陳 文，任 超，劉 嬌，王 祎，郭月逸

(北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理學(xué)院，北京市生物活性物質(zhì)與功能食品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100191)

玫瑰花茶對(duì)束縛應(yīng)激小鼠曠場(chǎng)活動(dòng)性的影響

陳 文，任 超，劉 嬌，王 祎，郭月逸

(北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理學(xué)院，北京市生物活性物質(zhì)與功能食品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100191)

旨在探討玫瑰花茶對(duì)束縛應(yīng)激小鼠自主探究活動(dòng)能力的影響。將8周齡雄性BALB/C小鼠分為4組:正常對(duì)照組(C組)、應(yīng)激對(duì)照組(S組)、低劑量玫瑰花茶組(L-RE組)、高劑量玫瑰花茶組(H-RE組)。S、L-RE、H-RE組小鼠每日給與1h的束縛刺激，30min后分別灌喂水和相應(yīng)劑量的玫瑰花茶。連續(xù)6周后用Smart小動(dòng)物行為活動(dòng)記錄分析系統(tǒng)進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，S組小鼠在曠場(chǎng)周邊區(qū)域、中央?yún)^(qū)域的活動(dòng)性分別比C組小鼠減弱了10.8% (P＜0.05)和15.7%，快速移動(dòng)時(shí)間百分率顯著降低(P＜0.05)。與S組相比較，L-RE組小鼠在曠場(chǎng)周邊區(qū)域、中央?yún)^(qū)域的探究活動(dòng)性明顯提升(P＜0.05)，不動(dòng)時(shí)間百分率下降(P＜0.05);H-RE組小鼠在周邊區(qū)的探究活動(dòng)性提高(P＜0.05)，不動(dòng)時(shí)間百分率下降(P＜0.05)。以上結(jié)果顯示玫瑰花茶能夠縮短束縛應(yīng)激小鼠的不動(dòng)時(shí)間，提高小鼠在曠場(chǎng)中央和周邊區(qū)域的自主探究活動(dòng)能力，起到緩解應(yīng)激小鼠焦慮狀態(tài)的作用。

玫瑰花，曠場(chǎng)，束縛應(yīng)激，小鼠

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

玫瑰花 購(gòu)自平安百合大藥房;小鼠60只SPF級(jí)，購(gòu)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

小鼠曠場(chǎng)箱 西班牙Smart小動(dòng)物行為活動(dòng)記錄分析系統(tǒng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 玫瑰花茶的制備 稱取玫瑰花4.5、9g，分別浸于100mL沸水中，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液分別作為高劑量玫瑰花茶和低劑量玫瑰花茶。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 8周齡雄性BALB/C小鼠60只，在光-暗周期為12h、溫度20～22℃的環(huán)境下適應(yīng)飼養(yǎng)一周后，按體重隨機(jī)分成四組:正常對(duì)照組(C組)、應(yīng)激對(duì)照組(S組)、低劑量玫瑰花茶組(L-RE組)、高劑量玫瑰花茶組(H-RE組)，每組15只。各組小鼠均自由攝食飲水，S組、L-RE組、H-RE組小鼠每日置于帶有透氣孔的束縛管中，給與1h的束縛刺激，30min后分別灌喂0.4mL水、低劑量玫瑰花茶、高劑量玫瑰花茶。連續(xù)喂飼6周，于第6周結(jié)束時(shí)進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 曠場(chǎng)箱是一個(gè)單邊長(zhǎng)為27.5cm、總邊長(zhǎng)為110cm的正方形，在圖形上將該正方形區(qū)分為周邊、中央兩個(gè)區(qū)域。中央?yún)^(qū)為套在大正方形中的一個(gè)單邊長(zhǎng)為13.75cm、總邊長(zhǎng)為55cm的小正方形，此小正方形到大正方形各邊的距離相等。小正方形與大正方形之間的區(qū)域即為周邊區(qū)。在曠場(chǎng)箱正上方安裝好攝像機(jī)，調(diào)整好影像畫(huà)面。

將小鼠置于曠場(chǎng)箱的中央，開(kāi)始計(jì)時(shí)，用西班牙Smart小動(dòng)物行為活動(dòng)記錄分析系統(tǒng)記錄并分析小鼠在曠場(chǎng)箱內(nèi)5min的自主探究情況，包括小鼠分別在周邊區(qū)、中央?yún)^(qū)內(nèi)的自主活動(dòng)性、小鼠的不動(dòng)時(shí)間、慢速移動(dòng)時(shí)間、以及快速移動(dòng)時(shí)間等。每實(shí)驗(yàn)完1只小鼠用75%酒精擦洗曠場(chǎng)箱并揮干，再進(jìn)行下一只小鼠的實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 玫瑰花茶對(duì)小鼠體重的影響

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)(分組時(shí))各組小鼠間體重?zé)o明顯差異，經(jīng)過(guò)6周的實(shí)驗(yàn)后，與C組相比較，S組的體重有所降低，顯示束縛刺激使得小鼠產(chǎn)生焦慮情緒，影響了小鼠隨齡的體重增長(zhǎng);與S組相比較，L-RE組和H-RE組小鼠體重也都明顯減輕，表明玫瑰花茶有一定減重效果。

表1 實(shí)驗(yàn)前后各組小鼠體重(g)的變化(X±SD)

2.2 玫瑰花茶對(duì)小鼠曠場(chǎng)自主活動(dòng)性的影響

Smart小動(dòng)物行為活動(dòng)記錄分析系統(tǒng)通過(guò)小鼠在曠場(chǎng)箱中的移動(dòng)運(yùn)行時(shí)間、速度、以及軌跡等不同參數(shù)來(lái)綜合給出小鼠在不同區(qū)域的自主探究活性數(shù)據(jù)。

由表2可見(jiàn)，與C組相比較，S組小鼠在周邊區(qū)域的活動(dòng)性數(shù)值明顯降低(P＜0.05)，在中央?yún)^(qū)域的活動(dòng)性也降低了15.7%，顯示束縛刺激使小鼠的自主活動(dòng)能力下降、焦慮水平提升;與S組相比較，L-RE組和H-RE組小鼠在周邊區(qū)域的探究活動(dòng)性都顯著提高(P＜0.05)，L-RE組小鼠在中央?yún)^(qū)域的探究活動(dòng)性比S組小鼠提高了34%(P＜0.05)，表明玫瑰花茶能夠提升束縛應(yīng)激小鼠的自主探究活動(dòng)性、緩解焦慮狀態(tài)。

表2 玫瑰花茶對(duì)小鼠曠場(chǎng)自主活動(dòng)性的影響(X±SD)

2.3 玫瑰花茶對(duì)小鼠曠場(chǎng)自主活動(dòng)時(shí)間與移動(dòng)速度的影響

小鼠在曠場(chǎng)箱中的移動(dòng)分為三種情況，小鼠不動(dòng)或移動(dòng)速率小于2.04cm/s時(shí)計(jì)為不動(dòng)，移動(dòng)速率介于2.04～8.16cm/s時(shí)計(jì)為慢速移動(dòng)，移動(dòng)速率大于8.16cm/s時(shí)計(jì)為快速移動(dòng)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，連續(xù)喂飼6周后，與C組相比較，S組小鼠的不動(dòng)時(shí)間百分率上升、慢速移動(dòng)時(shí)間百分率減少、快速移動(dòng)時(shí)間百分率則顯著降低(P＜0.05)，提示每日的束縛刺激使小鼠的快速移動(dòng)能力明顯減弱;與S組相比較，L-RE組和H-RE組小鼠的不動(dòng)時(shí)間百分率都顯著降低(P＜0.05)，分別下降了20.5%和22.3%，而慢速移動(dòng)和快速移動(dòng)時(shí)間百分率則均有所上升，顯示玫瑰花茶能夠明顯縮短束縛應(yīng)激小鼠在曠場(chǎng)中的不動(dòng)時(shí)間，在一定程度上提高小鼠的活動(dòng)能力。

表3 玫瑰花茶對(duì)小鼠曠場(chǎng)自主活動(dòng)時(shí)間與移動(dòng)速度的影響(X±SD)

3 討論與結(jié)論

應(yīng)激是指機(jī)體在受到各種內(nèi)外環(huán)境因素刺激時(shí)出現(xiàn)的非特異性全身反應(yīng)，有研究表明，適度的應(yīng)激對(duì)機(jī)體而言具有積極意義［6］;但長(zhǎng)期或嚴(yán)重的應(yīng)激則易對(duì)機(jī)體造成傷害，對(duì)多種疾病如心腦血管疾病、惡性腫瘤和糖尿病的發(fā)生、發(fā)展都有重要影響［1］。應(yīng)激又與焦慮和抑郁密切相關(guān)，被認(rèn)為是導(dǎo)致焦慮和抑郁的誘因。在焦慮和抑郁生物學(xué)機(jī)制的研究方面，通常利用動(dòng)物對(duì)應(yīng)激性或新異性事件的行為或生理反應(yīng)來(lái)測(cè)定動(dòng)物的焦慮狀態(tài)，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)就是經(jīng)典的方法之一［7］，主要檢測(cè)動(dòng)物的非條件性反射，利用動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境的恐懼心理和探究特性形成的矛盾沖突來(lái)考察動(dòng)物的焦慮狀態(tài)［8］。當(dāng)小鼠進(jìn)入曠場(chǎng)箱中，對(duì)新環(huán)境的恐懼使其主要在周邊區(qū)域活動(dòng)，而喜歡探究的天性又使其產(chǎn)生在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)和探究的動(dòng)機(jī)，造成了探究-回避的沖突行為，從而誘導(dǎo)焦慮產(chǎn)生。在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)、中央-周邊穿梭等自發(fā)活動(dòng)行為能有效反應(yīng)小鼠對(duì)新環(huán)境的探索欲望水平和環(huán)境適應(yīng)能力，探索欲越強(qiáng)代表環(huán)境適應(yīng)能力越強(qiáng)，焦慮水平越低［9］。1999年，王天芳［10］等人報(bào)道慢性束縛應(yīng)激使大鼠的不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)、自主活動(dòng)次數(shù)減少、穿格次數(shù)減少，表現(xiàn)出抑郁傾向。隨后，又有多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也顯示［11-12］，慢性應(yīng)激可致大鼠曠場(chǎng)行為異常，如潛伏期延長(zhǎng)、行為活動(dòng)減少等。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，束縛應(yīng)激組小鼠在曠場(chǎng)周邊和中央?yún)^(qū)域的活動(dòng)性、慢速與快速移動(dòng)時(shí)間百分率等均比正常對(duì)照組小鼠有所下降，而不動(dòng)時(shí)間百分率上升。說(shuō)明每日的束縛刺激抑制了小鼠的自主活動(dòng)能力，提升了焦慮水平。

玫瑰花作為藥食兩用的植物，其主要的功效報(bào)道集中在抗氧化、抗菌、抗病毒、以及對(duì)心血管的保護(hù)等方面。作為日常飲品，玫瑰花茶雖然常常被宣傳具有“減壓”功效，卻鮮有相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)中，在連續(xù)給予束縛應(yīng)激小鼠6周的玫瑰花茶后，與應(yīng)激對(duì)照組相比較，兩個(gè)玫瑰花茶組小鼠在曠場(chǎng)周邊區(qū)域的探究活動(dòng)性都明顯提高、在中央?yún)^(qū)域的探究活動(dòng)性也都有所增強(qiáng)，特別是低劑量玫瑰花茶組小鼠在曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域的探究活動(dòng)性比應(yīng)激對(duì)照組顯著提高了34%，兩個(gè)玫瑰花茶組小鼠的不動(dòng)時(shí)間百分率都明顯下降了20%以上。結(jié)果顯示，玫瑰花起到了緩解應(yīng)激小鼠焦慮狀態(tài)的作用，低劑量?jī)?yōu)于高劑量。長(zhǎng)期過(guò)度的應(yīng)激往往會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的氧化損傷，而玫瑰花茶組小鼠應(yīng)激狀態(tài)的緩解很可能與其抗氧化活性相關(guān)。曾佑煒等人曾報(bào)道［13］玫瑰花水提液具有良好的清除二苯代苦味酰自由基的作用。

本實(shí)驗(yàn)中另一個(gè)值得探討的問(wèn)題是，束縛刺激抑制了小鼠體重的增長(zhǎng);而與應(yīng)激對(duì)照組相比較，兩個(gè)玫瑰花茶組小鼠的體重也都減輕，這與我們此前關(guān)于玫瑰花茶功效作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合，玫瑰花茶組均多次出現(xiàn)減重效果。關(guān)于玫瑰花茶減重減壓功效及其作用機(jī)制有待于深入探討。

本文通過(guò)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，初步證實(shí)了玫瑰花茶能夠縮短束縛應(yīng)激小鼠的不動(dòng)時(shí)間，提高了其在曠場(chǎng)中央和周邊區(qū)域的自主探究活動(dòng)能力，具有一定的緩解應(yīng)激小鼠焦慮狀態(tài)的作用，為玫瑰花茶的功效研發(fā)提供一些參考依據(jù)。

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Effect of the rose extract on stressed mice in open-field test

CHEN Wen，REN Chao，LIU Jiao，WANG Yi，GUO Yue-yi
(College of Arts＆Science of Beijing Union University，Beijing Key Laboratory of Bioactive Substances and Functional Foods，Beijing 100191，China)

In order to study the effect of rose extract on the open-field test of stressed mice，8-weeks-old male BALB/C mice were divided into 4 groups:control group(C)，stressed group(S)，low-dose rose extract group(LRE)，and high-dose rose extract group(H-RE)based on their body weights.The mice of S，L-RE and H-RE group were suffered restraint stress 1h a day.6 weeks later，open-field test was determined.Results showed that compared with C group，fast-moving time(%)and the locomotive activity of S group in periphery and central area were markedly decreased(P＜0.05).Compared with S group，L-RE group had higher locomotive activity in periphery and central area and had less immobility time(%)(P＜0.05)，and H-RE group had higher locomotive activity in periphery area and less immobility time(%)(P＜0.05).The above results suggested rose extract was reducing the immobility time and improving the locomotive activity of stressed mice and showed some anxiolytic effect.

rose;the open-field test;restraint stress;mice

TS201.4

A

1002-0306(2011)09-0396-03

當(dāng)前，在我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展、轉(zhuǎn)型的階段，越來(lái)越多的心理應(yīng)激問(wèn)題引起了社會(huì)各界的重視，人們已經(jīng)逐漸認(rèn)識(shí)到應(yīng)激會(huì)影響健康和增加疾病的易感性。已有大量的研究表明，長(zhǎng)期或嚴(yán)重的應(yīng)激對(duì)多種疾病，如心腦血管疾病、惡性腫瘤和糖尿病的發(fā)生、發(fā)展都有重要影響［1］。玫瑰花為薔薇科植物玫瑰(Rosa rugosa Thunb)的干燥花蕾［2］，含有多種生物活性成分，主要包括揮發(fā)油、鞣質(zhì)、氨基酸、黃酮類、色素類、多酚類等［3-5］，其在中醫(yī)藥學(xué)中的應(yīng)用歷史悠久，具有理氣解郁、活血散淤的作用。玫瑰花的現(xiàn)代藥理學(xué)研究大多集中在抗氧化、抗菌、抗病毒、以及對(duì)心血管的保護(hù)方面。關(guān)于玫瑰花茶的“減壓”功效雖常被宣傳，但卻鮮有相關(guān)的科技文獻(xiàn)報(bào)道。本研究旨在觀察玫瑰花茶對(duì)束縛應(yīng)激小鼠曠場(chǎng)自主活動(dòng)性的影響，以初步探討玫瑰花茶之“減壓”的功效。

2010-03-21

陳文(1966-)，女，博士，副教授，研究方向:營(yíng)養(yǎng)與功能食品。

北京聯(lián)合大學(xué)自然科學(xué)類項(xiàng)目(2009)。