汪運(yùn)明，陳華勇，楊繼國，楊 博，*，王永華

(1.華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州510641;2.華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州510006)

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定茶油中角鯊烯含量

汪運(yùn)明1，陳華勇2，楊繼國1，楊 博2，*，王永華1

(1.華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州510641;2.華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州510006)

建立茶油中角鯊烯氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用(GC－MS)的測(cè)定方法。茶油通過正己烷直接稀釋，采用氣相色譜－質(zhì)譜(GC－MS)選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)進(jìn)行分析，以三十二烷為內(nèi)標(biāo)，用內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定了茶油中角鯊烯的含量。該內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)為0.999，在0.01～3.00μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，角鯊烯最低檢出限為0.03ng，方法的回收率為85.0%～115.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%(n=6)。利用此方法測(cè)定廣東興寧和江西贛州兩地產(chǎn)茶油毛油中角鯊烯含量分別為120.43μg/mL和97.05μg/mL，該法操作簡(jiǎn)便、快速，測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用(GC－MS)，選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)，角鯊烯，內(nèi)標(biāo)法，茶油

角鯊烯(Squalene)的化學(xué)名稱為2，6，10，15，19，23－六甲基－2，6，10，14，18，22－二十四碳六烯，為無色或微黃色澄明油狀液體，系從深海鯊魚肝油中精餾而成。其具有提高血紅蛋白的攜氧能力，促進(jìn)新陳代謝，提高機(jī)體免疫力和降低血清總膽固醇、防止動(dòng)脈粥樣硬化等功能［1］。并且有提高體內(nèi)超氧化物歧化酶活性、增強(qiáng)機(jī)體免疫力和抗腫瘤作用、抗衰老、抗真菌和增強(qiáng)抗菌藥物的功效與作用等多種生理功能［2－7］，因此被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品等相關(guān)領(lǐng)域［8－9］。茶油(Camellia Oil) 是從油茶籽中提取的優(yōu)質(zhì)保健食用植物油脂，是一種天然、衛(wèi)生、保健的天然綠色食品，有“長(zhǎng)壽油”、“油中之王”等美譽(yù)。茶油是中國和日本的特產(chǎn)，我國湖南、江西、安徽、四川、廣西、廣東等地有著廣泛的茶油資源。茶油中富含生理活性成分角鯊烯，可抗缺氧和抗疲勞，具有提高人體免疫力及增進(jìn)胃腸道的功能。隨著人們生活水平的提高，食用油結(jié)構(gòu)的改變和優(yōu)質(zhì)食用油需求量的不斷增加，茶油因其油質(zhì)佳、功能特性好，具有無可比擬的競(jìng)爭(zhēng)力，有著廣大的發(fā)展前景。角鯊烯的常用含量測(cè)定方法有薄層色譜法［10］、氣相色譜法［11］、高效液相色譜法［12］、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用［13］等。目前采用氣相色譜－質(zhì)譜法分析茶油中角鯊烯的報(bào)道較少。因此，本文建立了茶油中角鯊烯氣相色譜－質(zhì)譜(GC－MS)含量分析方法，該法檢測(cè)限低，靈敏度高，耗時(shí)短，是一種定量準(zhǔn)確、效率高的分析方法，為深入開發(fā)生產(chǎn)高附加值茶油化妝品和一系列醫(yī)藥產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)，促進(jìn)山茶資源的充分利用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品 純度>95%，購自中國藥品生物制品檢定所;正三十二烷內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品 純度>97%，美國Acros Organics公司;正己烷 分析純;茶油 廣東省興寧市和江西省贛州市。

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀 Agilent 7890－5975;漩渦振蕩器 廣州正一科技公司;離心機(jī)，恒溫水浴鍋，氮吹儀，50mL圓底燒瓶，容量瓶等玻璃儀器。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)條件

1.2.1.1 氣相色譜條件 色譜柱:HP－5MS毛細(xì)管柱(30m ×0.25mm ×0.25μm);升溫程序:240℃，保持2min，以20℃/min升溫至280℃，保持10min;進(jìn)樣口溫度:280℃;載氣:高純氦氣;載氣流速:1.2mL/min;進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣;進(jìn)樣量:1μL。

1.2.1.2 質(zhì)譜條件 GC－MS接口溫度:300℃;離子源溫度:250℃;四極桿溫度:200℃;電離方式EI源;電離電壓:70eV;單離子檢測(cè):檢測(cè)離子角鯊烯為m/z 69、81、95，正三十二烷為 m/z 57、71、85。1.2.2 溶液配制與樣品制備

1.2.2.1 角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 精密稱取角鯊烯10mg置10mL容量瓶中，加正己烷適量，振搖，使角鯊烯溶解后，再加正己烷至刻度，搖勻，為1mg/mL的角鯊烯儲(chǔ)備液。

1.2.2.2 正十二烷內(nèi)標(biāo)溶液 精密稱取正三十二烷1mg置于100mL容量瓶中，加適量正己烷，振搖，待角鯊烯溶解后，再加正己烷定容至刻度，搖勻，濃度10μg/mL。

1.2.2.3 角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 準(zhǔn)確吸取角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液3mL于25.0mL容量瓶中，用內(nèi)標(biāo)液定容至刻度，混勻，配成質(zhì)量濃度為120μg/mL的角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)使用液。取適量的120μg/mL的角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)使用液用內(nèi)標(biāo)液依次梯度稀釋成濃度為3、1、0.3、0.1、0.03、0.01μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)液。

1.2.2.4 樣品的制備 精確稱取兩種油樣各10mg，放入到10mL的容量瓶中，并用內(nèi)標(biāo)溶液定容到刻度，搖勻。取1mL于進(jìn)樣瓶中，待氣相色譜檢測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 分析條件的確定

角鯊烯是一種高度不飽和烴類化合物，分子量大，沸點(diǎn)高(280℃)，難揮發(fā)，并且所測(cè)組分分散在大量脂肪酸以及油脂中，其沸點(diǎn)較高，汽化難，因此，本文選用HP－5MS型高溫低流失彈性石英毛細(xì)管柱，進(jìn)樣口溫度設(shè)為300℃，程序升溫，使角鯊烯與內(nèi)標(biāo)得到良好的分離，并與茶油樣品中其它組分得到完全分離，總離子流圖見圖1。

由于角鯊烯在茶油中含量較低，為提高檢測(cè)靈敏度，減少基質(zhì)中其它組分和實(shí)驗(yàn)處理過程對(duì)測(cè)定的干擾，樣品處理為直接溶解稀釋，根據(jù)角鯊烯和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜圖(見圖2、圖3)，我們選擇SIM模式，檢測(cè)離子:角鯊烯為 m/z 69、81、95，正三十二烷酸為m/z 57、71、85。

圖1 SIM模式下總離子流圖

圖2 角鯊烯的質(zhì)譜圖

圖3 內(nèi)標(biāo)正三十二烷質(zhì)譜圖

2.2 方法的線性范圍和最低檢測(cè)限量

在上述GC－MS條件下，分別取1μL 1.2.2.3所配的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，以選擇離子模式(SIM)采集數(shù)據(jù)。以峰面積比對(duì)濃度比進(jìn)行線性回歸，繪制角鯊烯的標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖 4)，該曲線在 0.01～3.00μg/mL范圍內(nèi)線性良好，回歸方程為Y=8.1785X－0.0948，相關(guān)系數(shù)為0.999。在測(cè)定條件下，當(dāng)信噪比為3時(shí)，角鯊烯的最低檢出限為0.03ng。

圖4 角鯊烯的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 方法的精密度實(shí)驗(yàn)

精確稱取興寧毛油和贛州毛油油樣6份(每份約10mg)，每份放入到 10mL的容量瓶中，并用10μg/mL內(nèi)標(biāo)溶液定容至刻度，搖勻。在上述GC－MS條件下，每份分別取1μL進(jìn)樣分析，角鯊烯含量測(cè)定結(jié)果見表1。從表1可以看出，利用此方法測(cè)定了興寧和贛州兩地產(chǎn)茶油毛油中的角鯊烯含量，分別為120.43μg/mL和97.05μg/mL，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＜5%(n=6)。

表1 方法的精密度實(shí)驗(yàn)

2.4 方法回收率實(shí)驗(yàn)

取已測(cè)定角鯊烯含量的興寧茶油毛油，準(zhǔn)確加入一定量角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)液(1.2.2.1)，然后按樣品測(cè)定方法進(jìn)樣測(cè)定，由測(cè)定結(jié)果計(jì)算出角鯊烯含量，所得含量減去茶油測(cè)得含量，再除以所加角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)液的含量即為回收率(表2)。本法測(cè)定3份，平均回收率為103.0%(n=3)。

表2 方法回收率實(shí)驗(yàn)

2.5 兩種油樣角鯊烯含量的分析

用所建立的方法，對(duì)2種不同產(chǎn)地的茶油毛油樣品，采用1.2.2.4處理后，取1μL進(jìn)行分析，其中角鯊烯的含量分別為興寧毛油120.43μg/mL、贛州毛油97.05μg/mL。從測(cè)定結(jié)果可以看出，茶油中含有一定量的角鯊烯，比一般文獻(xiàn)報(bào)道稍高。

3 結(jié)論

角鯊烯具有促進(jìn)血液中氧的輸送和利用，活化細(xì)胞，延緩組織衰老，增進(jìn)體力耐力，增強(qiáng)免疫，預(yù)防腫瘤等多種生理功能，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品等相關(guān)領(lǐng)域。我國山茶資源豐富，茶油中富含角鯊烯，但并未得到廣泛應(yīng)用，開發(fā)生產(chǎn)高附加值的茶油化妝品和醫(yī)藥系列產(chǎn)品市場(chǎng)具有很大潛力。本文建立了GC－MS測(cè)定茶油中角鯊烯含量的方法，采用正己烷直接稀釋茶油樣品，經(jīng)HP－5MS毛細(xì)管柱分離，以正三十二烷為內(nèi)標(biāo)，用GC－MS選擇性離子監(jiān)測(cè)對(duì)角鯊烯進(jìn)行定量分析，該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，可用于茶油中的角鯊烯含量測(cè)定。

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Determination of squalene in camellia oil by GC－MS

WANG Yun－ming1，CHEN Hua－yong1，YANG Ji－guo2，YANG Bo2，*，WANG Yong－h(huán)ua1
(1.School of Food Science and Engineering，South China University of Technology，Guangzhou 510641，China;2.School of Biological Science and Engineering;South China University of Technology，Guangzhou 510006，China)

A method was developed for the determination of squalene in camellia oil by gas chromatography－mass spectrometry(GC－MS).The samples of camellia oil were directly diluted in n－h(huán)exane solvent and analyzed by gas chromatography－mass spectrometry(GC－MS)with selective ion monitoring，using dotriacontane as the internal standard，squalene of camellia oil was determined by standard curves with internal standard.The experimental results of internal standard showed a good linear relation(R=0.999)，the linear range of the method was 0.01～3.00μg/mL，the detection limit of the method was 0.03ng，the recoveries of squalene were 85.0%～115.0%，RSD ＜5%(n=3).The method has been successfully applied in the determination of squalene in two camellia oils from Xingning in Guangdong province and Ganzhou in Jiangxi province，respectively 120.43μg/mL and 97.05μg/mL.This method was simple，rapid and the results were accurate and reliable.

gas chromatography－mass spectrometry(GC－MS);selective ion monitoring(SIM);squalene;internal standard;camellia oil

TS207.3

A

1002－0306(2011)06－0404－03

2010－03－16 *通訊聯(lián)系人

汪運(yùn)明(1987－)，男，碩士研究生，研究方向:油脂催化。

廣東省科技攻關(guān)項(xiàng)目(2009B020201007)。