劉春風(fēng)

（江蘇綠源工程設(shè)計研究有限公司，江蘇 連云港 222000）

薺菜中總黃酮的提取及含量測定

劉春風(fēng)

（江蘇綠源工程設(shè)計研究有限公司，江蘇 連云港 222000）

研究了從薺菜中提取總黃酮的工藝條件及其含量的測定條件，探討了乙醇濃度、提取時間和投料液固比（薺菜質(zhì)量與乙醇用量比）對提取率的影響。結(jié)果表明最佳提取工藝為：乙醇濃度70%，提取時間11 h，固液比為1∶14；用分光光度法進(jìn)行含量測定的適宜條件為：測定波長為510 nm，NaNO25%、Al（NO3）310%、NaOH 4%，測定薺菜提取物中總黃酮含量為0.1%。

薺菜；總黃酮；提?。粶y定

薺菜別名野薺、野菜、地菜、護(hù)心草、雞冠菜，為十字花科植物，生長于田野、路邊及庭院，是藥食同源的植物。由于薺菜含有黃酮類化合物、生物堿、十幾種氨基酸等成分，在心腦血管疾病的防治、止血等方面具有較多的應(yīng)用［1］。薺菜還可作氣管炎、高血壓病的輔助藥膳［2］，但除國外將其加工成止血劑外，國內(nèi)外未見有關(guān)對其成分進(jìn)行分離提取的研究。由于黃酮類化合物有許多重要的藥理作用而廣受科研人員的關(guān)注，本課題旨在對薺菜中黃酮類化合物進(jìn)行提取及含量的測定研究，為薺菜的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與試劑

ZFQ 85A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，722型分光光度計，KMD型電熱套，索氏提取器，粉碎機(jī)。

蘆丁，乙醇，乙酸乙酯，石油醚，亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉（試劑均為分析純）。

2 實驗步驟

2.1 實驗流程

2.2 原料預(yù)處理

將新鮮的薺菜去掉黃葉、根，洗凈陰干，然后粉碎成粉末狀原料備用。

2.3 總黃酮提取操作

取薺菜粉20 g用濾紙包好，置索氏提取器中，加乙醇。加熱回流數(shù)h后，將提取液倒入錐形瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將乙醇蒸發(fā)掉，在錐形瓶內(nèi)得到黑褐色的物質(zhì)，即為粗提黃酮浸膏。加熱水溶解，水溶液倒入分液漏斗，用石油醚萃取，直至石油醚層無色（目的是除去其中葉綠素和脂），棄去石油醚層，再用乙酸乙酯多次萃取水溶液中的總黃酮，萃取液合并，后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)至干，得精制總黃酮化合物。

2.4 總黃酮的測定

2.4.1 待測液的制備

將提取的總黃酮用60%的乙醇定容于25 mL容量瓶中，搖勻，待測。

2.4.2 對照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對照品200 mg，置于100 mL容量瓶中，加60%的乙醇，置水浴上微熱使溶解，放置使其冷卻，再加60%的乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取10 mL，置100 mL容量瓶中，加60%的乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得每mL中含蘆丁0.2mg。

2.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對照品使用液 （0.2 mg·mL-1）0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于 10 mL比色管中，各加入30%乙醇使為5 mL，各精確加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min；再各精確加入10%硝酸鋁0.3 mL，搖勻，放置6 min；加4%氫氧化鈉4 mL，分別用水稀釋至10 mL，搖勻，放置15 min。于510 nm波長測定吸光度，如圖1所示。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.4.5 樣品的定量

精密吸取黃酮待測液1 mL，置于10 mL比色管中（下同2.4.3），測定吸光度，計算總黃酮含量，計算公式如下［3］：

式中：M—測定液黃酮的量，mg；W—稱樣量，g；V1—提取定容體積，mL；V2—測定液體積，mL。

2.4.6 樣品的定性檢測［4～7］

（1）鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取待測液1.0 mL放在測試瓶中，加入少許鎂粉振搖，滴加幾滴濃鹽酸，產(chǎn)生泡沫反應(yīng)，反應(yīng)完后溶液呈橙紅色，表明有黃酮類化合物。

（2）氨水反應(yīng)：取待測液1.0 mL放在測試瓶中，滴加幾滴氨水振搖，反應(yīng)完后溶液呈黃色，表明有黃酮類化合物。

（3）硝酸鋁反應(yīng)：取待測液1.0 mL放在測試瓶中，滴加幾滴硝酸鋁振搖，反應(yīng)完全后溶液呈黃色，表明有黃酮類化合物。

（4）三氯化鋁反應(yīng)：取待測液1.0 mL放在測試瓶中，滴加幾滴三氯化鋁振搖，反應(yīng)完全后溶液呈黃色，表明有黃酮類化合物。

（5）氯化鐵反應(yīng)：取待測液1.0 mL放在測試瓶中，滴加幾滴三氯化鐵振搖，反應(yīng)完全后溶液呈綠褐色，表明有黃酮類化合物。

3 結(jié)果與討論

3.1 提取條件的確定

3.1.1 溶劑的選擇

從黃酮類化合物特性來看極性較大，很易溶于極性大的溶劑，目前使用的溶劑主要是乙醇、丙酮、乙醚和水等極性大的溶劑。一般甲醇提取中草藥中的黃酮化合物效果比較好，但是有毒副作用，而丙酮和乙醚價格昂貴，有毒性，所以一般不采用。水對黃酮苷有極好的溶性，價廉易得，但對雙黃酮等成分的溶解有限，而乙醇無毒，且對黃酮的溶解較好，故乙醇是較理想的萃取溶劑。

3.1.2 乙醇濃度的選擇

在提取時間為10 h，固液比為1∶12.5的情況下，考察不同濃度乙醇即60%、70%、80%、90%、100%的乙醇對總黃酮化合物提取產(chǎn)率的影響。實驗結(jié)果如圖2所示。由圖2可以看出，70%的乙醇對薺菜中總黃酮的提取效果最好。

圖2 乙醇濃度對總黃酮提取的影響

3.1.3 提取時間的確定

選用70%的乙醇，溶劑量為250 mL的情況下，考察不同的提取時間即 8 h、9 h、10 h、11 h、12 h對總黃酮化合物提取產(chǎn)率的影響。實驗結(jié)果如圖3所示。由圖3可以看出，11 h提取效果最好，而再延長一定時間之后變化很小，故時間選取為11 h。

圖3 提取時間對總黃酮的影響

3.1.4 固液比的確定

選用70%的乙醇，在時間為11 h情況下，考察不同的固液比即 1∶9.5、1∶11、1∶12.5、1∶14、1∶15.5對總黃酮化合物的提取產(chǎn)率的影響。實驗結(jié)果如圖4所示。

圖4 固液比對總黃酮的影響

由圖4可以看出，隨著固液比的增加，吸光度迅速增加，當(dāng)固液比超過1∶12.5時，吸光度增加幅度極小。從提取效果、減少溶劑用量和降低濃縮負(fù)荷等方面綜合考慮，選用1∶12.5的固液比。

3.1.5 最佳條件確定

在上述水平實驗的基礎(chǔ)上，得到正交實驗的考察因素及水平，設(shè)計了三因素三水平正交實驗。由表1設(shè)計出正交實驗表，如表2所示。

表1 考察的因素及水平

表2 實驗方案及結(jié)果分析表

根據(jù)R的大小，決定各因素的主次因素，在本實驗中R1＞R3＞R2，所以三因素的重要性依次為A-C-B，通過分析表2，根據(jù)最大的K值選出因素中的一個最佳水平即為最佳組合條件，A2B3C3，即薺菜總黃酮的最佳提取工藝條件為：用70%的乙醇提取11h，液固比為1∶14。

3.2 測定條件的確定

3.2.1 測定波長的選擇

精密量取蘆丁對照品1 mL，置于10 mL比色管中，加入30%乙醇直至5 mL，精確加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min；再精確加入10%硝酸鋁0.3 mL，搖勻，放置6 min；加4%氫氧化鈉 4 mL，分別用水稀釋至 10 mL，搖勻，放置15 min，在450～550 nm波長之間測定吸光度，結(jié)果在510 nm波長處有最大吸光度，所以本實驗選用510 nm為測定波長。

3.2.2 亞硝酸鈉濃度的選擇

準(zhǔn)確吸取1.50 mL 0.2 mg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，分別加入2%、4%、6%、8%、10%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，其余同3.2.1項。結(jié)果表明，當(dāng)亞硝酸鈉濃度在2%～8%范圍內(nèi)，吸光度相對穩(wěn)定，當(dāng)濃度大于10%時，吸光度有增大的趨勢，本實驗將亞硝酸鈉濃度定為5%。

3.2.3 硝酸鋁濃度的選擇

準(zhǔn)確吸取1.50 mL 0.2 mg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，分別加入2.5%、5%、7.5%、10%、12.5%、15%硝酸鋁0.3 mL，其余同3.2.1項。結(jié)果表明，吸光度呈不斷上升趨勢，當(dāng)濃度在8%～12%時，吸光度相對穩(wěn)定，故將濃度定為10%。

3.2.4 氫氧化鈉濃度的選擇

準(zhǔn)確吸取1.50 mL 0.2 mg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，分別加入1%、3%、5%、7%、9%氫氧化鈉溶液4 mL，其余同3.2.1項。結(jié)果表明，當(dāng)濃度大于2.5%時，吸光度相對穩(wěn)定，本實驗將氫氧化鈉濃度定為4%。

4 結(jié)論

通過大量的實驗得到了從薺菜中提取總黃酮化合物的最佳提取工藝條件及總黃酮含量的適宜測定條件。本研究為薺菜的開發(fā)利用提供了一定的理論依據(jù)。

4.1 最佳提取工藝條件

（1）70%的乙醇對薺菜總黃酮的提取效果最好；

（2）固液比為1∶14對薺菜總黃酮的提取產(chǎn)率較高；

（3）提取時間為11 h對薺菜總黃酮的提取效果最好；

4.2 總黃酮含量的最佳測定條件

（1）測定波長為 510 nm，用 5%的 NaNO20.3 mL，10%的 Al（NO3） 30.3 mL，4%的 NaOH4mL測定結(jié)果最佳；

（2）薺菜中提取的總黃酮含量為0.1%。

［1］ 位思清.薺菜的開發(fā)與利用［J］.食品科技，2003，（1）：19.

［2］ 王隧義，高致明，田朝陽.薺菜.野菜采集與加工［M］.北京：科學(xué)技術(shù)出版社，1995.

［3］ 于村，俞莎，沈向紅.中草藥總黃酮的提取和含量測定［J］.浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2002，14（7）：81-82

［4］ 吳立軍.中藥化學(xué)［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2003.108.

［5］ 邵鐵華，徐雅琴，付琴.不同品種黑穗醋粟葉片總黃酮含量的測定［J］.化學(xué)工程師，2002，（5）：32-32.

［6］ 許宗運(yùn).南疆二十余種植物總黃酮含量的研究［J］.塔里木農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報，2002，14（4）：10.

Extraction and Determination of Total Flavonoid from Shepherd＇s-purse

LIU Chun-feng
（Jiangsu Lvyuan Design Engineering Co.， Ltd.， Lianyuguang 222000， China）

The extraction technology of total flavonid from shepherd’s-purse was studied and the analysis condition of the natural products was investigated.The influences of ethanol concentration，extraction time and the ratio of the amount of liquid to solid （i.e.ratio of shepherd’s-purse mass to ethanol volume） on yield was discussed.The results showed that the optimum extraction condition was as followed： ethanol concentration 70%，extraction time 11h as well as ratio of shepherd’s-purse mass to ethanol volume was 1 ∶14.The suitable determination condition of total flavonid content using spectrophotometry in NaNO2-Al （NO3）3-NaOH system was as followed：wave length was 510nm，content of NaNO2，Al （NO3）3and NaOH y was 5%，10%and 4%respectively.Under the condition the concentration of total flavoid in the extractor of shepherd’s-purse determined was 0.1%.

shepherd＇s-purse； total flavonid； extraction； determination

O 657.3

A

1671-9905（2011）03-0010-04

劉春風(fēng)（1980-），男，漢，江蘇省連云港市江蘇綠源工程設(shè)計研究有限公司工程師

2010-11-15