李斌斌 ，李 慧 ，郭 珺 ，王 琪 ，韓建榮

（1.山西大學(xué)生物技術(shù)研究所，山西太原030006；2.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境與資源研究所，山西太原030006；3.山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太原030006）

姬松茸（Agaricus blazei Murill）又名巴西蘑菇，屬傘菌目蘑菇科蘑菇屬，原產(chǎn)于美國(guó)佛羅里達(dá)州海邊草地、加利福尼亞州南部和巴西、秘魯?shù)葒?guó)[1]。姬松茸是一種藥食兼用的珍稀食用菌，其調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤等藥用功效來(lái)源于其含有的多種生理活性物質(zhì)，如多糖、糖蛋白、核酸、甾醇類(lèi)物質(zhì)等。姬松茸多糖和多糖蛋白復(fù)合體是目前研究的重點(diǎn)[2]。

蘑菇長(zhǎng)期以來(lái)受到人們喜愛(ài)的原因是其特有的風(fēng)味和質(zhì)地，而今已被認(rèn)為是高營(yíng)養(yǎng)食物和重要的藥用生物活性物質(zhì)來(lái)源，其在生長(zhǎng)過(guò)程中積累了酚類(lèi)化合物、聚酮化合物、萜烯烴和類(lèi)固醇等多種次級(jí)代謝產(chǎn)物。有研究發(fā)現(xiàn)，蘑菇酚類(lèi)化合物是優(yōu)越的抗氧化劑和抗氧化增效劑[3]。但目前尚未見(jiàn)關(guān)于培養(yǎng)料對(duì)姬松茸多糖含量及抗氧化性影響方面的研究報(bào)道。

山西是世界最大的蘆筍產(chǎn)區(qū)[4]，食醋行業(yè)每年生產(chǎn)產(chǎn)生的醋糟達(dá)300萬(wàn)t左右[5]，因此，山西具有豐富的蘆筍老莖和醋糟資源。本試驗(yàn)對(duì)用蘆筍老莖、醋糟等栽培料栽培得到的姬松茸子實(shí)體多糖含量和抗氧化性進(jìn)行了比較分析，旨在為蘆筍老莖、醋糟等栽培料的配方篩選和優(yōu)化提供依據(jù)，促進(jìn)姬松茸在山西的發(fā)展，亦可為姬松茸多糖和抗氧化劑產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)奠定一定的基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 菌種

姬松茸（Agaricus blazei Murill）BJ菌株來(lái)自上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所。

1.2 栽培原料

選用4種配方栽培料栽培姬松茸，即配方1：主料醋糟，輔料棉籽殼；配方2：主料醋糟，輔料豆秸；配方3：主料醋糟，輔料玉米秸稈；配方4：主料蘆筍老莖，輔料棉籽殼。4種配方栽培料均按常規(guī)方法堆制處理。

1.3 試劑

β-胡蘿卜素和 1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）由Sigma公司生產(chǎn)；2，6-叔丁基-4-甲基酚（BHT）由英國(guó)的Avocado research chemicals公司生產(chǎn)；其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.4 樣品處理

在配方1～4栽培料上得到的子實(shí)體樣品編號(hào)為樣品1～4。將姬松茸子實(shí)體樣品60℃烘干至恒質(zhì)量，然后粉碎過(guò)0.250 mm篩，得到姬松茸子實(shí)體干粉，放于密封瓶中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 粗多糖的提取

粗多糖參照文獻(xiàn)[6]進(jìn)行提取。

1.6 多糖含量的測(cè)定

用苯酚-硫酸法測(cè)定姬松茸總糖含量，DNS比色法[7]測(cè)定姬松茸還原糖含量。

多糖含量=總糖含量－還原糖含量

1.7 抗氧化性物質(zhì)的提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取5 g姬松茸子實(shí)體干粉，分別加入100 mL80%的乙醇，在室溫（25℃左右）130 r/min的搖床上提取24 h，用濾紙過(guò)濾，取濾液，濾渣再進(jìn)行復(fù)提，然后合并2次濾液；濾渣烘干后稱(chēng)其質(zhì)量，濾液在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得濃縮液，然后稀釋定容待測(cè)。

1.8 抗氧化性測(cè)定

1.8.1 DPPH自由基的清除測(cè)定 按文獻(xiàn) [8]進(jìn)行測(cè)定：200 μL樣品液中加入 3.8 mL DPPH（0.08 mmol/L），充分搖勻后在室溫下避光放置24 h，在517 nm處測(cè)吸光值。用提取溶劑代替樣品液作為對(duì)照。EC50根據(jù)DPPH清除作用和樣品液濃度圖來(lái)計(jì)算，BHT作為標(biāo)準(zhǔn)。

1.8.2 還原能力測(cè)定 還原能力采用普魯士藍(lán)法測(cè)定[9-10]。

1.8.3 脂質(zhì)過(guò)氧化（LPO）抑制分析 LPO采用β-胡蘿卜素-亞油酸體系進(jìn)行分析[11]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同配方培養(yǎng)料對(duì)姬松茸子實(shí)體多糖含量的影響

從表1可以看出，栽培原料對(duì)姬松茸的多糖含量有一定的影響。用醋糟為主料（樣品1～3）栽培得到的姬松茸子實(shí)體的多糖含量明顯高于用蘆筍老莖為主料（樣品4）栽培得到的姬松茸子實(shí)體的多糖含量。在主料同為醋糟的情況下，比較豆秸、棉籽殼和玉米秸稈3種輔料，豆秸更有利于子實(shí)體多糖的合成。

表1 不同培養(yǎng)料的姬松茸子實(shí)體多糖含量比較（n=3）

2.2 不同配方培養(yǎng)料對(duì)姬松茸子實(shí)體抗氧化性的影響

2.2.1 DPPH的清除測(cè)定結(jié)果 DPPH是一種穩(wěn)定的以氮為中心的質(zhì)子自由基，其乙醇溶液呈紫色，在517 nm處有強(qiáng)烈吸收。在有自由基清除劑存在時(shí)，自由基清除劑提供一個(gè)電子與DPPH的孤對(duì)電子配對(duì)，使其褪色，在517 nm處的吸光度變小，即自由基清除劑的清除能力越強(qiáng)，吸光度越小。

由圖1可知，在4種不同配方栽培料上得到的姬松茸子實(shí)體樣品的乙醇提取物對(duì)DPPH都具有一定的清除能力。在提取物濃度為3 mg/mL時(shí)，樣品1～4對(duì)DPPH清除率分別為72.5%，51.0%，59.7%和84.0%。由此可以得出，用蘆筍老莖為主料栽培得到的姬松茸子實(shí)體（樣品4）的乙醇提取物對(duì)DPPH清除能力明顯高于用醋糟為主料栽培得到的姬松茸子實(shí)體（樣品1～3）的乙醇提取物。在主料同為醋糟的情況下，3種輔料豆秸、棉籽殼和玉米秸稈栽培得到的姬松茸子實(shí)體的乙醇提取物對(duì)DPPH清除能力有較大的影響，棉籽殼更有利于提高子實(shí)體的乙醇提取物對(duì)DPPH的清除能力。

2.2.2 還原能力測(cè)定結(jié)果 還原劑的存在會(huì)使Fe3+和鐵氰化物復(fù)合物轉(zhuǎn)化為亞鐵形式的化合物，從而使黃色的溶液變成各種不同程度的綠色和藍(lán)色溶液。通過(guò)在700 nm處測(cè)定普魯士藍(lán)的吸光度可以測(cè)定亞鐵離子的濃度。在圖2中，各樣品乙醇提取物濃度與其還原能力呈良好的線性關(guān)系，隨著提取物濃度的增加，還原能力逐漸增強(qiáng)。用蘆筍老莖為主料栽培得到的姬松茸子實(shí)體（樣品4）的還原能力明顯高于用醋糟為主料栽培得到的姬松茸子實(shí)體（樣品1～3）。在主料同為醋糟的情況下，3種輔料豆秸、棉籽殼和玉米秸稈對(duì)子實(shí)體的乙醇提取物的還原能力有較大的影響，棉籽殼更有利于提高子實(shí)體的還原能力。

2.2.3 LPO抑制分析結(jié)果 依靠β-胡蘿卜素-亞油酸體系的漂白作用可以測(cè)定該蘑菇提取物的抗氧化能力。不同抗氧化劑的存在可以中和在系統(tǒng)中形成的亞油酸自由基和其他自由基，以阻礙β-胡蘿卜素的褪色，使顏色維持很長(zhǎng)時(shí)間。本試驗(yàn)4個(gè)樣品的乙醇提取物都具有一定的LPO抑制作用（圖3），但各樣品間的抑制作用差別不大。以豆秸為輔料栽培得到的子實(shí)體（樣品2）的LPO抑制能力較弱。

2.2.4 EC50值比較 EC50值是指LPO抑制率達(dá)到50%、吸光值0.5時(shí)的還原力和DPPH清除率達(dá)到50%時(shí)提取液的有效濃度，EC50值越小，表明抗氧化能力越強(qiáng)。綜合抗氧化性的3個(gè)指標(biāo)可以看出（表2），用蘆筍老莖為主料栽培得到的姬松茸子實(shí)體（樣品4）的抗氧化性最強(qiáng)，4個(gè)樣品的抗氧化性強(qiáng)弱排序?yàn)闃悠?＞樣品1＞樣品3＞樣品2。

表2 姬松茸子實(shí)體乙醇提取物EC50值比較

3 結(jié)論與討論

多糖的測(cè)定方法很多，本試驗(yàn)運(yùn)用堿提法提取姬松茸多糖，用苯酚-硫酸法測(cè)定其多糖含量，簡(jiǎn)便、快速、靈敏、重復(fù)性好，對(duì)每種糖僅制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，顏色持久。本試驗(yàn)在精密度和準(zhǔn)確度上也取得了令人滿意的效果，對(duì)今后的姬松茸多糖提取測(cè)定具有一定的參考價(jià)值。

本試驗(yàn)用稀堿提取測(cè)得的多糖含量比文獻(xiàn)[12]熱水提取的多糖含量3.62%和2.07%高出不少。

姬松茸子實(shí)體80%乙醇提取物對(duì)于DPPH有機(jī)自由基有很好的清除作用，對(duì)β-胡蘿卜素-亞油酸氧化體系也有較好的抑制作用，有很高的還原力以及亞鐵離子螯合能力，表明其在抗衰老、抗炎癥等方面有一定作用，可進(jìn)一步開(kāi)發(fā)天然抗氧化劑來(lái)代替化學(xué)合成抗氧化劑。

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