賓天海 胡帆

婦月康膠囊由當(dāng)歸、川芎、益母草、甘草(炙)、桃仁、干姜(炭)、紅花等八味藥組成的復(fù)方制劑，功能主要用于活血、祛瘀、止痛，用于產(chǎn)后惡露不行，少腹疼痛，也可試用于上節(jié)育環(huán)引起的陰道流血，月經(jīng)過(guò)多等。本方中當(dāng)歸、川芎、益母草均含阿魏酸成分，阿魏酸為本方中有效成分之一。因此測(cè)定本品中阿魏酸的含量，可作為本品質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證藥品使用安全、有效，本文采用HPLC法測(cè)定了阿魏酸的含量及含量均勻度。

1 儀器與試藥

LC-10AP型高效液相色譜儀(日本島津公司);SPD-10Avp紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器;LC-10ATVP7725(i)型手動(dòng)進(jìn)樣器;威瑪龍色譜數(shù)據(jù)工作站;Aglient 8456紫外可見(jiàn)分光光度計(jì);kh-250db型超聲處理器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。

阿魏酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為:110773-9910;婦月康膠囊(購(gòu)自A廠，共3批);甲醇為色譜純;其余試劑為分析純，水為超純水。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜條件為:色譜柱為大連依立特 ODS2柱(HyperClone C18，4.6 ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇-1%冰醋酸溶液(26∶74)，流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm，進(jìn)樣量為5 μl;柱溫為室溫;理論塔板數(shù)按阿魏酸計(jì)算應(yīng)不低于3000。在上述色譜條件下，供試品中阿魏酸能完全分離，對(duì)照品與陰性對(duì)照品溶液中沒(méi)有峰重疊，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備 對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取阿魏酸對(duì)照品10.0 mg，置25 ml棕色容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取1.5 ml，至100 ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1 ml含阿魏酸6 μg)(4℃以下避光保存)。

2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，取1.5 g，精密稱(chēng)定，置50 ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30 min，放冷，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液5 μl，注入液相色譜儀，以上述色譜條件測(cè)定，根據(jù)阿魏酸峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算供試品中阿魏酸含量。

2.5 線性關(guān)系考察 線性關(guān)系考察 精密量取阿魏酸對(duì)照品溶液10 mg，置25 ml棕色容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成400 μg/ml對(duì)照品溶液，備用。分別精密吸取 400 μg/ml阿魏酸對(duì)照品溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml，分別置100 ml棕色容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為:Y=14236X-1721.7，相關(guān)系數(shù)r=0.9995。結(jié)果表明:阿魏酸進(jìn)樣濃度在2～12 μg/ml范圍內(nèi)，進(jìn)樣濃度與阿魏酸峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液(6.0 μg/ml)和供試品溶液(批號(hào)20091101)各5μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，測(cè)定阿魏酸面積，其RSD為0.42%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液(批號(hào):20091101)5 μl，分別于 0、4、8、12、16、24 h 進(jìn)行測(cè)定，其峰面積 RSD 為0.42%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 陰性對(duì)照試驗(yàn) 按處方比例取處方中缺當(dāng)歸、川芎、益母草的各味藥材，照制法制取缺當(dāng)歸、川芎、益母草陰性樣品。取陰性樣品1.5 g，并按供試品溶液提取方法制成陰性對(duì)照溶液，測(cè)定，在上述色譜條件下，缺當(dāng)歸、川芎、益母草陰性對(duì)照溶液，在阿魏酸色譜峰處無(wú)干擾峰出現(xiàn)，表明對(duì)被測(cè)成分無(wú)干擾。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)供試品(批號(hào)20091101)共5份，每份約1.5 g，精密稱(chēng)定，按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法進(jìn)行提取，測(cè)定，結(jié)果測(cè)得平均值145.5μg/粒，RSD%=0.40，表明重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)知含量的供試品(批號(hào)20091101，含量:145.5 μg/粒)5 份，每份約 0.75 g，精密稱(chēng)定，按供試品溶液制備方法處理。并按上述色譜條件依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.11 樣品中阿魏酸的含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液3批，按上述色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.12 樣品中阿魏酸的含量均勻度測(cè)定 取樣品3批，按供試品溶液制備方法提取，以上述色譜條件依法(2005年版藥典二部附錄XE)測(cè)定阿魏酸含量均勻度，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量及含量均勻度測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 波長(zhǎng)的選擇 文獻(xiàn)［1］采用324 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng);文獻(xiàn)［2］采用312 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng);對(duì)阿魏酸對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外吸收光譜測(cè)定，其吸收峰為316 nm和324 nm，316 nm處的峰面積較大，故選擇316 nm作為本品的檢驗(yàn)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇 阿魏酸為弱酸性化合物，易分離，在流動(dòng)相中加入少酸性物質(zhì)可改善峰形，參考文獻(xiàn)［3］甲醇-1.5%冰醋酸溶液，文獻(xiàn)［4］乙腈-0.1%磷酸溶液，通過(guò)比較兩者不同配比下的分離效果，最終確定為甲醇-1%冰醋酸溶液(26∶74)，此條件下，從色譜圖形分析看，阿魏酸托尾因子較小，樣品分離效果好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

3.3 提取時(shí)間的考察 取同一供試品，超聲時(shí)間分別為20，30，40 min，對(duì)提取效果進(jìn)行考察，結(jié)果超聲提取30 min時(shí)可提取完全，故實(shí)驗(yàn)中選擇30 min作為提取時(shí)間。

3.4 阿魏酸 阿魏酸是當(dāng)歸水溶液中的有效成分，屬丙烯酸衍生物，見(jiàn)光受熱極易異構(gòu)化而降解，在酸性溶液較為穩(wěn)定，因此在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)樣品和對(duì)照品采取加酸和棕色量瓶配制定容，做保護(hù)性處理，保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確。

［1］ 黃羅生，郭健新，劉梅，等.HPLC測(cè)定阿魏酸含量的探討.中成藥，2004，26(2):134-136.

［2］ 章澤恒，譚朝陽(yáng).HPLC測(cè)定婦科十味膠囊中阿魏酸的含量.中國(guó)中醫(yī)信息雜志，2006，13(2):40-41.

［3］ 鄧向濤，董玉秀.參桂膠囊中阿魏酸含量的測(cè)定.河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，13(2):40-41.

［4］ 孫立恩.產(chǎn)婦安合劑中阿魏酸含量測(cè)定.海峽藥學(xué)，2007，22(128):47-48.