李秀麗，唐曉光，高麗楓，劉青妍，娜日蘇

（赤峰學(xué)院醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古赤峰024000）

蓽茇-13味治療大鼠非酒精性脂肪肝病的實驗研究

李秀麗，唐曉光，高麗楓，劉青妍，娜日蘇

（赤峰學(xué)院醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古赤峰024000）

目的：研究蓽茇-13味對大鼠非酒精性脂肪肝病的療效.方法：雄性Wister大鼠40只隨機分組，每組8只.正常對照組僅喂飼普通飼料，其他大鼠喂飼高脂飼料（88%標(biāo)準(zhǔn)普通飼料+10%豬油+2%膽固醇）12周.分為模型對照組和蓽茇-13味低（2mg/kg）、中（4mg/kg）、高（8mg/kg）給藥組.治療組于13周開始灌胃蓽茇-13味.藥物干預(yù)8周末結(jié)束實驗，測定體重、肝濕重和肝指數(shù)，檢測血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c）、丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和肝組織TG、TC.結(jié)果：與對照組比較，模型組體重、肝濕重、肝指數(shù)以及血清中TG、TC、LDL-c、、ALT、AST、MDA和肝組織TG、TC含量均增加，具有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01）而HDL-c和SOD下降（P＜0.05）；與模型組比較，藥物干預(yù)組大鼠肝濕重和肝指數(shù)及血清TG、TC、LDL-c、ALT、AST、MDA和肝組織TG、TC降低，且肝臟脂肪變性和炎癥壞死減輕（P＜0.05，P＜0.01）.結(jié)論：蓽茇-13味對大鼠高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD有治療作用.

非酒精性脂肪肝??；大鼠；蓽茇-13味

隨著人們物質(zhì)生活的不斷提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，非酒精性脂肪肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的發(fā)病率也逐年升高，已成為僅次于病毒性肝炎的常見肝病.NAFLD是一種常見的隱匿性肝病，可發(fā)展為肝硬化和肝性腦病[1].目前，其發(fā)病機制并未清楚，治療藥物不甚完善，臨床仍處于探索階段.因此，研究NAFLD的藥物治療具有重要意義.本研究通過高脂飲食建立大鼠NAFLD的模型，以探索蓽茇-13味對NAFLD的治療作用.

1 材料與方法

1.1 材料

雄性Wister大鼠40只，清潔級，體重180g～200g，購買并飼養(yǎng)于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心，實驗室溫度為（20±3）℃.高脂飼料由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部提供.蓽茇-13味由赤峰市巴林右旗中蒙醫(yī)院明根巴雅爾提供，臨用時用水研磨成400mg/ml的糊狀備用.丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）高密度脂蛋白膽固醇（HLD-c）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒由南京建成生物工程研究所提供.

1.2 方法

雄性Wister大鼠40只，分籠飼養(yǎng)，經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分為5組：正常對照組（Con）、模型組（Model）、蓽茇低劑量組（BL）、蓽茇中劑量組（BM）、蓽茇高劑量組（BH），每組為8只.Model、BL、BM、BH組各給予高脂飼料（87.7%普通飼料+10%豬油+2%膽固醇+0.3%膽酸鈉）飲食12周，Con組給予普通飼料.實驗動物均自由飲水.13周開始BL組、BM組、BH組定時灌胃，分別給予蓽茇-13味2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg，每日一次.Con和model兩組給予4mg/kg蒸餾水灌胃.溫濕度符合標(biāo)準(zhǔn)，明暗12小時交替.藥物干預(yù)8周末，所有大鼠隔夜禁食12小時，稱重以10%的水合氯醛腹腔注射麻醉處死.腹主動脈取血，離心取血清備用.取肝組織于液氮中速凍后，置于-80℃冰箱備用.

1.3 觀測指標(biāo)、檢驗項目和方法

⑴觀察大鼠的精神狀態(tài)、食欲狀態(tài)、活動情況和毛發(fā)情況.實驗結(jié)束后測體重和肝濕重,計算肝指數(shù)（肝濕重/體重）.⑵血清指標(biāo)的測定.測定血清ALT、AST、TG、TC,LDL-c、HLD-c、MDA、SOD，全部采用全自動生化儀檢測，按照試劑盒說明書測定.

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計.計量資料采用(X±s)表示,組間比較采用單因素方差分析及LSD檢驗,等級資料采用秩和檢驗.P＜0.05表示差異有顯著性.

2 結(jié)果

2.1 一般結(jié)果

各組大鼠均發(fā)育良好.與Con組相比較,Model組大鼠肝臟濕重和肝指數(shù)(每100g體重的肝臟濕重)均顯著高于Con組(P＜0.05).與Model組相比,BL、BM、BH組大鼠體重、肝臟濕重和肝指數(shù)均較Model組有所下降,其中BL、BM、BH組的肝臟濕重與Model組比較有顯著性差異(P＜0.05).而BM、BH組的肝臟指數(shù)與Model組比較有顯著性差異(P＜0.05).見表1.

2.2 血清生化指標(biāo)的變化

2.2.1 肝功能:Model組大鼠血清ALT、AST較Con組大鼠顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)；與Model組相比,BL、BM、BH組大鼠ALT均有顯著性差異(P＜0.05),BH組的AST有顯著性差異(P＜0.05),而BL、BM組的AST有下降趨勢.脂質(zhì)氧化：Model組SOD、MDA與Con組比較具有顯著性差異(P＜0.05).與Model組相比,BM、BH組大鼠MDA均有非常顯著性差異(P＜0.01),BL組MDA均有顯著性差異(P＜0.05)，而BM、BH組大鼠SOD有顯著性差異(P＜0.05)見.表2.

表1 各組大鼠體重肝濕重和肝指數(shù)(X±s)

表2 血清學(xué)肝功能和脂質(zhì)氧化指標(biāo)的變化(x±s)

2.2.2 血脂:與Con組相比,Model組大鼠血清TC、TG、LDL-c、HDL-c顯著升高(均為P＜0.05),與Model組相比,BL、BM、BH組大鼠血清TG、TC均有下降（P＜0.05),其中BH組TG顯著下降(均為P＜0.01)，BM、MH組的LDL-c組與Model組相比均有下降（P＜0.05)，而對于HDL-C的測定，BL、BM、BH組與Model組比較具有所升高（P＜0.05).見表3.通過對肝組織中甘油三酯和總膽固醇的測定，模型組與對照組比較有顯著性差異（P＜0.05).給藥組三個劑量組與模型組比較都有所降低（P＜0.05)，其中高劑量組降低膽固醇比較明顯，具有非常顯著差異（P＜0.01）.見表4.

表3 血清學(xué)血脂的變化

3 討論

導(dǎo)致肝臟的炎癥.脂肪性肝炎的持續(xù)存在，即炎癥－壞死的循環(huán)，或其它因素的打擊，造成肝臟細胞外基質(zhì)的合成大于降解，從而形成進展性纖維化.大鼠經(jīng)高脂飲食誘導(dǎo)12周后，模型組的肝濕重和肝指數(shù)、TG、TC、LDL-c與對照組比較，明顯升高，而HDL-c則降低，說明模型組脂代謝紊亂；而ALT、AST、MDA、SOD血清水平模型組與對照組比

NAFLD發(fā)病機制極為復(fù)雜,1998年Day和James提出的“二次打擊”學(xué)說已成為解釋該病發(fā)生機制的主要理論[2].首次打擊主要指胰島素抵抗和脂質(zhì)代謝紊亂所導(dǎo)致的肝細胞脂質(zhì)堆積,形成單純性脂肪肝，而在此基礎(chǔ)上發(fā)生的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化損傷，成為NAFLD發(fā)病中的第二次打擊，從而較具有顯著性差異，說明模型組已出現(xiàn)脂肪性肝炎.

表4 肝組織TG、TC含量的變化（mg.g-1肝組織）

藥物蓽茇-13味主要是由蓽茇、絞股藍、沙棘、苦參等13味藥組成的.蓽茇為胡椒科植物蓽茇(PiperlongumL.)的近成熟或成熟果穗,是中蒙醫(yī)常用藥材,具有溫中散寒、理氣止痛功能.臨床中不僅用于治療胃脘痛、嘔吐、泄瀉、臍腹痛、牙痛、頭痛,蒙醫(yī)還用于治療高脂血癥、冠心病等病.蓽茇中所含胡椒堿具有降低TG、TC[3]，抗氧化作用[4]；絞股藍(Gynostemmapentaphyllum)是葫蘆科植物絞股藍屬植物，其根或莖全草人藥，其有效成分為絞股藍總苷，研究發(fā)現(xiàn)絞股藍總苷具有降低血脂、可以顯著提高機體SOD水平，同時抑制MDA和/或加快其清除，從而有效的防治機體的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)[5]；沙棘為胡頹子科沙棘屬植物，沙棘為藥食同源植物.沙棘果實入藥具有止咳化痰、健胃消食、活血散瘀之功效.沙棘果實中含有異鼠李素及其糖甙、槲皮素、山柰酚等7種黃桐物質(zhì)，尤其是槲皮素作用較多.通過對槲皮素的實驗研究,發(fā)現(xiàn)其具有多種藥理活性,如免疫增強功能[6]、抗菌、抗病毒[7]、鎮(zhèn)痛[8]、抑制血小板凝集[9]、舒張血管[10]、抗酒精性氧化損傷[11]、抗氧化應(yīng)激作用[12]等.

本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，蓽茇-13味藥物干預(yù)組體重、肝濕重、肝指數(shù)下降；血清TG、TC、LDL-c和肝組織TG、TC降低,HDL-c升高；提示蓽茇-13味具有改善脂質(zhì)代謝紊亂的作用；血清ALT、AST水平和MDA水平與模型組比較降低，而SOD升高，說明肝臟脂肪變性和炎癥壞死程度減輕，提示蓽茇-13味具有脂質(zhì)過氧化作用，降低炎癥程度的作用.本實驗藥物干預(yù)開始于建立模型后的第13后，此時，大鼠肝細胞脂肪性變和肝組織炎癥已較嚴(yán)重，用蓽茇-13為干預(yù)后，脂質(zhì)代謝紊亂、肝組織炎癥有所改善，說明蓽茇-13味對大鼠高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD有治療作用.其組分所含的有效成分所產(chǎn)生的降血脂、抗氧化作用有可能起到了協(xié)同作用.蓽茇-13味對NAFLD的治療作用機制有可能與其降低血脂、保肝降酶、抗肝纖維化、抗氧化有關(guān).其量效關(guān)系不甚明顯和作用機制尚未開展，這都有待今后繼續(xù)深入研究.

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R575.1

A

1673-260X（2011）01-0035-03

內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金項目（20080404Zd31）