呂曉玲，陶東川，馬天嬌，劉迎旺，溫 娟，張新偉

(天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，天津300457)

紫甘薯葉總貢酮對四氯化碳致小鼠慢性肝損作的保護作

呂曉玲，陶東川*，馬天嬌，劉迎旺，溫 娟，張新偉

(天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，天津300457)

通過腹腔注射7%的CCl4制備慢性肝損傷小鼠模型，分別用3種不同濃度的紫甘薯葉總黃酮(FPSPL)進(jìn)行治療，檢測小鼠肝臟指數(shù)(LI)，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性，白蛋白(ALB)和總蛋白(TP)含量，肝組織勻漿超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，研究了FPSPL對小鼠慢性肝損傷的保護作用。結(jié)果表明，F(xiàn)PSPL能顯著降低小鼠LI，降低血清ALT和AST活性，提高血清ALB和TP含量，提高肝組織SOD活性，降低MDA含量。FPSPL對四氯化碳導(dǎo)致的小鼠慢性肝損傷具有保護作用。

紫甘薯葉總黃酮，CCl4，慢性肝損傷

旋花科草本植物紫甘薯是近年開發(fā)出的一類特色的甘薯品種，莖葉中黃酮、多糖等活性成分含量較高。FPSPL是從紫甘薯葉中提取、純化出來的總黃酮。文獻(xiàn)報道，總黃酮具有抗氧化［1］、抗衰老［2］、降血糖［3］、護肝［4］等功效。實驗從護肝的角度，探討了FPSPL對CCl4導(dǎo)致的小鼠慢性肝損傷的影響，為紫甘薯葉保健品的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

FPSPL 乙醇提取，AB－8大孔吸附樹脂純化，總黃酮含量72.3%;聯(lián)苯雙酯滴丸 北京協(xié)和藥廠，批號09040104;ALT、AST、TP、ALB、SOD、MDA 試劑盒

南京建成生物工程研究所，批號均為20100310;昆明種雄性小鼠 SPF級，體重(20±2)g，解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，許可證號:SCXK－(軍)2007－004;其它試劑 均為國產(chǎn)分析純。

Multiskan Spectrum酶標(biāo)儀、991#4超低溫冰箱美國Thermo公司;SB25－12DTDN型超聲波清洗器、超聲波細(xì)胞粉碎機 寧波新芝生物科技股份有限公司;電熱恒溫水浴鍋 天津歐諾儀器儀表有限公司;PB－10酸度計 德國賽多利斯股份公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 藥物配制 a.用蒸餾水將FPSPL配制成5、10、20mg/mL 濃度的溶液［5］。b.用蒸餾水將聯(lián)苯雙酯滴丸配制成20mg/mL濃度的懸浮液。c.用橄欖油將CCl4配制成 7%(V/V)的 CCl4－橄欖油溶液［6］。

1.2.2 動物分組與建模 小鼠適應(yīng)1周后，按體重隨機分為空白組、模型組、陽性組(聯(lián)苯雙酯組)、FPSPL高、中、低劑量組，每組12只［7］。采用腹腔CCl4注射建立小鼠慢性肝損傷模型?？瞻捉M小鼠腹腔注射橄欖油，其余各組均腹腔注射7%的CCl4－橄欖油溶液，10mL/kg·bw，每周 2 次，持續(xù) 6 周［8］。建模期間不限飲食量，自由飲水。

1.2.3 藥物處理 建模第2周開始灌胃［9］?？瞻捉M、模型組灌胃蒸餾水，陽性組灌胃聯(lián)苯雙酯懸浮液，F(xiàn)PSPL高、中、低劑量組分別灌胃5、10、20mg/mL濃度的FPSPL溶液。10mL/kg·bw，1d 1次，持續(xù)5周。

1.2.4 指標(biāo)檢測 末次給藥后，小鼠禁食不禁水24h，摘眼球取血，離心取血清，按照試劑盒說明書采用賴氏法測定ALT和AST活性、采用溴甲酚綠比色法測定ALB含量、采用考馬斯亮蘭法測定TP含量;取肝臟稱重，計算肝臟指數(shù)LI(每10g體重的肝臟克數(shù))，制備10%的肝組織勻漿，按照試劑盒說明書采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性、采用硫代巴比妥酸法測定MDA含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 FPSPL對小鼠LI的影響

如表1所示，模型組小鼠LI極顯著高于空白組(P＜0.01)。與模型組比較，陽性組與FPSPL各劑量組LI均極顯著降低，說明FPSPL對慢性肝損傷小鼠的LI升高有明顯的抑制作用。

表1FPSPL對小鼠LI的影響(±s，n=8)

表1FPSPL對小鼠LI的影響(±s，n=8)

注:與空白組比較:**P＜0.01;與模型組比較:##P＜0.01;表2同。

組別 LI(g/10g) 組別 LI(g/10g)空白組 4.12±0.58 高劑量組4.67±0.48##模型組 5.90±0.19** 中劑量組 5.07±0.29##陽性組 4.94±0.90## 低劑量組5.12±0.47##

2.2 FPSPL對小鼠血清ALT和AST活性的影響

肝臟中的細(xì)胞色素 P450可將 CCl4激活為·CCl3和·Cl，這些自由基經(jīng)過一系列復(fù)雜的反應(yīng)，可以破壞肝臟細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，使其通透性增加，導(dǎo)致ALT、AST等轉(zhuǎn)氨酶滲入血液，使血清中轉(zhuǎn)氨酶的活性顯著升高［10］。

如表2所示，模型組小鼠血清中ALT與AST活性顯著高于空白組(P＜0.01)，說明小鼠慢性肝損傷模型建立成功。與模型組比較，陽性組與FPSPL各劑量組均可顯著抑制CCl4導(dǎo)致的血清ALT、AST活性升高，其中高、中劑量組對ALT活性的降低效果更顯著。說明FPSPL能保護肝臟細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，抑制CCl4導(dǎo)致的小鼠血清中ALT、AST活性升高。

表2FPSPL對小鼠血清ALT和AST活性的影響(±s，n=8)

表2FPSPL對小鼠血清ALT和AST活性的影響(±s，n=8)

組別 ALT(U/L) AST(U/L)空白組19.44±11.56 37.76±24.30模型組 528.61±60.90** 245.97±16.68**陽性組 203.24±66.47## 178.95±40.17##高劑量組 397.57±31.11## 135.98±41.38##中劑量組 423.69±16.55## 165.19±26.89##低劑量組455.84±12.71## 199.17±18.50##

2.3 FPSPL對小鼠血清ALB和TP含量的影響

ALB幾乎全部由肝細(xì)胞合成，肝細(xì)胞受損，ALB含量必然降低，一般ALB降低程度與肝細(xì)胞受損程度成正比。因此，ALB含量變化可以作為了解肝臟功能情況的一個參考指標(biāo)。

如表3所示，模型組小鼠ALB和TP含量極顯著低于空白組(P＜0.01)。與模型組比較，陽性組與FPSPL高、中劑量組均可顯著抑制CCl4導(dǎo)致的血清ALB含量降低，且FPSPL高劑量組對ALB含量的升高效果最顯著;陽性組與FPSPL各劑量組均可顯著抑制CCl4導(dǎo)致的血清TP含量降低。說明FPSPL對CCl4導(dǎo)致的小鼠血清ALB、TP含量降低有明顯的抑制作用。

表3 FPSPL對小鼠血清ALB和TP含量的影響(±s，n=8)

表3 FPSPL對小鼠血清ALB和TP含量的影響(±s，n=8)

注:與空白組比較:**P＜0.01;與模型組比較:#P＜0.05，##P＜0.01;表4同。

組別 ALB(mg/mL) TP(mg/mL)空白組52.83±1.06 0.71±0.03模型組 45.47±2.26** 0.64±0.05**陽性組 50.27±1.61## 0.70±0.03#高劑量組 50.34±3.83## 0.70±0.03#中劑量組 48.10±1.96# 0.69±0.05#低劑量組46.21±1.88 0.69±0.05#

2.4 FPSPL對小鼠肝勻漿SOD活性和MDA含量的影響

SOD是氧自由基清除劑，MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物［11］。肝細(xì)胞受損時，SOD活性降低，而MDA含量升高。兩者的變化情況可以反映肝臟細(xì)胞損傷程度和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的強弱程度。

如表4所示，模型組小鼠SOD活性極顯著低于空白組(P＜0.01)，MDA極顯著高于空白組(P＜0.01)。與模型組比較，陽性組與FPSPL各劑量組SOD顯著升高，MDA顯著降低，且FPSPL高劑量組對MDA含量的降低效果最顯著。說明FPSPL有顯著的清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化的作用。

表4 FPSPL對小鼠肝勻漿SOD活性和MDA含量的影響(±s，n=8)

表4 FPSPL對小鼠肝勻漿SOD活性和MDA含量的影響(±s，n=8)

組別 SOD(U/mgprot) MDA(nmol/g)空白組132.26±18.30 0.66±0.15模型組 60.20±10.69** 1.86±0.22**陽性組 82.85±10.53## 1.00±0.19##高劑量組 96.49±14.75## 0.66±0.13##中劑量組 76.52±6.53# 1.45±0.30##低劑量組75.70±9.26# 1.56±0.18#

3 結(jié)論

與慢性肝損傷小鼠比較，F(xiàn)PSPL可以顯著降低LI，降低血清中ALT和AST活性，升高ALB和TP含量，升高肝組織中SOD活性，降低MDA含量。表明FPSPL對CCl4導(dǎo)致的小鼠慢性肝損傷有一定的保護作用，作用機理可能是通過提高氧自由基清除能力，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，維持肝臟細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)完整，從而起到護肝的作用。

［1］Bakalyan P A，et al.Zh Easp Klin Med ［J］.1986，26(4):332.

［2］陳瑜，沈自尹，陳偉華.淋巴細(xì)胞基因表達(dá)譜揭示淫羊藿總黃酮重建衰老免疫穩(wěn)態(tài)的分子機制［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004，24(1):59－61.

［3］Matsui Y，Ebuchi S，F(xiàn)ukui K，et al.Antihyperglycemic sffect of diacylated anthocyanin deriverd from Ipomoea batatas L.cultivar Ayamurasaki can be achieved through the alpha－lucosidase inhibitory action［J］.J Agric Food Chem，2002，50(25):7244－7248.

［4］潘瑩，張林麗.大果山楂黃酮提取物對四氯化碳致大鼠慢性肝損傷的保護作用［J］.時珍中醫(yī)國藥，2008，19(2):318－319.

［5］張光成，方思鳴.葛根異黃酮的抗氧作用［J］.中藥材，2007，20(7):358－360.

［6］尤圣福，鄭培永，等.養(yǎng)肝利膽顆粒對小鼠四氯化碳肝損傷的保護作用［J］.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報，2005，3(6):470－472.

［7］徐叔云，陳修，等.藥理實驗學(xué)方法［M］.3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:1223－1224.

［8］趙鐵建，等.白花丹水煎液對四氯化碳慢性肝損傷小鼠肝組織脂質(zhì)過氧化的影響［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，23(5):725－726.

［9］李申，等.降肝靈對小鼠急慢性肝損傷的保護作用［J］.安徽醫(yī)藥，2008，12(11):1028－1029.

［10］陳梁，朱錦善，任建平，等.柴胡疏肝散對四氯化碳所致大鼠急性肝損傷的防治作用［J］.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2004，14(1):42－43.

［11］王穎芳，王宇亮.中藥治療肝損傷作用機制的實驗研究進(jìn)展［J］.河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2003，18(1):33－34.

Protective effect of total flavonoids of purple sweet potato leaves on carbon tetrachloride－induced chronic liver injury in mice

LV Xiao－ling，TAO Dong－chuan*，MA Tian－jiao，LIU Ying－wang，WEN Juan，ZHANG Xin－wei
(College of Food Engineering and Biotechnology，Tianjin University of Science and Technology，Tianjin 300457，China)

The protective effect of total flavonoids of purple sweet potato leaves(FPSPL)on carbon tetrachlorideinduced chronic liver injury in mice was studied.The chronic liver injury model was induced by administration of 7%carbon tetrachloride and mice were treated of FPSPL at 50，100 or 200mg/kg to examine the changes of liver index(LI)，alanine aminotrasferase(ALT)，aspartate aminotrasferase(AST)，albumin(ALB)，total protein(TP)in serum，superoxide dismutase(SOD)and malondialdehyde(MDA)in liver homogenate.The results showed that FPSPL significantly decreased LI，the activity of serum ALT and AST，the level of MDA in liver homogenate.It also increased the concentration of serum ALB and TP，the activity of SOD in liver homogenate.FPSPL had protective effect on mice with chronic liver injury induced by carbon tetrachloride.

FPSPL;CCl4;chronic liver injury

TS201.4

A

1002－0306(2011)06－0371－03

2010－07－20 *通訊聯(lián)系人

呂曉玲(1960－)，女，碩士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事食品添加劑與營養(yǎng)調(diào)控方面的研究。