王增仙，武敏霞，高蕭楓，李艷麗，王明軍，李 平

（山西生物應(yīng)用職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西太原030031）

雙黃連注射液清熱解毒、清宣風(fēng)熱，用于外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽痛，適用于病毒及細菌感染引起的上呼吸道感染、肺炎、扁桃體炎、咽炎等，臨床靜脈滴注劑量1 mL/kg時出現(xiàn)急性過敏性不良反應(yīng)，臨床主要表現(xiàn)為皮疹［1］、血尿［2］、頭暈［3］、心悸［3］、過敏性休克［3-6］，甚至死亡［6-7］等不良反應(yīng)。清開靈注射液為中成藥制劑，主要成分為膽酸、珍珠母、豬去氧膽酸、桅子、水牛角、板蘭根、金銀花等，具有清熱解毒、化痰通絡(luò)、醒神開竅之功效，在臨床上常用于病毒所致的上呼吸道感染、肺炎等病癥，靜脈滴注20 mL/d～40 mL/d即可出現(xiàn)過敏反應(yīng)，其臨床過敏反應(yīng)主要臨床表現(xiàn)為過敏性休克、煩躁不安、面部及全身發(fā)紅、急性喉頭水腫、過敏性哮喘等［8］。復(fù)方丹參注射液臨床上廣泛用于冠心病、高血壓、腦血管疾病的治療，還可用于慢性肝炎、頸椎病、心肌炎、糖尿病等的輔助治療，臨床過敏多發(fā)生于靜脈滴注，10 mL/次～20 mL/次即可出現(xiàn)過敏反應(yīng)，主要臨床表現(xiàn)為過敏性休克、急性腎功能損害、過敏性哮喘等［9］。關(guān)于雙黃連注射液、清開靈注射液和復(fù)方丹參注射液過敏性臨床不良反應(yīng)的報道有很多，本文按照《中藥、天然藥物免疫毒性（過敏性、光變態(tài)反應(yīng)）研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》對臨床上常見的以上3種注射液進行了豚鼠全身主動過敏試驗和大鼠皮膚被動過敏性研究，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 SD大鼠，體重180 g～220 g，由山東中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號為SCXK（魯）2005-0015。一級白色豚鼠，體重300 g～400 g，由山東省米歇爾生物制品公司提供。

1.1.2 藥品與試劑 雙黃連注射液，蘇州東瑞制藥有限公司，批號：080531003；清開靈注射液，河南神農(nóng)制藥廠，批號：09041105，規(guī)格10 mL；復(fù)方丹參注射液，10 mL／支，正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號：0807111。卵白蛋白，上海伯奧生物科技有限公司，批號：080601。0.9% 氯化鈉溶液，由山東臨淄制藥廠生產(chǎn)，批號：07050202。伊文斯蘭，由北京利科生化科貿(mào)有限公司生產(chǎn)。

1.2 實驗方法

1.2.1 給藥劑量設(shè)計 雙黃連注射液靜脈滴注發(fā)現(xiàn)過敏劑量在1 mL/kg，按每次70 mL/人換算大鼠等效劑量為6.3 mL/kg，故設(shè)計給藥劑量為6.3 mL/kg；同樣方法換算豚鼠等效劑量為5.5 mL/kg，故設(shè)計給藥劑量為5.5 mL/kg。清開靈注射液靜脈滴注發(fā)現(xiàn)過敏劑量在20 mL/次～40 mL/次，按每人40 mL/d換算大鼠的等效劑量為3.6 mL/kg，故設(shè)計劑量低劑量為3.6 mL/kg，高劑量為7.2 mL/kg；同樣方法換算豚鼠等效劑量為3.1 mL/kg，故設(shè)計低劑量為3.1 mL/kg，高劑量為6.2 mL/kg。復(fù)方丹參注射液靜脈滴注發(fā)現(xiàn)過敏劑量在 10 mL/次～20 mL/次，1 次/d，按每人 20 mL/d換算大鼠的等效劑量為1.8 mL/kg，故設(shè)計劑量低劑量為1.8 mL/kg，高劑量為5.4 mL/kg；同樣方法換算豚鼠等效劑量為1.6 mL/kg，故設(shè)計低劑量為1.6 mL/kg，高劑量為4.8 mL/kg。卵白蛋白陽性對照組，大鼠給藥劑量為75 mL/kg，按7.5 mg/mL給藥濃度和1 mL/100 g的給藥體積給藥；豚鼠給藥劑量為5 mg/只，按5 mg/mL給藥濃度和1 mL/只的給藥體積給藥。0.9%氯化鈉溶液陰性對照組給藥體積同陽性對照組。

1.2.2 被動皮膚過敏性試驗

1.2.2.1 致敏 取健康大鼠14只，隨機分為雙黃連注射液組、清開靈注射液高劑量組、清開靈注射液低劑量組、復(fù)方丹參注射液高劑量組、復(fù)方丹參注射液低劑量組、陽性對照組和陰性對照組7組，每組2只。各組隔日腹腔注射相應(yīng)的藥液，共3次。

1.2.2.2 抗血清制備 末次致敏注射后第10天采血，2 000 r/min離心10 min，分離血清。-20℃保存，2 w內(nèi)備用。

1.2.2.3 激發(fā) 另取42只大鼠隨機分為7組，分組同1.2.2.1。大鼠兩側(cè)背部剪毛，面積約3 cm×4 cm。上述各組抗血清用生理鹽水稀釋成1∶2和1∶8。在預(yù)先剪毛的左側(cè)和右側(cè)背部皮膚皮內(nèi)分別注射各相應(yīng)組別1∶2和1∶8稀釋的抗血清0.1 mL。24 h后各組靜脈注射內(nèi)含0.5%伊文斯蘭染料的致敏劑量藥液。

1.2.3 全身主動過敏試驗

1.2.3.1 致敏 取健康雄性豚鼠42只，隨機分為7組，方法同被動皮膚過敏性試驗，每組6只。隔日腹腔注射相應(yīng)的藥液，共注射3次。

1.2.3.2 激發(fā) 于第1次致敏后第10天～第14天靜脈給藥激發(fā)，激發(fā)劑量為致敏劑量的2倍。由于雙黃連注射液組、清開靈注射液高劑量組、復(fù)方丹參注射液高劑量組激發(fā)劑量應(yīng)為致敏劑量2倍時給藥體積遠遠超過豚鼠靜脈給藥的最大體積，故劑量仍給予致敏劑量，其余各組劑量為致敏劑量的2倍。

1.2.4 指標(biāo)觀察 30 min后麻醉處死各組動物，剪取背部皮膚，測量皮膚內(nèi)層的藍色斑點大小，直徑大于5 mm者為陽性。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠皮膚被動過敏試驗（PCA）結(jié)果

結(jié)果見表1。

表1 大鼠皮膚被動過敏試驗（PCA）結(jié)果 （只）

由表1可以看出，皮膚被動過敏試驗雙黃連注射液有過敏反應(yīng)；清開靈注射液高劑量組和低劑量組均出現(xiàn)過敏反應(yīng)，其他組均未出現(xiàn)過敏反應(yīng)。

2.2 按照過敏反應(yīng)癥狀評價表對豚鼠過敏反應(yīng)進行評價

結(jié)果見表2。

表2 全身主動過敏試驗結(jié)果

由表2可以看出，主動過敏試驗雙黃連注射液有4只動物過敏反應(yīng)弱陽性，清開靈注射液高劑量組有1只動物過敏反應(yīng)弱陽性。

3 討論

本研究提示全身主動過敏性試驗結(jié)果與臨床具有更好的相關(guān)性，但復(fù)方丹參注射液在兩個試驗中均顯示陰性結(jié)果，而在臨床中不斷有過敏性反應(yīng)報導(dǎo)，是中藥復(fù)方穩(wěn)定性原因還是其他原因還有待進一步研究。該研究提示新藥臨床前研究的幾種過敏性試驗部分試驗結(jié)果為陽性時，臨床應(yīng)用時應(yīng)詳細了解患者是否有過敏史，并謹慎用藥，減少因過敏反應(yīng)而引起的不良后果；新藥臨床前研究過敏性試驗為陰性的中藥復(fù)方制劑也應(yīng)密切注意患者的臨床反應(yīng)。

［1］韻磊，劉愛輝.靜滴注射用雙黃連引發(fā)過敏性皮疹3例［J］.中國誤診學(xué)雜志，2007，7（8）：1 922.

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［3］趙紅.靜滴雙黃連注射液致不良反應(yīng)2例報告［J］.青海醫(yī)藥雜志，2007，37（3）：52.

［4］涂彩然，劉洋.靜脈點滴雙黃連過敏性休克1例［J］.井岡山學(xué)院學(xué)報：綜合版，2006，27（10）：133.

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