸質(zhì)量控制的測(cè)定方法。實(shí)驗(yàn)中曾用甲醇－水為流動(dòng)相，但分離效果不佳，雜質(zhì)對(duì)沒(méi)食子酸吸收峰有干擾，改用甲醇－水－磷酸(8∶92∶0.01)為流動(dòng)相后，沒(méi)食子酸吸收峰與雜質(zhì)吸收峰可得到較好的分離，此方法適合于測(cè)定藏藥五味麝香片中沒(méi)食子酸的含量。

[1]茅向軍,許乾麗,熊慧林,等.高效液相色譜法測(cè)定熱淋清膠囊中沒(méi)食子酸的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2002，27(8)：589-591.

[2]沙明, 陳吉文. 高效液相色譜法測(cè)定地榆中沒(méi)食子酸的含量[J].中國(guó)中藥雜志，1999，24(2)：99-100.

[3]李?lèi)?ài)群,蔡葵花,林勵(lì).薄層掃描法測(cè)定利喉樂(lè)含片中沒(méi)食子酸的含量[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，1999，18(1)：64-66.

[4]卞阿鳳,常越萍,金蓉鸞.石明合劑中沒(méi)食子酸含量測(cè)定[J].中國(guó)中藥雜志，1994，19(5)：287-288.