彭麗麗，肖蘇萍

（1.北京勃然制藥有限公司，北京 102204；2.中國藥材公司，北京 100195）

益母草滴丸中水蘇堿的含量測定

彭麗麗1*，肖蘇萍2

（1.北京勃然制藥有限公司，北京 102204；2.中國藥材公司，北京 100195）

目的：建立益母草滴丸的含量測定方法。方法：采用HPLC測定鹽酸水蘇堿的含量，Waters Spherisorb SCX陽離子交換樹脂柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：15mmol·L－1磷酸二氫鉀溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）；柱溫：室溫；檢測波長：192nm。結果：鹽酸水蘇堿在0.0214～0.428 mg·mL－1線性關系良好（r＝0.9999），平均回收率為100.42%，RSD＝1.02%。結論：建立的含量測定方法簡便、準確、重復性好，可用于益母草滴丸質量控制。

益母草滴丸；水蘇堿；高效液相色譜法；含量測定

益母草滴丸是益母草經過提取制成的滴丸，是在衛(wèi)生部藥品標準收載的益母草顆粒標準（WS3-B-1404-93）中的處方和工藝不變的情況下改變劑型而得。具有活血調經功能，用于經閉、痛經及產后瘀血腹痛。益母草是最常用的中藥之一，為唇形科植物益母草的干燥地上部分。益母草主要化學成分為益母草堿、水蘇堿、益母草啶、益母草寧等［1-3］。其有效成分是以水蘇堿和益母草堿為代表的總生物堿，其中水蘇堿具有興奮子宮的作用，且含量較高，易于測定［4］，常作為質控指標。因此，本實驗選擇君藥益母草中的水蘇堿（以鹽酸水蘇堿計）作為益母草滴丸質量控制指標。

1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀；鹽酸水蘇堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110712-200408）；益母草滴丸（北京勃然制藥有限公司，批號：050402，050405，050406，050407），磷酸二氫鉀為分析純，水為重雙蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

Waters Spherisorb SCX陽離子交換樹脂柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：15mmol·L－1磷酸二氫鉀溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）；柱溫：室溫；檢測波長：192nm；流速：1.0mL·min－1；理論板數以鹽酸水蘇堿峰計算應不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸水蘇堿對照品適量，加流動相制成 0.1 mg·mL－1的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加乙醇50mL，稱定重量，超聲（250 W，40 kHz）處理30min，放冷，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25mL，過氧化鋁－活性炭柱（堿性氧化鋁5 g，濕法裝柱，上覆層析用40～60目活性炭2 g，乙醇預洗），收集乙醇洗脫液100mL，蒸干，殘渣加流動相適量使溶解，轉移至10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，以微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 方法專屬性試驗

按處方組成，取缺益母草藥材的益母草滴丸陰性樣品1.0g，精密稱定，然后按供試品制備項下的方法制備陰性對照溶液，分別吸取陰性對照溶液與供試品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖與峰面積，見圖1～3。結果表明，陰性對照品的圖譜中鹽酸水蘇堿位置上無峰出現(xiàn)，表明陰性無干擾。

圖1 鹽酸水蘇堿對照品HPLC圖

2.5 線性關系的考察

圖2 益母草滴丸樣品HPLC圖

圖3 益母草滴丸陰性樣品HPLC圖

精密稱取鹽酸水蘇堿對照品10.7 mg，置25mL容量瓶中，加水使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制成0.428 mg·mL－1的鹽酸水蘇堿溶液。精密量取對照品溶液5.0，2.5，1.0，0.5mL，分別置于10mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，質量濃度分別為0.214，0.107，0.0428，0.0214mg·mL－1，上述色譜條件下，分別進樣10μL，記錄峰面積；以濃度（C）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y＝2072X－1.4499，r＝0.9999。試驗結果表明鹽酸水蘇堿的濃度在0.0214～0.428 mg·mL－1與峰面積呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗

取濃度為0.107 mg·mL－1的鹽酸水蘇堿對照品溶液，在上述色譜條件下重復進樣5次，每次10μL，記錄鹽酸水蘇堿色譜圖與峰面積，計算RSD＝0.26%，結果表明精密度良好。

2.7 重復性試驗

取同一批號的益母草滴丸（批號：050402），按2.3方法分別制備5份供試品液，精密吸取供試品液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖與峰面積，計算RSD＝0.45%，結果表明重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取同一批號的益母草滴丸（批號：0504027），按2.3方法制備5份供試品液，分別于0，2，4，6，8，12，24 h精密吸取供試品液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖與峰面積，計算RSD＝0.52%，表明樣品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗

取已知含量為9.399 mg·g－1的益母草滴丸（批號：050402）共5份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，再精密稱取鹽酸水蘇堿對照品5份，分別加入上述供試品中，然后按上述色譜條件操作測定，記錄色譜圖，考察本方法的加樣回收率，結果見表1。

表1 鹽酸水蘇堿加樣回收率試驗

2.10 樣品含量測定

按上述方法對050405，050406，0504073批樣品進行含量測定，每批測定2次，記錄色譜圖與峰面積，計算鹽酸水蘇堿含量分別為8.75，9.39，9.24 mg·g－1。

3 討論

3.1 流速的選擇

曾試用了0.8，0.9，1.0mL·min－1共 3種流速進行試驗，結果流速為1.0mL·min－1時鹽酸水蘇堿色譜峰與其他成分的峰能較好地分離，峰形較好。故采用1.0mL·min－1的常規(guī)流速。

3.2 提取條件的考察

對提取方法、提取溶劑、提取時間等進行了比較實驗，結果表明，樣品1.0 g采用乙醇50mL、超聲30min即可提取完全。同時在氧化鋁上層覆活性炭進行脫色，經過優(yōu)選采用2 g即可；經過實驗優(yōu)選了洗脫體積，發(fā)現(xiàn)采用100mL即可洗脫完全，最終確定了該除雜方法。

3.3 流動相選擇

益母草滴丸由益母草提取浸膏加入輔料滴制而成，由于鹽酸水蘇堿的紫外吸收為末端吸收，且其極性較大，故很難以反相HPLC進行測定，有文獻［5］采用強陽離子交換柱獲得了較好的分離。在參考文獻的基礎上［5］，試用了流動相：15mmol·L－1磷酸二氫鉀溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）、0.05%三乙胺和0.025 mol·L－1的磷酸二氫鉀（用磷酸調至pH 2），結果使用15mmol·L－1磷酸二氫鉀溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）作為流動相峰形較好，也較穩(wěn)定，鹽酸水蘇堿色譜峰與其他成分較好地分離，故選此為流動相。

實驗結果表明該方法操作簡便、可行，重復性好，可用于控制產品質量。

［1］唐盈，王曉強.四種含益母草中成藥中水蘇堿的含量測定［J］.藥物分析雜志，1989，16（3）：21-23.

［2］晁志，周秀佳.益母草類中藥的研究概況和進展［J］.中草藥，1998，29（6）：414-417.

［3］張嫻，彭國平.益母草屬化學成分研究進展［J］.天然產物研究與開發(fā)，2003，15（2）：162-166.

［4］劉莉，李慧金.益母草提取工藝優(yōu)選［J］.中國實驗方劑學雜志，2003，9（2）：3-5.

［5］姜舜堯.益母草藥材中水蘇堿成分的高效液相色譜法分析［J］.藥物分析雜志，2001，21（4）：243-245.

Determination of Stachydrine in Yimucao Dripping Pills

PENG Li-li1，XIAO Su-ping2
（1.Beijing boran pharmacy Co.，LTD.，Beijing 102204，China，2.China National Corp.of Traditional＆Herbal Medicine，Beijing 100195，China）

Objective：To establish a method for the determination of yimucao dripping pills.Methods：HPLC was adopted with Waters Spherisorb SCX Cation Exchange Resin column（4.6mm×250mm，5μm）；The mobile phase was 15mmol·L-1monopotassium phosphate solution（with 0.04% triethylamine and 0.15%phosphoric acid，column temperature was room temperature，the detection wavelength was 192nm.Results：The linear range of stachydrine was 0.0214～0.428 mg·mL-1（r＝0.9999）.The average recovery was 100.42%and RSD was 1.02%.Conclusion：Themethod is simple，accurate.It has good reproducibility and can be used for quality control of yimucao dripping pills.

Yimucao dripping pills；Stachydrine；HPLC；Determination

*彭麗麗，E-mail：peng＿lili＠163.com

2010-11-05）