李志偉,崔 哲,劉 波,趙云超

(1.河北科技大學(xué)化學(xué)與制藥工程學(xué)院,河北石家莊 050018;2.河北遠(yuǎn)征藥業(yè)有限公司,河北石家莊 050041)

高效毛細(xì)管電泳法用于麻保沙星的測(cè)定

李志偉1,崔 哲1,劉 波2,趙云超1

(1.河北科技大學(xué)化學(xué)與制藥工程學(xué)院,河北石家莊 050018;2.河北遠(yuǎn)征藥業(yè)有限公司,河北石家莊 050041)

建立了一種高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定麻保沙星原料藥含量的方法。采用未涂層石英毛細(xì)管柱,以15 mmol/L硼酸鈉緩沖液 (p H值為9.2)為電泳介質(zhì),分離電壓為20 kV,采用高度差進(jìn)樣10 s,檢測(cè)波長(zhǎng)為295 nm,麻保沙星在10～100μg/m L范圍內(nèi)線性良好,平均回收率為100.2%,RSD值為0.97%。

麻保沙星;原料藥;高效毛細(xì)管電泳;測(cè)定

圖1 麻保沙星的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structure of marbofloxacin

麻保沙星(marbofloxacin)(結(jié)構(gòu)式見圖1)是一種動(dòng)物專用的第3代氟喹諾酮類抗菌藥,具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)的特征,其生物利用度高,且毒性低,較安全,被列為動(dòng)物專用藥[1-2]。目前已有 HPLC法[3-8]、LC-M S法[9-10]測(cè)定麻保沙星的報(bào)道。毛細(xì)管電泳是一種經(jīng)濟(jì)、快速、高效的分離分析方法,筆者建立了專屬性強(qiáng)、精確高效的毛細(xì)管電泳法測(cè)定麻保沙星原料藥含量的方法,為麻保沙星的質(zhì)量監(jiān)控提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器及試劑

毛細(xì)管電泳儀,北京彩陸科學(xué)儀器有限公司提供;CL102型紫外檢測(cè)器,HW-2000型色譜工作站,石英毛細(xì)管,河北永年銳灃色譜器件公司提供。

硼酸鈉,磷酸二氫鈉,磷酸氫二鈉,磷酸,均為分析純;水為重蒸水。所有樣品及緩沖液均經(jīng)0.45μm濾膜過濾。

麻保沙星樣品,批號(hào)為 20091002,20091005,20091008,實(shí)驗(yàn)室自制;麻保沙星對(duì)照品,批號(hào)為Y0000819,ID0035Y7,購自歐洲藥典委員會(huì)。

1.2 操作步驟

1.2.1 色譜條件

毛細(xì)管柱為未涂層石英毛細(xì)管柱(75μm×70 cm),運(yùn)行緩沖液為15 mmol/L的硼酸鈉緩沖液 (p H值為9.2,使用前先脫氣),采用高度差進(jìn)樣10 s,分離電壓為20 kV,檢測(cè)波長(zhǎng)為295 nm,室溫下操作。

1.2.2 毛細(xì)管柱的平衡

新柱使用前先用1 mol/L的NaOH于室溫沖洗60 min,用重蒸水沖洗30 min,再用運(yùn)行緩沖液沖洗30 min。柱使用完畢,用0.1 mo l/L的NaOH沖洗5 m in,用重蒸水沖洗5 min,再用空氣吹干毛細(xì)管柱。

每次進(jìn)樣前依次用1 mol/L的NaOH、重蒸水、運(yùn)行緩沖液分別沖洗10 min,實(shí)驗(yàn)過程中每2次進(jìn)樣后用水、0.1 mol/L的NaOH、水各沖洗2 min,用運(yùn)行緩沖液沖洗5 min。

1.2.3 溶液配置

15mmol/L硼酸鈉緩沖液 精密稱取硼酸鈉2.860 g于500 m L容量瓶中,加水溶解定容,使其濃度為15 mmol/L,過0.45μm濾膜,取濾液超聲10 min,待用。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve

1 mg/m L的麻保沙星樣品溶液 精密稱取麻保沙星10 mg,放入10 m L容量瓶中,加水溶解定容,使其質(zhì)量濃度為1 mg/mL。精密移取該溶液,依次加水稀釋得到一系列質(zhì)量濃度的溶液:100,80,60,40,20,10 μg/m L。

1.2.4 線性范圍

依次將1.2.3項(xiàng)下配制好的一系列質(zhì)量濃度的麻保沙星溶液進(jìn)樣,以質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo),峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得到的回歸方程為 Y=362.75X+159.11,r=0.999 3(n=6),標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示。

結(jié)果表明,在此方法下麻保沙星在10～100μg/m L范圍內(nèi)線性良好。

表1 精密度Tab.1 Precision

1.2.5 精密度

在上述實(shí)驗(yàn)條件下,將80μg/mL的麻保沙星樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次,考察此方法的精密度,結(jié)果如表1所示。由表1可知,RSD值為1.2%,表明該方法的精密度較高。

1.2.6 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取0.64,0.80,0.92 g麻保沙星對(duì)照碼,分別制成64,80,92μg/m L的溶液,測(cè)其峰面積,再加入80μg/mL樣品溶液1 mL,測(cè)其峰面積,結(jié)果如表2所示。由結(jié)果計(jì)算可知,該方法的平均回收率為100.2%,RSD值為0.97%。

表2 回收率Tab.2 Recovery

2 結(jié)果與討論

2.1 緩沖液p H值的選擇

圖3 麻保沙星樣品在p H值為9.2時(shí)高效毛細(xì)管電泳圖譜Fig.3 Chromatogram of sample of marbofloxacin as p H is 9.2

在相同質(zhì)量濃度下比較了硼酸鈉緩沖液、磷酸鹽緩沖液和硼砂-磷酸鹽緩沖液3種緩沖液體系,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)硼酸鈉緩沖液對(duì)麻保沙星的分離較為理想,所以實(shí)驗(yàn)選擇硼酸鈉為毛細(xì)管電泳的緩沖液。

一般溶液p H值的大小影響毛細(xì)管表面特性及柱壁與溶質(zhì)的電荷差異,改變其相互作用,進(jìn)而改變分離效果。實(shí)驗(yàn)考察了在15 mmol/L硼酸鈉溶液中加入磷酸調(diào)節(jié)p H值為8.0,8.5,9.2和用0.1 mol/L的NaOH調(diào)節(jié)p H值為10.0。結(jié)果表明,當(dāng)p H值為9.2時(shí)峰型較好,出峰時(shí)間適中(見圖3)。當(dāng)p H值較低時(shí)電滲流較小,遷移時(shí)間較長(zhǎng);而p H值大于9.2時(shí)電滲流較大,出峰時(shí)間縮短但峰型較差。最終選擇p H值為9.2的硼

酸鈉溶液作為緩沖液。

2.2 緩沖液濃度的選擇

圖4 分離電壓-時(shí)間關(guān)系曲線Fig.4 Separation voltage-time curve

緩沖液濃度是一個(gè)很重要的指標(biāo),它的作用比較復(fù)雜,增加濃度,使離子強(qiáng)度增加,因此明顯地改變緩沖液的容量,減少溶質(zhì)和管壁之間、被分離的粒子和粒子之間的相互作用,從而改善分離[11]。但是在大多數(shù)情況下,隨著濃度的增加,電滲流降低,溶質(zhì)在毛細(xì)管內(nèi)的遷移速度下降,因此遷移時(shí)間延長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)考察了不同濃度硼酸鈉緩沖液對(duì)分離效果的影響。結(jié)果表明,隨著緩沖液濃度的增加,遷移時(shí)間也隨之增加。實(shí)驗(yàn)選擇了10,15,25,30 mmol/L的硼酸鈉溶液作為緩沖液。隨著濃度的增大,麻保沙星出峰時(shí)間延長(zhǎng),但濃度較大時(shí)電流過大,焦耳熱增大,使峰型不穩(wěn),所以選擇15 mmol/L的硼酸鈉溶液作為緩沖液。

2.3 分離電壓的選擇

在毛細(xì)管電泳中,分離電壓是控制電滲流的一個(gè)重要參數(shù),也是控制分離度、分析時(shí)間的重要因素。高電壓是實(shí)現(xiàn)快速、高效的前提,實(shí)驗(yàn)選擇了10,15,20,25 kV的電壓進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,隨著電壓的增大,出峰時(shí)間縮短(電壓與出峰時(shí)間曲線見圖4),當(dāng)分離電壓大于20 kV時(shí)焦耳熱過大,使柱效率降低,峰型變差。所以本次實(shí)驗(yàn)選擇20 kV的分離電壓,進(jìn)樣時(shí)間為10 s。

2.4 樣品測(cè)定

取3批麻保沙星樣品,在選定的電泳條件下分別進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果如表3所示。

表3 3批樣品的測(cè)定結(jié)果Tab.3 Detection of three samp les

3 結(jié) 語

選用毛細(xì)管電泳法分析麻保沙星,緩沖液為15 mmol/L的硼酸鈉溶液,p H值為9.2,進(jìn)樣時(shí)間為10 s,分離電壓為20 kV。在此條件下麻保沙星遷移時(shí)間適中,分離度較高,峰型較好,精密度較高,在10～100 μg/m L范圍內(nèi)線性良好,檢測(cè)限較靈敏,回收率較高,在此條件下測(cè)得麻保沙星的質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為99.2%。該方法柱效率較高,分析時(shí)間較快,使用樣品、溶劑量較少,為麻保沙星的分析測(cè)定提供了一種良好的分析方法。

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Determination of marbofloxacin by high perfo rmance capillary zone electrophoresis

L IZhi-wei1,CU IZhe1,L IU Bo2,ZHAO Yun-chao1

(1.College of Chemical and Pharmaceutical Engineering,Hebei University of Science and Technology,Shijiazhuang Hebei 050018,China;2.Hebei Yuanzheng Pharmaceutical Company Limited,Shijiazhuang Hebei 050041,China)

A high performance capillary zone electropho resis method was established for the determination of marbofloxacin drug substance.An untreated fused-silica capillary was used w ith 15 mmol/L sodium bo rate buffer(p H 9.2)as running buffer at the detection wavelength of 295 nm,separation voltage of 20 kV and the injection volumeof samp le for 10 s.The calibration curve for marbofloxacin is linear in the concentration range of 10～100μg/m L.The average recovery is 100.2%w ith RSD of 0.97%.

marbofloxacin;drug substance;high performance capillary electropho resis;determination

R914

A

1008-1542(2011)01-0075-03

2010-09-20;

2010-11-03;責(zé)任編輯:張士瑩

李志偉(1977-),男,河北唐縣人,副教授,主要從事藥物分析方面的研究。