董正華，趙雪蓮，趙延紅，李小會(huì)，楊 軼，曾福海

（陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽(yáng)712046）

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）即糖尿病性腎小球硬化癥，是糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）最主要的微血管并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致慢性腎功能衰竭的主要原因之一。其發(fā)病率在1型糖尿病中為40%～50%，2型糖尿病中約為20%，且一旦出現(xiàn)，多數(shù)患者將進(jìn)展為終末期腎病（end stage renal disease，ESRD）。對(duì)糖尿病腎病的防治研究是目前醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的重要課題之一。我們用腎氣丸合抵當(dāng)湯化裁組成通絡(luò)益腎溫陽(yáng)方，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，證實(shí)本方對(duì)大鼠糖尿病腎病模型有一定的治療效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD成年雄性大鼠60只，體重（130±20）g，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（陜）2007-001。

1.1.2 藥品與試劑 通絡(luò)益腎溫陽(yáng)方由桃仁、水蛭、熟地、山茱萸、山藥、酒大黃、炙黃芪、制附片、桂枝、澤瀉、茯苓、丹皮組成，藥物經(jīng)常規(guī)煎煮過(guò)濾，濃縮至每毫升含生藥1.438 g，置4℃冰箱備用。洛汀新（鹽酸苯那普利片，批號(hào)：X1282）；糖適平（格列喹酮片，批號(hào)：070822）；鏈脲佐菌素（STZ，批號(hào)：S0130）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與造模 SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w，用試紙法檢測(cè)尿糖、尿蛋白陰性后，隨機(jī)抽取9只作為正常對(duì)照組行假手術(shù)；其余51只作為模型組，按文獻(xiàn)方法行左側(cè)腎臟切除術(shù)合STZ腹腔注射復(fù)制DN模型［1］。造模72 h后，經(jīng)尾靜脈采血測(cè)空腹血糖，以空腹血糖≥16.7 mmol/L為糖尿病模型復(fù)制成功。造模成功后繼續(xù)喂養(yǎng)1 w，隨機(jī)抽取2只SD大鼠，測(cè)尿微量白蛋白>15 μg/mL，確定DN模型復(fù)制成功。將造模成功的47只大鼠隨機(jī)分為病理對(duì)照組16只、中藥治療組16只、西藥治療組15只。

1.2.2 給藥 正常對(duì)照組、病理對(duì)照組分別予以10 mL/（kg·d）蒸餾水灌胃；中藥治療組給予通絡(luò)益腎溫陽(yáng)方煎液（1.438 g/mL），每只10 mL/（kg·d）灌胃；西藥治療組給予洛汀新（0.104 mg/mL）合糖適平（0.156 mg/mL）混懸液，每只10 mL/（kg·d）灌胃。各組大鼠灌胃藥量按文獻(xiàn)［2］折算，灌胃量根據(jù)體重變化做相應(yīng)調(diào)整，每日1次，共持續(xù)10 w。各組大鼠自由攝食，飲水量不限。

1.2.3 標(biāo)本采集及指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1 d，代謝籠收集24 h尿液總量，檢測(cè)24 h尿蛋白定量，尿β2微球蛋白含量。開(kāi)始用藥前及治療結(jié)束后，尾靜脈采血，用羅康全活力型血糖儀及血糖試紙檢測(cè)空腹血糖。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，心臟采血，離心血清，檢測(cè)血清尿素氮、血肌酐。處死動(dòng)物后，摘取所有大鼠的右側(cè)腎臟，去包膜，電子天平稱重，計(jì)算腎臟肥大指數(shù)（腎重/體重）。

1.2.4 腎臟病理學(xué)觀察 于治療第4、6、8周時(shí)病理對(duì)照組各處死1只，剖腹取出右腎，10%中性甲醛溶液固定，作病理切片。治療第10周末，摘取各組大鼠右側(cè)腎臟，10%中性甲醛溶液固定48 h，常規(guī)組織處理，石蠟包埋，連續(xù)組織切片4 μm，HE染色，光鏡下觀察腎臟病理改變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

各組數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組內(nèi)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，正常對(duì)照組大鼠食欲旺盛，飲水正常，精神狀態(tài)良好，毛色光澤，反應(yīng)靈敏，動(dòng)作敏捷，體重顯著增加，全部存活。病理對(duì)照組大鼠飲水量、食量顯著增加，多尿，但顯著消瘦，且精神萎靡不振，反應(yīng)遲鈍，動(dòng)作緩慢，弓背蜷體，鼠毛無(wú)光澤，口唇、耳緣蒼白，糞質(zhì)稀溏，個(gè)別出現(xiàn)肢體感染和斷齒，最后存活9只。中藥治療組、西藥治療組也出現(xiàn)上述表現(xiàn)，但程度較輕，各存活9只。造模后第46天，除正常對(duì)照組外其余各組大鼠尿蛋白定性檢測(cè)都陸續(xù)出現(xiàn)陽(yáng)性，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 治療后各組大鼠尿蛋白定性比較 （只）

2.2 治療前后各組大鼠證候評(píng)分變化比較

［3-4］制定模型大鼠中醫(yī)證候評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，分值越高，癥狀越嚴(yán)重。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠證候評(píng)分變化比較 （分±s）

表2 各組大鼠證候評(píng)分變化比較 （分±s）

注：與正常對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與病理對(duì)照組比較，2）P＜0.01

組別 n 治療前 治療后正常對(duì)照組 9 7.4±0.93 7.6±0.87病理對(duì)照組 16 43.2±5.391） 83.9±2.381）中藥治療組 16 42.7±5.171） 62.5±5.191）2）西藥治療組 15 42.9±2.911） 75.1±3.651）2）

2.3 治療前后各組大鼠體重變化比較

結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠治療前后體重變化比較 （g ±s）

表3 各組大鼠治療前后體重變化比較 （g ±s）

注：與正常對(duì)照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與病理對(duì)照組比較，3）P＜0.01

組別 n 治療前 治療后正常對(duì)照組 9 215.33±5.75 492.56±17.80病理對(duì)照組 16 205.56±5.131） 146.11±37.972）中藥治療組 16 207.25±9.331） 305.00±32.322）3）西藥治療組 15 207.47±7.471） 314.67±16.122）3）

2.4 治療后各組大鼠24 h尿蛋白定量、尿β2微球蛋白含量比較

結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 治療后各組大鼠24 h尿蛋白定量、尿β2微球蛋白比較 （±s）

表4 治療后各組大鼠24 h尿蛋白定量、尿β2微球蛋白比較 （±s）

注：與正常對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與病理對(duì)照組比較，2）P＜0.01

尿β2微球蛋白（μg/mL）正常對(duì)照組 9 2.61±0.526 0.034 4±0.041 26病理對(duì)照組 9 14.52±2.7451）0.177 8±0.028 631）中藥治療組 9 10.54±1.4731）2）0.110 0±0.018 711）2）西藥治療組 9 9.55±1.4041）2）0.103 3±0.018 031）2）組別 n 24 h尿蛋白定量（mg/24 h）

2.5 治療前后各組大鼠空腹血糖變化比較

結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 治療前后各組大鼠空腹血糖變化比較 （mmol/L±s）

表5 治療前后各組大鼠空腹血糖變化比較 （mmol/L±s）

注：與正常對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與病理對(duì)照組比較，2）P＜0.01

組別 n 治療前 治療后正常對(duì)照組 9 6.10±1.03 6.68±0.72病理對(duì)照組 16 23.38±2.681） 27.67±1.281）中藥治療組 16 22.50±2.561） 16.82±1.281）2）西藥治療組 15 21.41±2.991） 15.14±1.231）2）

2.6 治療前后各組大鼠BUN、Scr比較

結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 治療后各組大鼠BUN、Scr比較 （±s）

表6 治療后各組大鼠BUN、Scr比較 （±s）

注：與正常對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與病理對(duì)照組比較，2）P＜0.01

組別nBUN（mmol/L）Scr（μmol/L）正常對(duì)照組 9 7.20±0.84 85.29±2.16病理對(duì)照組 9 17.83±1.671）210.98±7.091）中藥治療組 9 13.48±0.901）2）149.81±3.741）2）西藥治療組 9 13.44±1.141）2）153.31±2.581）2）

2.7 治療后各組大鼠腎臟肥大指數(shù)比較

結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 治療后各組大鼠腎臟肥大指數(shù)比較 （±s）

表7 治療后各組大鼠腎臟肥大指數(shù)比較 （±s）

注：與正常對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與病理對(duì)照組比較，2）P＜0.01

組別 n 腎重（g）正常對(duì)照組 9 1.162 1±0.223 0病理對(duì)照組 9 1.852 0±0.273 4中藥治療組 9 1.834 9±0.391 3西藥治療組 9 2.028 3±0.331 5體重（g）腎臟肥大指數(shù)（腎重/體重）492.56±17.80 0.002 36±0.000 48 146.11±37.97 0.013 40±0.003 761）305.00±32.32 0.006 15±0.001 721）2）314.67±16.12 0.006 49±0.001 251）2）

2.8 各組大鼠腎臟病理學(xué)觀察

圖1 第4周末病理對(duì)照組（HE×200）

圖2 第6周末病理對(duì)照組（HE×200）

圖3 第8周末病理對(duì)照組（HE×200）

圖4 第10周末病理對(duì)照組（HE×200）

圖5 第10周末西藥治療組（HE×200）

圖6 第10周末中藥治療組（HE×200）

圖7 第10周末正常對(duì)照組（HE×200）

病理對(duì)照組見(jiàn)圖1～見(jiàn)圖4，西藥治療組見(jiàn)圖5，中藥治療組見(jiàn)圖6，正常對(duì)照組見(jiàn)圖7。與正常對(duì)照組比較，病理對(duì)照組大鼠腎小球基底膜增厚，腎小球及腎間質(zhì)內(nèi)充血明顯，腎小管內(nèi)可見(jiàn)絮狀、顆粒狀或塊狀物，提示模型復(fù)制成功。動(dòng)態(tài)觀察提示病理對(duì)照組大鼠腎臟病理?yè)p害從模型建立初期已經(jīng)發(fā)生，并且呈進(jìn)行性加重。中、西藥治療組與病理對(duì)照組比較，其腎小球基底膜增厚性病變減輕，腎小管內(nèi)絮狀、顆粒狀或塊狀物減少。提示通絡(luò)益腎溫陽(yáng)方能延緩DN大鼠的腎臟病理?yè)p害。

3 討 論

中醫(yī)學(xué)雖無(wú)糖尿病腎病的概念，但對(duì)糖尿病演變成為糖尿病腎病已有一定認(rèn)識(shí)。糖尿病腎病的原發(fā)病是糖尿病，糖尿病屬中醫(yī)學(xué)“消渴”范疇。因消渴病而發(fā)展為水腫，即相當(dāng)于糖尿病并發(fā)糖尿病腎?。?］。如《圣濟(jì)總錄》云：“消渴日久，腎氣受傷，腎主水，腎氣衰疲，氣化失常，開(kāi)闔不利，水流聚于體內(nèi)而出現(xiàn)水腫?！?/p>

消渴病是一種慢性遷延性疾患，初期以陰虛燥熱為基本病機(jī)。消渴遷延多年，久病及腎，久病入絡(luò)，本虛標(biāo)實(shí)，腎虛絡(luò)瘀是糖尿病腎病的病機(jī)特點(diǎn)。本“虛”是指氣陰兩虛，陰損及陽(yáng)，陰陽(yáng)兩虛，“實(shí)”則是在正虛的前提下，血瘀絡(luò)阻、水飲濕濁等毒邪蘊(yùn)蓄［6］。根據(jù)上述病機(jī)的認(rèn)識(shí)，我們提出通絡(luò)益腎法辨治DN的思路。為體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的特色，在前期臨床及實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上［7-10］，進(jìn)一步提出通絡(luò)益腎滋陰法和通絡(luò)益腎溫陽(yáng)法，分別用于DN腎陰虛絡(luò)瘀證和腎陽(yáng)虛絡(luò)瘀證。通絡(luò)益腎溫陽(yáng)方以經(jīng)方腎氣丸合抵當(dāng)湯去虻蟲(chóng)，加黃芪而成，全方扶正祛邪，消補(bǔ)兼施，具有溫陽(yáng)滋陰、活血通絡(luò)、益腎泄?jié)嶂Вm用于DN腎虧陰陽(yáng)兩虛，偏于陽(yáng)虛兼瘀血阻絡(luò)者。

本實(shí)驗(yàn)顯示，通絡(luò)益腎溫陽(yáng)方治療10 w后，DN大鼠一般狀況較病理對(duì)照組明顯改善，體重較病理對(duì)照組明顯增加（P＜0.01）；24 h尿蛋白定量、尿 β2微球蛋白、空腹血糖、血清尿素氮、血肌酐、腎臟肥大指數(shù)均顯著低于病理對(duì)照組（P＜0.01）；腎組織病理?yè)p傷亦有明顯減輕。結(jié)果證實(shí)通絡(luò)益腎溫陽(yáng)方對(duì)DN模型大鼠具有一定治療效果。

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